Professional Documents
Culture Documents
INTEGRANTES:
LIMA-PER
INDICE
1
1.0 RESUMEN
2
2.0 INTRODUCCION
En casi todos los procesos que ocurren en las clulas estn presentes las protenas.
carboxilo de un aminocido con el grupo amino del otro aminocido, lo cual da lugar
3
3.0 PRINCIPIOS TEORICOS
PROTENA
Estructuras:
1. Estructura primaria:
Es la secuencia de aminocidos de la protena en forma lineal. Esta estructura
estn enlazados por medio de enlaces peptdicos.
2. Estructura secundaria:
Es la secuencia de aminocidos en el espacio. Este tipo de estructura de las
protenas se adopta gracias a la formacin de enlaces de hidrgeno entre los
grupos carbonilo (-CO-) y amino (-NH-) de los carbonos involucrados en los
enlaces peptdicos de aminocidos cercanos en la cadena.
o La a (alfa)-hlice :Es la estructura que se forma al enrollarse
helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria.
o La conformacin beta:En esta disposicin los aminocidos no forman una
hlice sino una cadena en forma de zigzag.
3. Estructura terciaria:
Informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al
plegarse sobre s misma originando una conformacin globular. Aparecen varios
tipos de enlaces: el puente disulfuro, los puentes dehidrgeno, los puentes
elctricos, las interacciones hidrfobas)
4. Estructura cuaternaria:
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de
varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo
proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de
protmero
4
Desnaturalizacin
Es una prdida de la estructura tridimensional suficiente que puede causar prdida
de la funcin. Se forma un conjunto de cadenas polipeptdicas con distinto grado de
plegamiento. La desnaturalizacin no significa que siempre se obtenga la cadena
polipptidica totalmente desplegada. Los productos de desnaturalizacin en
solucin se agregan fsicamente y segn las condiciones de pH y fuerza inica,
precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificacin desnaturalizante es crear las
condiciones donde la protena de inters no se desnaturalice mientras que los otros
componentes se desnaturalicen y precipiten.
Agentes desnaturalizantes:
Temperatura
pH
Polaridad del disolvente
Fuerza inica
Punto isoelctrico
Aminocidos
5
Reaccin de Biuret
Reaccin de xantoproteica
Ninhidrina
Es un hidrato del carbono y un poderoso agente reactivo comn para observar
las bandas de separacin de aminocidos y determinar a los aminocidos.
Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH esta entre 4-8, dando una
coloracin que vara de azul a violeta intenso
Reaccin de la ninhidrina
Es una prueba tanto para protenas como para
aminocidos. En aquellos casos que no da positiva la
prueba de biuret, da positiva la de lninhidrina e indica
que no hay protenas pero si aminocidos libres.
Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son
muy usados en la separacin de protenas y en la preparacin de filtrados libres
de protenas. A pH neutro por lo general las protenas tienen carga neta negativa
y se combinan fcilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la
carga producen la precipitacin. A pH por debajo del punto isoelctrico en
cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta positiva.
Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio.
6
4.0 DETALLES EXPERIMENTALES
4.1 Materiales:
1 luna de reloj
1 balanza
1 gradilla
Cocinilla elctrica
2 vasos de precipitado de 400mL
1 vaso de precipitado de 100mL
algodn
embudo
4.2 Reactivos:
Solucin de albmina
NaOH al 10%
Ninhidrina
HNO3 concentrado
NH4OH
CH3COOH
CuSO4 al 5%
BaCl2 al 5%
(CH3COO)2Pb al 5%
cido pcrico
Acido fosfomolibdico
7
4.3 PROCEDIMIENTO:
PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE ALBMINA
Se extrajo la clara de un huevo y se coloc en una probeta. La misma
cantidad de volumen se agreg de agua y se procedi a colocar en un vaso
de precipitados para batir de forma que quede la solucin homognea y se
observe la espuma. Para evitar que pase la espuma con la ayuda de una
gasa se procedi a filtrar.
1. REACCIN DE COLORACIN
a) REACCIN DE BIURET
En un tubo de ensayo se coloc 2 mL de albmina y 3 mL de NaOH al 10%
y se agreg gota a gota el CuSO4
b) REACCIN XANTOPROTEICA
En un tubo de ensayo se coloc 3mL de albmina con 1 mL de c. Ntrico
concentrado. Se someti a un bao de agua caliente. Al enfriar se aadi
NH4OH.
c) REACCIN DE LA NINHIDRINA
Se coloc 5 mL de albmina con 0,5 mL de ninhidrina al 0.1 % y se llev a
un bao mara hasta que tome color prpura. Se agreg 1 gota de c.
Actico y 1 mL de cloroformo se agit y se anot las observaciones.
2. REACCINES DE PRECIPITACIN
REACCINES DE PRECIPITACIN
9
SALES METALICAS:
10
5 REACCIONES QUIMICAS
11
2.0 REACCIN DE PRECIPITACIN
12
B) precipitacin con sales neutras: se observa un precipitado amarillo y con el filtrado un
coagulo blanco
Solucin amarillo
fosforescente fuerte
Solucin amarillo
opaco
13
6 DISCUSIN DE RESULTADOS
a. Reaccin de Biuret
Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos ya que
se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminocidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) e hidrxido de sodio. La
reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin
de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
b. Reaccin de xantoproteica
La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de
grupos bencnicos, tirosina, fenilalanina y triptfano, obtenindose nitrocompuestos de
color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del
cido pirmico o trinitrofenol). En esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico
presente en dichos aminocidos. Las manchas amarillas en la piel se causan por el cido
ntrico son el resultado de una reaccin xantoproteica.
c. Reaccin de la Ninhidrina
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con la Ninhidrina:
violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo
para la prolina e hidroxiprolina y caf para la asparagina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral. Esta reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes en
pptidos y protenas.
REACCIN DE PRECIPITACIN
a. Reaccin de precipitacin con sales metlicas
A pH 7 y por encima de l, las protenas estn cargadas negativamente, as que la adicin
de metales cargados positivamente neutraliza la carga y la protena precipita. La
precipitacin por metales pesados es, por lo tanto ms efectiva a valores de pH neutro o
ligeramente alcalino, pero la solucin no puede ser muy alcalina por que se corre el riesgo
de que se precipiten hidrxidos de los metales.
14
7 CONCLUSIONES
Cuando las protenas se tratan por cido ntrico concentrados dan una coloracin
amarilla que pasa a naranja por adiccin de amoniaco. Se debe a los ncleos
aromticos que se nitran formando cidos pcrico y despus de amonio por el
amoniaco.
8 RECOMENDACIONES
http://tecniciencia.net/desnaturalizacion-de-las-proteinas-y-agentes-
desnaturalizante/
http://gmein.uib.es/moleculas/fuerzas_proteinas/fuerzaproteinasjmol.html
Gonzles Rodriguez, Lucia . Manual de Laboratorio Bioqumica I. Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia.
Bogot 1997.
http://www.diciva.ugto.mx/directorio/josebar/documentos/Practicas%20de%2
0Bioqu%C3%ADmica%202009.pdf
16
ANEXOS:
18
5. Cmo se prepara el reactivo de Millon?
Disolver 10 g de mercurio en 20 ml de cido ntrico fro. Cuando la disolucin se
completa y haya cesado el desprendimiento de humos pardos, adicione 60 ml de
agua. Despus de varias horas, decantar el lquido sobrenadante y guardar en un
frasco obscuro. Preparacin alternativa: Prepare una solucin v/v de sulfato
mercrico al 15% en cido sulfrico al 15%.
Prueba de Milln:
A 2 ml de la muestra aada 5 gotas de reactivo de Milln, mezcle bien y caliente
cuidadosamente durante 30 segundos sobre una pequea flama. El reactivo
produce un precipitado blanco que por la accin del calor se torna un color rosado
o rojo ladrillo. Un exceso de reactivo produce un color amarillo que no es una
prueba positiva.
19
La desnaturalizacin puede ser provocada por diferentes causas o
Agentes desnaturalizantes de tipo fsico o qumico. Destacaremos dos de ellos:
uno fsico (aumento de temperatura) y otro qumico (alteracin del pH).
a) Aumento de temperatura.
-Los aumentos de temperatura provocan una mayor agitacin molecular que hace
que las interacciones dbiles que mantienen estable la conformacin de la
protena terminen por ceder con la consiguiente desnaturalizacin.
b) Alteracin del pH.
-Estas alteraciones causan variacin en el grado de ionizacin
Conjugadas
NOMBRE COMPONENTE NO PROTEICO
Nucleoprotenas cidos Nucleicos
Lipoprotenas Lpidos
Fosfoprotenas Grupos fosfatos
Metaloproteinas Metales
Glucoprotenas Monosacridos
20
9. Qu funcin cumplen las protenas en nuestro organismo de tres ejemplos.
Las protenas tienen una funcin defensiva, ya que crean los anticuerpos y
regulan factores contra agentes extraos o infecciones. Toxinas bacterianas, como
venenos de serpientes o la del botulismo son protenas generadas con funciones
defensivas. Las mucinas protegen las mucosas y tienen efecto germicida. El
fibringeno y la trombina contribuyen a la formacin cogulos de sangre para evitar
las hemorragias. Las inmunoglobulinas actan como anticuerpos ante posibles
antgenos.
Las protenas tienen otras funciones reguladoras puesto que de ellas estn
formados los siguientes compuestos: Hemoglobina, protenas plasmticas,
hormonas, jugos digestivos, enzimas y vitaminas que son causantes de las
reacciones qumicas que suceden en el organismo. Algunas protenas como la ciclina
sirven para regular la divisin celular y otras regulan la expresin de ciertos genes.
Las protenas cuya funcin es enzimtica son las ms especializadas y
numerosas. Actan como biocatalizadores acelerando las reacciones qumicas del
metabolismo.
Las protenas funcionan como amortiguadores, manteniendo en diversos medios
tanto el pH interno como el equilibrio osmtico. Es la conocida como funcin
homeosttica de las protenas.
La contraccin de los msculos travs de la miosina y actina es una funcin de las
protenas contrctiles que facilitan el movimiento de las clulas constituyendo las
miofibrillas que son responsables de la contraccin de los msculos. En la funcin
contrctil de las protenas tambin est implicada la dineina que est relacionada
con el movimiento de cilios y flagelos.
La funcin de resistencia o funcin estructural de las protenas tambin es de gran
importancia ya que las protenas forman tejidos de sostn y relleno que confieren
elasticidad y resistencia a rganos y tejidos como el colgeno del tejido conjuntivo
fibroso, reticulina y elastina elastina del tejido conjuntivo elstico. Con este tipo de
protenas se forma la estructura del organismo. Algunas protenas forman
estructuras celulares como las histonas, que forman parte de los cromosomas que
regulan la expresin gentica. Algunas glucoprotenas actuan como receptores
formando parte de las membranas celulares o facilitan el transporte de sustancias.
Si fuera necesario, las protenas cumplen tambin una funcin energtica para el
organismo pudiendo aportar hasta 4 kcal. de energa por gramo. Ejemplos de la
funcin de reserva de las protenas son la lactoalbmina de la leche o a
ovoalbmina de la clara de huevo, la hordeina de la cebada y la gliadina del grano
de trigo constituyendo estos ltimos la reserva de aminocidos para el desarrollo del
embrin.
Las protenas realizan funciones de transporte. Ejemplos de ello son la
hemoglobina y la mioglobina, protenas transportadoras del oxgeno en la sangre en
los organismos vertebrados y en los msculos respectivamente. En los invertebrados,
la funcin de protenas como la hemoglobina que transporta el oxgeno la realizas la
hemocianina. Otros ejemplos de protenas cuya funcin es el transporte son
citocromos que transportan electrones e lipoprotenas que transportan lpidos por la
sangre.
21