CULTIVO DE MICROORGANISMOS

I. OBJETIVOS
Conocer diversas formas de cultivo de microorganismos
Diferenciar cultivos y aislamiento
II. INTRODUCCION
En el laboratorio de Microbiologa la muestra biolgica es estudiadad y en
ello se puede encontrar varios tipos de microorganismo por lo que es
necesario manejar diversas tcnicas que nos permitan cultivarla.

III. MARCO TEORICO

SIEMBRA
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra
(inculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
para su desarrollo y multiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo
se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Que se efecten aspticamente.
Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estn esterilizados
Que se realicen solo los manipuleos indispensables
Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando
un mechero o bien Flujo laminar.
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los
requerimientos del microorganismo a estudiar.
Medios slidos:
Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa o caja de
Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente
fundido. Este mtodo se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por
inmersin. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra
de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml.
aprox.). Este mtodo se utiliza para microorganismos anaerobios
facultativos y microaeroflicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el
inculo. Con ayuda de una esptula de Drigalsky se extiende el
inculo hasta su absorcin total por el medio de cultivo. Este tipo de
siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estra: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido y se deja solidificar.
 Existen distintas tcnicas para la siembra en estras, el objeto es obtener
colonias aisladas:
PLACAS
Tcnica A Consiste en cargar el ansa con
la muestra y hacer estras paralelas en la
cuarta parte de la superficie de la placa, se
quema el ansa, se enfra, se gira la placa a
90 y se vuelve a estriar tocando 3 o 4
veces el rea sembrada inicialmente y
cubriendo otro cuarto de la placa. Por
ltimo, sin quemar el ansa, se estra el
resto de la superficie sin sembrar.

Tcnica B Con el ansa cargada se hacen 3

o 4 estras; se quema el ansa, se hacen 3 o
4 estras perpendiculares a las anteriores,
se quema el ansa y se repite el
procedimiento hasta agotar la superficie de
la placa.

TUBOS

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml

de medio de cultivo fundido y estril, se inclina el tubo y se deja enfriar.
 El inculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:
En profundidad con ansa de punta: se
pica con el ansa el cultivo a sembrar y
se introduce mediante punsin en el
medio contenido en la parte inferior del
tubo.

En superficie con ansa de aro: se pica

con el ansa el cultivo a sembrar y se
esparce el mismo sobre la superficie
en bisel en forma de zigzag.

IV. MATERIALES

4 erlemeyer de 100ml 8 tubos de ensayo con medio

liquido
8 cajas de petri mechero
Asa de siembra Muestras liquidas

V. RESULTADOS
VI. CUESTIONARIO

1. CUNDO REALIZARA CULTIVO POR DILUCIONES?

Se utiliza cuando vamos a utiliza medios de cultivos lquidos. Si el

microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayor
cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible
obtenerlo en cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del
medio de cultivo apropiado. Cuando la muestra este muy diluida
contendr solamente la bacteria que buscamos. Aunque es
recomendable confirmar mediante el procedimiento de la siembra en
placa la pureza del cultivo que se aisl de la manera descrita.

2. CMO SE REALIZA LOS CULTIVOS POR DILUCIONES EN

ALIMENTOS Y AGUA? EXPLIQUE
 A partir de muestras lquidas:

Para muestras lquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc.) en las

cuales la distribucin de microorganismos es homognea o fcilmente
homogeneizable por medios mecnicos (agitacin, etc.).
Para muestras congeladas de un alimento originalmente lquido o
licuable, fundir por completo en bao de agua de 40 a 45C un tiempo
mximo de 15 minutos y homogeneizar agitando vigorosamente.

Para la parte lquida de una muestra heterognea la cual sea considerada

suficientemente representativa de la muestra total (por ejemplo la fase
acuosa de grasas animales y vegetales).

a) Agitar la muestra manualmente con 25 movimientos de arriba a abajo en

un arco de 30 cm efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 1 ml
de la muestra y diluir con 9 ml del diluyente el cual debe encontrarse a
una temperatura similar a sta, evitando el contacto entre la pipeta y el
diluyente.
b) Siempre que la cantidad de muestra lo permita, tomar alcuotas
mayores, por ejemplo volmenes de 10 u 11 ml, diluidos con 90 o 99 ml,
de la misma forma que se describi anteriormente

A partir de muestras slidas o semislidas.

Las muestras slidas y semislidas congeladas, deben descongelarse en

refrigeracin de 4 a 8C durante 18 horas y no ms de 24 horas antes de
proceder a su anlisis.

1. Pesar una cantidad de 10 u 11 g de la muestra por analizar en un recipiente

o bolsa plstica estriles de tamao adecuado.

2. Adicionar un volumen de 90 a 99 ml del diluyente llevado a una temperatura

similar a la de la muestra.

3. Operar la licuadora o el homogeneizador peristltico de 1 a 2 minutos hasta

obtener una suspensin completa y homognea segn se indique en la tcnica
correspondiente para cada alimento. An en los equipos ms lentos, este
tiempo no debe exceder de 2,5 minutos.

4. Permitir que las partculas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad

deseada tomando de las capas superiores de la suspensin.

Cuando la dilucin primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar ms

diluyente, lo cual debe tomarse en cuenta para las operaciones subsecuentes o
expresin de resultados.

En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente

antes del anlisis y stas deben ser usadas para inocular el medio de cultivo
dentro de los 20 minutos posteriores a su preparacin.
3. QU OTRAS FORMAS DE SIEMBRA EXISTEN?

Siembra volumtrica.
Tcnica por agotamiento de asa
Siembra por estras.
Siembra masiva.
Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie) TSI (Triple
Sugar Iron)

4. COMO SE REALIZARIA LA SIEMBRAS DE MUESTRAS DE SUELO

Se realiza siembra de suelo para confirmar la presencia o ausencia de

fitopatgenos que pueden afectar un cultivo. O bien la presencia o
ausencia de microorganismos benficos, para evaluar la calidad de los
suelos.
Se recomienda muestrear en zigzag o al azar. Se utiliza un paln para
una recoleccin superficial (0-10 cm).
Tomar de 10 a 20 sub-muestras por lote, las cuales se juntan, se
homogenizan bien en un saco y obtiene una muestra de unos 200 a 500
gramos.
Depositar las muestras en una bolsa plstica nueva, sellar y rotular
adecuadamente.

c) REFERENCIAS

https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnol
ogia/practicoIII.pdf
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/curso/
UNI_02/u2c2s2.htm#Anchor4
https://microbiologiaunq.files.wordpress.com/2008/05/seminario-nc2b03-
cultivo-de-microorganismos.pdf