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INTEGRADOS em
BIOTECNOLOGIA
MDULO I
TCNICAS DE CULTURA
DE CLULAS
MICROBIANAS
AULAS
Aula 1.
Preparao de meios de cultura slido (YPDA e
PDA)
Calibraes
Turbidimetria (abs vs massa seca)
Aula 2.
Transferncia de culturas em meio slido:
Leveduras e fungos filamentosos
Quantificao de densidade celular
Contagem de clulas
Contagem de CFUs
AULAS
Aula 3
Calibraes
Mtodo DNS
determinao de aucares redutores
Cintica de crescimento de uma
cultura descontnua de S. cerevisiae
Aula 4
Anlise de amostras
Discusso geral de resultados
1 Aula-Estirpes e meios
Saccharomyces cerevisiae
YPD
Peptona 20 g/L
Extrato de levedura 10 g/L
Glucose 20 g/L
Acertar a pH 5
O meio YPDA YPD +20 g/L agar.
Aspergillus niger
Adicionar 15 mL de gua
Secar a 80 C as membranas
o
Pesar membranas
Turbidimetria
Determinao da absorvncia da amostra inicial a 630 nm
Verificar se o valor menor que 1 (2 se for no ELISA)
Fazer as vrias diluies da suspenso celular
De modo a ter cerca de 10 pontos,
Ler ABS a 630 de cada diluio
Abs
Cmara de Neubauer
Colocar suspenso de
leveduras na cmara
Contar ao microscpio
2 Aula MTODOS DE
QUANTIFICAO
DE CLULAS
5 quadrados
(20 cel cada)
1 mm
5*4 = 20
quadrados
h = 0.1 mm
(10 cel cada)
2 Aula MTODOS DE
QUANTIFICAO
DE CLULAS
Meio slido
Placa Tubo inclinado
colnia
2 Aula Transferncia
de culturas
Curva de crescimento
Multiplicao e
morte celular
Adaptao clulas dX m
mX X = Xo et td
dt ln 2
3 Aula CINTICA DE
CRESCIMENTO
Procedimento experimental
Inocular 200 mL de meio YPD com 20 mL de uma subcultura de
S. cerevisiae
Retirar assepticamente 3 mL de amostra no tempo 0
Incubar a 30 oC em agitador orbital
Retirar novas amostras de cerca de hora a hora
Analisar as amostras (em caso de impossibilidade de
anlise, colocar a amostra no frigorfico ou congelador)
Anlise das amostras
Ler pH da suspenso
Ler absorvncia a 630 nm
Centrifugar a amostra e congelar sobrenadante para determinao
dos acares redutores mtodo DNS (a realizar na 4 aula).
3 Aula Calibraes
Resumo calendarizao