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Instituto Valenciano de Microbiologa


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Colifagos en aguas: indicadores virales alternativos a los indicadores


bacterianos. Mtodos cualitativo y cuantitativo (EPA 1601 y EPA 1602 ,
para colifagos machos F+ y somticos F-).

Colifagos en aguas: indicadores virales alternativos a los indicadores bacterianos. Mtodos


cualitativo y cuantitativo (EPA 1601 y 1602, para colifagos somticos y F+).
(EPA, Mtodo 1601: 2001. Male-specific (F+) and Somatic Coliphage in Water by Two-step Enrichment
Procedure) (EPA, Method 1602: 2001. Male-specific (F+) and Somatic Coliphage in Water by Single
Agar Layer SAL- Procedure)
Informacin 07-04-16.
Las aguas dulces continentales y las aguas marinas pueden contaminarse con excretas humanas y de
animales. Las excretas humanas pueden contener virus entricos patgenos como Enterovirus, Adenovirus,
y Norovirus que pueden causar brotes o casos aislados de gastroenteritis aguda, hepatitis infecciosa
(hepatitis A) y otras enfermedades. Los virus entricos humanos pueden sobrevivir tras el tratamiento de las
aguas residuales mejor que otros indicadores de contaminacin fecal y bacterias patgenas, y con frecuencia
el tratamiento de las aguas residuales es inadecuado para prevenir la contaminacin de aguas marinas, as
como la bioacumulacin de en moluscos bivalvos que los ingieren.
Las aguas negras pueden contener bacterias y virus causantes de enfermedades, adems de
indicadores fecales inocuos como son algunas bacterias entricas y bacterifagos. Los bacterifagos pueden
utilizarse como indicadores fecales para conocer la calidad del agua, basado en que al controlar stos como
indicador, se controla la posible presencia de otros patgenos menos prevalentes.
Los mtodos habituales para detectar bacterias indicadoras de contaminacin fecal (p. ej. coliformes,
Enterococcus Streptococcus fecales-), no predicen fiablemente la presencia de virus patgenos en aguas o
moluscos.
El indicador fecal ms comn en las pruebas de aguas son las bacterias coliformes y Escherichia coli.
Sin embargo, otras bacterias como los Enterococcus spp. y unos virus bacterianos como los colifagos
(bacterifagos de Eschericha coli) se han reconocido como marcadores de contaminacin fecal equivalentes
a Escherichia coli. Los colifagos son virus bacterianos y algunos de ellos son estructuralmente similares a los
virus entricos patgenos (con una cubierta proteica similar a la capside de los virus entricos), junto a un
genoma de ADN o de ARN monocatenario (ss) o bicatenario (ds). Algunos de los colifagos son llamados
colifagos machos o F+, por infestar a la bacteria a travs de los pili sexuales que poseen las bacterias
macho (F+). Estos colifagos son morfolgicamente similares a los virus entricos y tienen una resistencia
similar a los tratamientos qumicos del agua. Entre este tipo de colifagos se encuentran los Leviviridae
(ssRNA, 24 nm de dimetro, fago MS2), y los Inoviridae (ssDNA, 810 x 6 nm, fago fd). Otros colifagos son
llamados colifagos somticos o F-, porque no requieren la presencia de pili sexuales para infectar a la
bacteria, y la infectan a travs del contacto con la pared celular bacteriana. Entre estos se encuentran los
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Myoviridae (dsDNA, 95 x 65 nm, fago T2), los Styloviridae (dsDNA, 54 nm, fago ), los Podoviridae (dsDNA,
47 nm, fago T7), y los Microviridae (ssDNA, 30 nm, fago X174).
Los colifagos se eliminan con las excretas fecales y no se replican en el agua, a menos que se
encuentren presentes las bacterias coliformes, por lo que son un indicador til de contaminacin fecal. Por
ello, se consideran un buen indicador para determinar el riesgo viral en un suministro de agua. Se ha
demostrado que el seguimiento de colifagos puede ser una herramienta til para el seguimiento y control de
los niveles bajos de contaminacin, sobre todo en las aguas tratadas con cloro, ya que los colifagos poseen
una resistencia al cloro superior a la de los Enterovirus, como es el caso del Poliovirus tipo 1.
La deteccin de colifagos es una alternativa a los indicadores bacterianos de contaminacin del agua,
ya que son unos indicadores de contaminacin fecal, y al mismo tiempo de la posible presencia de virus de
transmisin entrica como los de hepatitis infecciosa hepatitis A-, Norovirus, u otros Enterovirus, por lo que
actualmente la deteccin de los colifagos, se considera un indicador de calidad del agua. La contaminacin
biolgica ms frecuente procede de las aguas residuales contaminadas con excretas humanas o de
animales.
Mtodos de deteccin de colifagos
El mtodo EPA 1601, es un mtodo cualitativo (presencia o ausencia) de enriquecimiento en dos
fases, que utiliza dos tipos de bacterias hospedadoras para determinar la presencia de ambos grupos de
colifagos (F+ y somticos), citados previamente. Tras un periodo de incubacin del agua en presencia de las
bacterias indicadoras, las muestras deben depositarse sobre una capa de crecimiento bacteriano especfica
para cada tipo de fago, que son incubadas y examinadas para determinar la presencia de zonas circulares
de lisis. Este mtodo se considera el ms sensible para excluir la presencia de colifagos en una muestra de
aguas. El mtodo EPA 1602 utiliza un ensayo en una sola etapa y permite cuantificar la cantidad de colifagos
presentes.
Se han recomendado varios mtodos (tratamiento del agua con cloroformo, filtracin del agua por
membrana, tratamiento del agua con sustancias detergentes, ), para tratar de eliminar la posible flora
bacteriana acompaante presente en el agua, que pueden interferir con el desarrollo de las cepas
indicadoras de Escherichia coli, o que impidan la visualizacin de las reas de lisis causadas por la
replicacin de los colifagos. Sin embargo, todos los mtodos recomendados reducen en cierta medida la
deteccin de colifagos, por lo que no deben usarse si se pretende detectar cantidades pequeas de
colifagos.
As mismo, se han propuesto varios mtodos para concentrar los colifagos en muestras de aguas,
adsorcin a hidroxiapatita y elusin con fosfato sdico, filtracin por resinas de intercambio inico y adsorcin
a filtros con microporos, adsorcin con filtros de microporos y elusin con extracto de carne, etc.). No
obstante estos mtodos no son adecuados para concentrar colifagos por su sensibilidad a los niveles de pH,
que se utilizan en algunos de los mtodos para realizar la adsorcin. Estos mtodos estn basados en que a
pH bajo los virus poseen cargas positivas y se adhieren a las membranas con carga negativa; al mismo
tiempo para conseguir su elusin de las membranas se requiere un pH elevado. Estos cambios de pH
extremos puede daar los colifagos y hacer que no sean detectados con los mtodos basados en su
replicacin.
En general, para poder realizar una determinacin cuantitativa es necesario preparar diluciones
seriadas de la muestra de agua e inocular por duplicados las diluciones sobre placas con la bacteria
indicadora. No obstante, dado que se considera que no debe detectarse la presencia de colifagos, el mtodo
EPA 1601, recomienda no diluir la muestra y realizar la exposicin de 100 mL de agua a cada una de las dos
cepas de Escherichia coli indicadoras y al medio de cultivo, para preparar con ello una serie de placas de
medio slido que permitir determinar la ausencia de colifagos de cualquiera de los dos grupos.
El lmite establecido es de 0 colifagos en 100 mL de agua de bebida.
Pruebas realizadas en IVAMI
Prueba cualitativa para deteccin de colifagos F+ (machos) y somticos (F-), segn norma EPA 1601:

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2001.
Prueba cuantitativa para deteccin de colifagos F+ (machos) y somticos (F-), segn norma EPA 1602:
2001.
Plazo de entrega de resultados
El mnimo necesario para la realizacin de los cultivos (48 a 72 horas).
Formulario con caractersticas del producto y variables para las pruebas
En caso de solicitar la realizacin de las pruebas debe remitirnos con el producto el formulario
correspondiente cumplimentado.
El volumen mnimo de agua requerida es de 200 mL (100 mL para cada uno de los tipos de colifagos).
Si el agua est clorada, debe tratarse con 1 a 3 mg/litro de tiosulfato sdico para eliminar el cloro.
Conservacin y envo de la muestra:

Refrigerada (preferido) durante un tiempo mximo de 24 horas.


Coste de la prueba:

Mtodo EPA 1601 (Muestras aisladas)


Mtodo EPA 1602 (Muestras aisladas)
Varias muestras recibidas simultneamente
Consultar a ivami@ivami.com (mailto:ivami@ivami.com)

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