ALUR PERCOBAAN

PENENTUAN KADAR PROTEIN DENGAN METODE BIURET

I. Persiapan Sampel

1 gr Sampel Protein
(s)
- Dihancurkan dengan mortal dan alu
- + 10 mL aquades

Filtrat Residu
- Disentrifuge
- Didekantasi

Keruh Tidak Keruh

- Dituangkan ke dalam tabung reaksi - Dilakukan pengenceran
- + aquades sampai volume total
masing-masing 1 Ml
- + 1 mL TCA 10%
- Disentrifuge pada 300 rpm selama
10 menit
- Didekantasi Larutan Protein

Filtrat Residu
+ 2 mL etil ester
-
Dikocok hingga homogeny
-
Disentrifuge
-
Didiamkan hingga mengering pada suhu
-
kamar
- + 6 mL reagen Biuret
- Diamati dan dicatat perubahan yang
terjadi
Endapan Larut
 II. Pembuatan Standar

Larutan induk protein 10

mg/ml
- diencerkan dengan labu ukur 10 mL
- diencerkan dari 5-4-3-2-1

1 mL Larutan 1 mL Larutan 1 mL Larutan 1 mL Larutan 1 mL Larutan

Standar Standar Standar Standar Standar
Protein (1 Protein Protein Protein Protein
mg/ml) (2 mg/ml) (3 mg/ml) (4 mg/ml) (5 mg/ml)
- Dituangkan - Dituangkan - Dituangkan - Dituangkan - Dituangkan
ke dalam ke dalam ke dalam ke dalam ke dalam
tabung tabung tabung tabung tabung
reaksi I reaksi II reaksi III reaksi IV reaksi V

- + 5 mL reagen Biuret
- Dikocok hingga homogen
- Didiamkan pada suhu ruang 30 menit

Warna Ungu
Stabil

- Diukur nilai absorbansi pada = 540 nm

- Diamati dan dicatat perubahan yang terjadi

Hasil Hasil Hasil Hasil Hasil

Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi Absorbansi
III. Penetapan Absorbansi Larutan Blanko

1 mL Aquades

- Dituangkan ke dalam tabung reaksi

- + 5 mL reagen Biuret
- Dikocok hingga homogen
- Didiamkan pada suhu ruang 30 menit

Warna Biru
Jernih

- Diukur nilai absorbansi pada = 540 nm

- Diamati dan dicatat perubahan yang terjadi

Hasil Absorbansi

IV. Penetapan Absorbansi Larutan Sampel

1 mL Sampel Protein

- Dituangkan ke dalam tabung reaksi

- + 5 mL reagen Biuret
- Dikocok hingga homogen
- Didiamkan pada suhu ruang 30 menit

Warna Ungu
Jernih

- Diukur nilai absorbansi pada = 540 nm

- Diamati dan dicatat perubahan yang terjadi

Hasil Absorbansi