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RADICALES LIBRES

Los radicales libres son molculas inestables y muy reactivas debido a que en el orbital
ms externo de su estructura tiene uno o ms electrones sin aparear. Para conseguir
estabilidad sustrae un electrn a cualquier molcula vecina, lo que en qumica quiere
decir que "oxida" la molcula, alterando su estructura y convirtindola a su vez en otro
radical libre ansioso por captar un electrn. Se genera as una reaccin en cadena que
daar a muchas clulas y puede ser indefinida si es que no hay una reversin de este
proceso.

Desde el punto de vista molecular son pequeas molculas ubicuitarias y difusibles que
se producen por diferentes mecanismos entre los que se encuentran la cadena
respiratoria mitocondrial, la cadena de transporte de electrones a nivel microsomal y en
los cloroplastos, y las reacciones de oxidacin, por lo que producen dao celular
(oxidativo), al interactuar con las principales biomolculas del organismo; tambin los
procesos normales del organismo producen radicales libres como el metabolismo de los
alimentos, la respiracin y el ejercicio, siendo la principal fuente de origen de estos la
respiracin, ya que entre un 1 y un 3% del oxgeno consumido se transforma en
Especies Reactivas de Oxgeno (EROs). Sin embargo, las tambin se producen en el
organismo como respuesta a la exposicin a radiaciones ionizantes, rayos ultravioletas,
contaminacin ambiental, humo de cigarrillos, algunos frmacos, hiperoxia, exceso de
ejercicio e isquemia, e incluso durante el proceso de digestin de los alimentos.

No todos los radicales libres son peligrosos pues, por ejemplo, las clulas de nuestro
sistema inmune crean radicales libres para matar bacterias y virus constituyendo un
mecanismo de defensa del organismo frente a estos agresores; participan en la
fagocitosis, favorecen la sntesis de colgeno, favorecen la sntesis de prostaglandinas,
activan enzimas de la membrana celular, disminuyen la sntesis de catecolaminas por
las glndulas suprarrenales, modifican la biomembrana y favorecen la quimiotaxis.

Como es imposible prevenir la produccin in vivo de todos los radicales libres, no es


sorprendente que se hayan desarrollado en el cuerpo una cantidad de defensas
antioxidantes, de hecho, estn presentes antioxidantes enzimticos y no enzimticos.
Las enzimas antioxidantes incluyen el superxido dismutasa (SOD), la glutatin
peroxidasa (GPX), y la catalasa, mientras que los principales antioxidantes no
enzimticos incluyen la vitamina C y la E, el cido a-lipoico, los carotenoides, la
bilirrubina y la ubiquinona.

MECANISMOS DE PRODUCCION DE RADICALES LIBRES

Metabolismo Celular del Oxgeno


Reacciones de xido-Reduccin

Autooxidacin de catecolaminas
Sntesis de Prostaglandinas
Oxidacin de Hipoxantina y Xantina
Fagocitosis
Reaccin de Fenton y Haber Weiss
Fuentes adicionales de formacin de radicales libres son las reacciones de
autooxidacin no enzimtica de la ubiquinona y tioles, y el transporte y captacin de
oxgeno por hemoglobina y mioglobina.

1. XANTINA OXIDASA
La enzima xantino oxidasa (XO) est ampliamente distribuida en diferentes especies,
desde las bacterias hasta el hombre y representa otra fuente de radicales libres. Esta
enzima participa en el camino degradativo de las bases pricas, catalizando la
transformacin de hipoxantina en xantina y est en cido rico en dos pasos sucesivos
de oxidacin.
El AMP se transforma en adenosina que luego es desaminada por la adenosina
desaminasa para dar inosina. La inosina se hidroliza dando la base prica hipoxantina
y D-ribosa. La hipoxantina se oxida suavemente a xantina y luego a cido rico por
accin de la xantina oxidasa (una flavoprotena que contiene un tomo de molibdeno y
cuatro centros de Fe-S en su grupo prosttico), en todas estas reacciones el oxgeno es
el aceptor de electrones.
Por otro lado el catabolismo de GMP tambin proporciona cido rico como producto
final, en donde se hidroliza primero para dar el nucletido guanosina, que luego se
descompone dando guanina libre, la guanina sufre un desplazamiento hidroltico de su
grupo amina para convertirse en xantina, que a su vez se transforma en cido rico, por
accin de la xantina oxidasa. El cido rico se encuentra a pH fisiolgico como urato,
que es el producto final de excrecin del catabolismo de la purina en el hombre, siendo
excretado como tal en la orina.
La amplia distribucin de esta enzima citoslica, sugiere un rol importante en las
condiciones patolgicas tales como dao por isquemia de una amplia variedad de
rganos, particularmente en la mucosa intestinal.

2. TRANSPORTE ELECTRNICO EN LA CADENA RESPIRATORIA


MITOCONDRIAL

Probablemente sea esta la mayor fuente de produccin de radicales libres en la clula.


Esta circunstancia se debe a la fuga de electrones que tiene lugar durante el trnsito de
los mismos por los componentes de la cadena de transporte electrnico en la respiracin
aerobia. Dichos electrones fugados van a producir una reduccin parcial del O2 y,
como consecuencia, se generan radicales superxido.

3. PRODUCCION DE RADICALES DE OXIGENO POR CELULAS FAGOCITICAS


Como se ha podido comprobar en los casos anteriores, los radicales de oxgeno se
generaban como subproductos no deseados de ciertos procesos metablicos, pero
algunas clulas producen estas sustancias con fines especficos, tal es el caso de la
produccin de radicales superxido por las clulas fagocticas (macrfagos,
polimorfonucleares). Este tipo de clulas tienen, entre otras, una misin defensiva,
utilizando para ello toda una serie de mecanismos agresivos contra agentes extraos,
uno de estos consiste en generar radical superxido a partir del O2 gracias a un complejo
enzimtico ubicado en la membranas que toma electrones del NADPH y los transfiere
al oxgeno, el balance neto del complejo proceso.
Dada la baja toxicidad que el radical superxido tiene en el caso de los
microorganismos, se piensa que lo que en realidad los daa es algn radical derivado
del superxido, como el OH., que resulta ser mucho ms txico que el anterior. En la
formacin del radical hidroxilo intervendran metales pesados y H2O2 producido este en
la reaccin de la superxido dismutasa (SOD) con el radical superxido. Esta reaccin
resultara beneficiosa para las funciones de defensa frente a agentes extraos mientras
permanezca controlada, pero en algunos casos parte de las molculas oxidantes
escapan al exterior de la clula, y en determinadas condiciones pueden daar tejidos
adyacentes tras la formacin de radicales hidroxilo. Se postula que en este caso jugaran
un importante papel iones de hierro presentes en el medio extracelular, aunque la
cantidad de este elemento en fluidos orgnicos, que no est unido a lactoferrina o
transferrina, es inapreciable en condiciones normales, no obstante el hierro podra
proceder del elemento fagocitado. En este sentido la capacidad de los asbestos para
inducir transformacin maligna de clulas se piensa que es debida al hierro que
contienen, de tal forma que este reaccionara con el H2O2 que procede del radical
superxido (producido por las clulas fagocticas presentes en el pulmn) para generar
radical hidroxilo, daando as tejidos adyacentes.

EFECTOS DE LOS RADICALES LIBRES SOBRE LAS BIOMOLECULAS

El dao celular producido por las especies reactivas del oxgeno ocurre sobre diferentes
macromolculas:

1. LPIDOS.

Es aqu donde se produce el dao mayor en un proceso que se conoce como


peroxidacin lipdica, afecta a las estructuras ricas en cidos grasos poliinsaturados, ya
que se altera la permeabilidad de la membrana celular producindose edema y muerte
celular. La peroxidacin lipdica o enranciamiento oxidativo ocurre en tres etapas:
iniciacin, propagacin y terminacin.

La iniciacin consiste en la extraccin de un electrn de un carbono a un doble enlace


por parte de un iniciador como el OH, los radicales hidroxilo se forman cerca de la
membrana son capaces de extraer tomos de hidrgeno de los fosfolpidos que la
componen, despus de esta reaccin aunque el hidroxilo original se ha inactivado, se
forma as un radical alquil(L) el que despus de un arreglo molecular (dieno conjugado),
puede reaccionar con el oxgeno para originar el peroxill(LOO), este puede reaccionar
con otros cidos grasos de la membrana, formando ms radicales lipdicos, por adicin
de oxigeno se reduce a hidroperxido(LOOH), la propagacin de la peroxidacin se va
a generar otro alquil en cido graso que se encuentra en la membrana. La reaccin
termina dando lugar a puentes de cruzados (L-L)
2. PROTEINAS.

En protenas y carbohidratos, los radicales libres pueden inducir fragmentacin con la


prdida de la funcin de estas molculas.

El radical hidroxilo es muy reactivo con las protenas y puede causar modificaciones en
casi todos los residuos de aminocidos, pero en particular ataca a la tirosina,
fenilalanina, triptofano, histidina, metionina y cistena, forma entrecruzamientos de tipo
covalente e induce la fragmentacin de la cadena polipeptdica, lo que se traduce en
una prdida de la funcin, o en mayor susceptibilidad a las enzimas proteolticas. Las
protenas oxidadas son fcilmente degradadas por enzimas proteolticas debido a la
formacin de grupos carbonilo, a la creacin de nuevos grupos N-terminales, o a
cambios conformacionales de la molcula. Datos experimentales muestran que el
radical peroxinitrito (ONOO-) oxida a las protenas membranales y citoplsmicas,
afectando su naturaleza fsica y qumica.

Diversas reacciones de oxidacin pueden convertir algunos residuos de aminocidos,


como la prolina, la arginina y la lisina, a derivados de tipo carbonilo. La presencia de
este grupo qumico se ha utilizado como un parmetro para evaluar el dao oxidativo en
las protenas.

3. CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN).

El dao provocado a nivel del ADN por los radicales libres puede generar mutaciones
somticas, que llevaran a la sntesis de protenas defectuosas, y posiblemente a la
generacin de transformaciones malignas.

El metabolismo aerbico produce radical superxido O2, perxido de hidrgeno H2O2 e


hidroxilo. Estos radicales producen daos en el ADN, y una de las principales
alteraciones que originan es la transformacin de la Guanina (G) en 8-oxo-7,8- dihidro-
desoxiguanina que aparea con la Adenina (A). La 8-oxo-7,8-dihidro- desoxiguanina
recibe el nombre abreviado de 8-oxo-G. Esta alteracin del ADN produce
transversiones: GCTA. La Timidina se convierte en Glicol de timidina.

Si el H2O2 llega al ncleo, reacciona con el hierro ferroso, generando radical hidroxilo
que ataca en ese mismo lugar al azcar o a la base, produciendo roturas de la hebra y
modificacin en las bases. Estas lesiones pueden dar lugar a mutaciones y a fenmenos
carcinognicos.

TECNICAS DE MEDICION DE LOS RADICALES LIBRES

Un nmero creciente de estudios subrayan que los radicales libres estn implicados no
solamente en fenmenos agudos como los traumatismos o isquemia, pero tambin en
la gnesis y el desarrollo de numerosas patologas como las enfermedades
cardiovasculares, la diabetes, el cncer, las enfermedades inflamatorias y el declive del
sistema inmunitario. Es urgente por lo tanto el poder evaluar de forma precisa el estado
de las defensas de los individuos respecto a la agresin de los radicales libres.
1. KIT DE PRUEBA DE RADICALES LIBRES: CHECK-UP

El Check-Up es un kit simple, rpido y confiable de la prueba diseado para determinar


el nivel de la tensin del radical libre dentro del cuerpo. Cuando los radicales libres
atacan las paredes de sus clulas de cuerpo, los subproductos oxidados tales como
MDA (Malondialdehyde) se producen. La prueba compara el cambio del color en una
muestra de la orina contra una carta de color, el rojo ms oscuro es el color ms oxidado.
El rojo cuanto ms suave es el color, es menos oxidado su cuerpo. El MDA
(Malondialdehyde), es un subproducto cuando los radicales libres oxidan la grasa, se
reconoce como medida estndar para determinar el grado de oxidacin en las clulas
de cuerpo. Despus de seguido el tratamiento se utiliza el Check-Up para reexaminar.

2. d-ROMs test: determinacin calorimtrica de metabolitos reactivos del


oxgeno.

Los radicales libres del oxgeno son tomos, simples o agrupados; entre estos tomos,
al menos uno pertenece al oxgeno y posee uno o ms electrones desapareados en
uno de sus orbitales ms externos. La presencia de electrones desapareados es la
causa de la inestabilidad de los radicales libres, los cuales tienden a reaccionar con
cualquier molcula orgnica con la cual entren en contacto (glcidos, lpidos,
aminocidos, protenas, nucletidos, etc.) en el interior de la clula. Cuando esto ocurre,
de la reaccin mencionada se generan unos subproductos, llamados metabolitos
reactivos del oxgeno (Reactive OxygenMetabolites), o ROMs.

La prueba de d-ROM utiliza el principio de la reaccin de Fenton: mediante la mezcla de


una muestra biolgica con un tampn cido (reactivo R1), los iones de transicin de
nueva creacin de metal (hierro o cobre) cataliza la descomposicin de hidroperxido,
la generacin de nuevas especies de radicales, tales como hydroxyperoxyl (ROO +) y
alcoxilo (RO +).

Mediante la adicin de un cromgeno (N, N-dietil-paraphenylendiamine, reactivo R2)


que tiene la capacidad de donar un electrn y un cambio de color cuando se oxidan por
los radicales libres, y el uso de la lectura fotomtrica disponible con el FRAS 4 equipos
analticos dedicados, es posible cuantificar el nivel de hidroperxidos disponibles en la
muestra.

El principio de la prueba d-ROMs y las reacciones se describen acontinuacin:

1a) R-OOH + Fe2+ => R-O* + Fe3+ + OH-

1b) R-O* + A-NH2 => R-O-+ [A-NH2*]+ Para los radicales alcoxilo

2a) R-OOH + Fe3+ => R-OO* + Fe2+ + H+

2b) R-OO* + A-NH2 => R-OO-+ [A-NH2*]+.para los radicales peroxilo donde:
- R-OOH es un hidroperxido genricos - * RO es el radical alcoxilo de un hidroperxido
genricos - R-OO * es el radical hidroperoxilo de un genrico hidroperxido - A-NH2 es
N, N-dietil-paraphenylendiamine, el sustrato cromognico de la prueba d-ROMs - [A-
NH2 *] + es el catin radical de color del sustrato cromognico

Finalmente, este derivado es cuantificado por va fotomtrica: la intensidad de


coloraciones est directamente relacionada con la concentracin de ROMs (de acuerdo
con la ley general de la fotometra de Lambert- Beer).

El valor de referencia del test, terminado con una muestra de aproximadamente 5,000
sujetos sanos, deber estar comprendido entre 250 y 300U.CARR (Unidades Carratelli:
1 CARR U = 0.08mg/100ml H2O2), independientemente de gnero y edad del sujeto. Sin
embargo, los neonatos presentan valores claramente inferiores, mientras que las
mujeres embarazadas poseen valores superiores a las 300U.CARR.

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