Proyecto-Biotox - 1

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL
PROYECTO DE INVESTIGACIN
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO

DEL MOCOCHO EN RATONES CEPA BALB/C
INTOXICADOS CON PLOMO
CURSO DE BIOQUIMICA Y TOXICOLOGA
Docente: GELDRES VIGIL, Mara Elena
Autores:
CARRANZA VILLA, Kenia

ESTELA MONTEZA, Thala
JAUREGUI GARCA, Jeanpier
SANCHEZ SANCHEZ, Jordy
VALVERDE RAVELO, Karen
TRUJILLO PER
2017
EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL
CARRAGENATO DEL MOCOCHO EN RATONES
CEPA BALB/C INTOXICADOS CON Pb.
INDICE
Contenido
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Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

Garca, J.; Sanchez Sanchez, J.; Valverde Ravelo, K.
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I. Introduccin:
1.1. Realidad Problemtica:
El plomo es un metal txico presente de forma natural en la corteza
terrestre. Su uso generalizado ha dado lugar en muchas partes del mundo a
una importante contaminacin del medio ambiente, un nivel considerable de
exposicin humana y graves problemas de salud pblica (Organizacin
Mundial de la Salud, 2016).
Los alimentos y las bebidas pueden contener plomo, si el polvo que

contiene plomo llega a las cosechas durante su crecimiento, sobre todo
cuando se utilizan fertilizantes que contienen fangos cloacales. Las plantas
pueden recoger el plomo del suelo, como el que podra encontrarse en un sitio
de desechos peligrosos o cerca de reas con un elevado trnsito automotriz.
La fabricacin casera o reciclaje de bateras, la imprenta, alfarera con la

produccin de cermica vidriada, para cocinar y almacenar alimentos son
fuentes altamente contaminantes de plomo. ()Las fuentes principales del
plomo liberadas al agua son las tuberas y accesorios de plomo, y la soldadura
en las casas, escuelas y edificios pblicos, el polvo y suelo que contienen
plomo transportados al agua por las lluvias y los vientos, y el agua residual de
las industrias que utilizan el plomo. El plomo puede entrar al cuerpo al respirar
el aire con polvo que contiene plomo o partculas de plomo. Casi todo el plomo
de los pulmones entra a la sangre y se mueve a otras partes del cuerpo
(Martnez, 2010).
Una vez que el plomo logra ingresar al cuerpo de un organismo, se

distribuye por el este hasta alcanzar el cerebro, el hgado, los riones y los
huesos y se deposita en dientes y huesos, donde se va acumulando con el
paso del tiempo. () Los nios de corta edad son especialmente vulnerables
a los efectos txicos del plomo, que puede tener consecuencias graves y
permanentes en su salud, afectando en particular al desarrollo del cerebro y
del sistema nervioso. El plomo tambin causa daos duraderos en los adultos,
por ejemplo aumentando el riesgo de hipertensin arterial y de lesiones
renales. En las embarazadas, la exposicin a concentraciones elevadas de

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plomo puede ser causa de aborto natural, muerte fetal, parto prematuro y bajo
peso al nacer, y provocar malformaciones leves en el feto. ()El plomo tiene
graves consecuencias en la salud de los nios. Si el grado de exposicin es
elevado, ataca al cerebro y al sistema nervioso central, pudiendo provocar
coma, convulsiones e incluso la muerte. Los nios que sobreviven a una
intoxicacin grave pueden padecer diversas secuelas, como retraso mental o
trastornos del comportamiento. Se ha comprobado adems que en niveles de
exposicin ms dbiles sin sntomas evidentes, antes considerados exentos
de riesgo, el plomo puede provocar alteraciones muy diversas en varios
sistemas del organismo humano. En los nios afecta, en particular, al
desarrollo del cerebro, lo que a su vez entraa una reduccin del cociente
intelectual, cambios de comportamiento por ejemplo, disminucin de la
capacidad de concentracin y aumento de las conductas antisociales y un
menor rendimiento escolar. La exposicin al plomo tambin puede causar
anemia, hipertensin, disfuncin renal, inmunotoxicidad y toxicidad
reproductiva. Se cree que los efectos neurolgicos y conductuales asociados
al plomo son irreversibles (Organizacin Mundial de la Salud, 2016).
En La Oroya, la gente est condenada a muerte antes de los 40 aos de

edad puesto que se estableci valores superiores a los 2000 mg/kg de plomo
en algunas casas, siendo el valor estndar nacional de 140 mg/kg, es decir
10 veces ms el valor considerable permisible. ()Investigaciones
independientes realizadas en el lugar revelaron que el 97% de los nios y
nias de entre 6 meses y 6 aos, y el 98% de los infantes que tienen de 7 a
12 aos, presentan niveles elevados de plomo en la sangre. Es ms, existe
un estudio realizado por pediatras de un centro de salud que demostr que
hasta los recin nacidos llegaban al mundo con preocupantes niveles de
plomo en la sangre. Tambin es causante de la prdida de memoria,
problemas de crecimiento, mal aprendizaje. Todo esto provoca que la
esperanza de vida sea de tan solo 40 aos (Diario El Correo, 2015).
Ante tal problemtica, es imprescindible para la humanidad buscar

alternativas de solucin, es por ello que en el presente trabajo se propone

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utilizar el carragenato, para fortalecer el sistema inmunolgico frente al efecto

txico del Plomo.
1.2. Formulacin del problema

Cul es el efecto inmunopotenciador del carragenato del mococho en
ratones cepa balb/c intoxicados con plomo?
1.3. Justificacin:
La contaminacin por plomo se ha convertido en uno de los problemas
de mayor impacto en el medio ambiente. La polucin de las partculas
plomadas deteriora la calidad del aire, el suelo y el agua daando los
ecosistemas. La exposicin a este metal origina problemas que atentan
directamente contra la salud de las personas, la cual es condicin necesaria
para el desarrollo humano y se convierte en el medio esencial para
conseguir el bienestar individual y colectivo.
Los costos por restablecer la salud humana de miles de personas son

elevados, ms aun cuando en nuestro pas, de los medicamentos usados
para el tratamiento por contaminacin de plomo solo uno es accesible con
el fin de plantear una alternativa frente a este problema que aqueja a la
sociedad, se propone el uso del carragenato como inmunopotenciador, el
cual contribuir al restablecer la salud de las personas contaminadas con
plomo.
1.4. Limitaciones:
No encontrar los reactivos en el laboratorio de la universidad, como el
turk.
1.5. Objetivos:
1.5.1. Objetivo General
Determinar el efecto inmunopotenciador del carragenato
extrado del mococho en ratones cepa balb/c intoxicados con
plomo.

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1.5.2. Objetivos especficos

Implementar una metodologa de extraccin del carragenato a
partir del mococho.
Evaluar mediante recuento de leucocitos el efecto del
carragenato antes y despus de administrar plomo.
Identificar la dosis ptima del carragenato.
II. Marco terico.

2.1. Antecedentes:
En el estudio realizado por Vitalone y col. (2000), en la investigacin
denominada Efecto de la carragenina e indometacina sobre el crecimiento
de un fibrosarcoma murino en la cual tiene como objetivo demostrar que la
Carragenina y la Indometacina inhiben el crecimiento de fibrosarcoma.
Teniendo en cuenta que los tumores slidos para crecer ms de 2 mm,
necesitan desarrollar nuevos vasos sanguneos. Las clulas neoplsicas
secretan factores de crecimiento que estimulan la angiognesis y el
crecimiento tumoral. La Carragenina bloquea in vitro la unin de los factores
de crecimiento a sus receptores. Ensayamos in vivo su accin con el objeto
de analizar si inhibe el desarrollo de un fibrosarcoma murino. Para
neutralizar la accin inflamatoria de la Carragenina usamos la Indometacina,
que es un antiinflamatorio no esteroide. El tumor usado fue un fibrosarcoma
inducido con metilcolantreno en ratones Balb/c y mantenido por pasaje
seriado de clulas tumorales, en ratones de la misma cepa. El volumen de
los tumores fue evaluado midiendo dos dimensiones y aplicando la frmula
V = 0.4 x d2 x D. Los ratones con tumores fueron separados en grupos, uno
de los cuales se us como testigo y los otros tratados en forma separada
con Indometacina, Carragenina y Carragenina-Indometacina. Se compar el
volumen de los tumores de los ratones tratados con respecto al testigo y el
de los tratados entre s, utilizando el Test t de Student. Se demostr que la
Carragenina y la Indometacina, inhiben el desarrollo del fibrosarcoma. La
accin inhibitoria de la Carragenina sobre el crecimiento tumoral es
significativamente mayor que el efecto antitumoral de la Indometacina y el
de la Carragenina-Indometacina.

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En el estudio realizado por Calcine y Paredes (2016) denominado

Efecto del carragenato del mococho en el crecimiento del rabanito
contaminado con cobre, la investigacin se realiz con la finalidad de
reconocer los efectos del carragenato obtenido del alga mococho en el
crecimiento de rabanito contaminados con cobre (Cu). Se extrajo el
carragenato del mococho obtenido, posteriormente se infect los rbanos (3
semillas) con el cobre, para que luego se sembraran en 3 recipientes y se
agrega 2kg de tierra. De esta manera se concluye que los rabanitos
infectados por la bioacumulacin del Cu, donde tambin fue agregado el
carragenato, dando como resultado el efecto positivo sobre este cultivo
permitiendo estar por debajo del LMP de cobre para el rabanito.
En el estudio realizado por Lpez, M. (2010), En la investigacin

Estudio de la respuesta inmunolgica celular obtenida al exponer clulas
de ratones Balb/c a extractos del alga parda Macrocystis pyrifera nos
menciona que algunos los polisacridos extrados de plantas, como las
algas marinas, tienen propiedades teraputicas que ofrecen una alternativa
como tratamiento profilctico. Los inmunomoduladores actan en diferentes
niveles del sistema inmune, por esto la necesidad de desarrollar agentes
que puedan inhibir o intensificar selectivamente clulas para la respuesta
inmunolgica producir mediadores como las citocinas. Macrocystis pyrifera
es una alga parda gigante que habita en la costa oeste de Norteamrica. Su
disponibilidad en la regin la distingue como una buena opcin de
investigacin y un buen recurso para su estudio y explotacin. Se determin
si las fracciones de M. pyrifera (MpA, MpB y MpAC) tienen funciones de
inmunoestimulante inmunolgico al inyectarlos con rESAT-6 en ratones
Balb/c y si inducen la produccin de algunos factores inmunolgicos (TNF-
, IL-6, ON, proliferacin) en la lnea celular RAW 264.7. Se determin que
MpA, MpB y MpAC tienen efecto inmunoestimulante. La disminucin en la
densidad celular en el ensayo in vivo-in vitro, puede deberse a que rESAT-
6 promueve la apoptosis de macrfagos por la activacin de las caspasas.
Sin embargo, el efecto de MpB al disminuir la densidad celular, puede indicar
que sta fraccin reprime la produccin de citocinas proinflamatorias,
sugiriendo pueden modular la induccin de citocinas durante la sepsis. MpA,

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MpB y MpAC indujeron la produccin de TNF-, IL-6 y de xido ntrico por

RAW 264.7. Las tres fracciones presentaron citotoxicidad.
Segn Rodrguez Espejo, M (2010) en el proyecto titulado

Bioacumulacin de metales pesados trazas: cadmio, cobre y plomo en
chondracanthus chamissoi procedente del litoral del departamento la
libertad se determin la bioacumulacin de los metales pesados trazas: Cd,
Cu y Pb en Chondracanthus chamissoi. (C. AGARDH) KTZING, 1843
cochayuyo RHODOPHYTA GIGARTINACEAE, procedente de Salaverry,
Malabrigo y Pacasmayo, provincias de Trujillo, Ascope y Pacasmayo
respectivamente, del litoral del Departamento La Libertad. Peru; (8 13 42
S, 78 59 30 W; 7 42 S y 79 27 W y 7, 23 30 S, 79, 2 W). Las
muestras de la especie, as como del agua de mar superficial fueron
recolectadas aleatoriamente en la zona intermareal entre los meses de
agosto del 2006 a mayo del 2007. Se determin temperatura, pH y salinidad.
En su proyecto concluyeron que la temperatura influye significativamente
sobre la bioacumulacin de Pb, en las tres zonas de muestreo excepto para
Cd y Cu en Salaverry y Malabrigo. As mismo la salinidad y el pH tienen una
relacin inversa significativa sobre los tres elementos. Y existe una relacin
directa significativa, entre la concentracin de los elementos traza (Cd, Cu y
Pb) presentes en agua de mar con los presentes en los tejidos de Ch.
Chamissoi.
2.2. Bases Tericas:

2.2.1. Plomo
El plomo es un metal pesado, de baja temperatura de fusin,
de color gris-azulado que ocurre naturalmente en la corteza
terrestre. Sin embargo, raramente se encuentra en la naturaleza
en la forma de metal. Generalmente se encuentra combinado con
otros dos o ms elementos formando compuestos de plomo.
()Los compuestos de plomo se usan como pigmentos en
pinturas, en barnices para cermicas y en materiales de relleno.
La cantidad de plomo que se usa en estos productos se ha
reducido en aos recin pasados para minimizar los efectos

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nocivos del plomo sobre seres humanos y animales (Agencia para

Sustancias Txicas y el Registro de Enfermedades, 2016).
2.2.2. Intoxicacin por plomo
El Pb ingresa al organismo principalmente por va respiratoria
y gastrointestinal. Una vez en el torrente sanguneo, se acumula
dentro de los glbulos rojos, donde interfiere en la sntesis del
grupo hemo, ocasionando anemia. Luego de aproximadamente
un mes, se redistribuye a diferentes rganos y tejidos, generando
alteraciones en el sistema nervioso, hematopoytico,
cardiovascular, reproductivo y renal. Finalmente, se deposita en
tejidos duros como huesos, uas y dientes, donde puede
permanecer acumulado durante toda la vida. Cabe destacar que
el Pb es teratgeno, porque atraviesa con facilidad la barrera
placentaria, encontrndose concentraciones comparables del
metal en la sangre de la madre y del recin nacido (Fontana, y
otros, 2013).
La (Biblioteca Virtual de desarrollo sostenible y salud
ambiental, 2006) indica los niveles de toxicidad del plomo
mediante el siguiente cuadro:
TABLA 01: NIVELES DE TOXICIDAD DEL PLOMO EN EL HOMBRE Y SU

BALANCE
CONCENTRACIN INGESTA DIARIA EFECTO

EN SANGRE PARA OBTENER
ug/100 ml DICHO NIVEL EN
SANGRE (mg)
20 0.3 Normal. Sin efectos evidentes
>40 1.0 Aumento del -amino
levulnico en orina y en
sangre.
>80 3.0 Disminuye la cuenta de
eritrocitos, clicos
abdominales, anemia, retraso
mental progresivo en nios.
>120 10.0 Dao agudo al cerebro y el
sistema nervioso central.
Elaboracin: PAHO (Pan American Health Organization)

Fuente: http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/eco/018891/018891-04.pdf

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2.2.3. Bioacumulacin del plomo

La bioacumulacin est definida como la acumulacin de una
determinada sustancia en alguno de los tejidos de un organismo
vivo. Lo que implica que en presencia de la sustancia en cuestin
en el entorno, un organismo que habite en l adquirir cierta
cantidad de dicha sustancia -ya sea al respirar, al alimentarse, por
contacto directo a travs de la piel o por otras vas- parte de la
cual quedar almacenada en sus tejidos. Y si la presencia de esa
sustancia en el medio es constante, con el paso del tiempo la
cantidad almacenada ser cada vez ms importante (Barral,
2008).
2.2.4. Mococho
El mococho es un alga que se encuentra distribuido en todos
los ocanos. Los nombres comunes de chondracanthus
chamissoi varan de acuerdo a cada zona, as tenemos que en el
Per en la zona norte es llamada cochayuyo, mococho. Uno de
sus principales componentes son las protenas de fcil asimilacin
que contienen gran nmero de aminocidos esenciales, es decir,
aquellos que nuestro organismo no puede sintetizar sino que debe
asimilar a travs de la alimentacin. Estos aminocidos resultan
fciles de digerir debido a la particular composicin de las algas,
ricas en sales minerales u en algunas enzimas. Ello hace que
alcancen un coeficiente de digestibilidad de hasta 95% y que se
digieran cuatro o cinco veces ms rpido que las protenas
animales (Carbajal, Galn, & De la Cruz, 2005).
2.2.5. Carragenina:
La carragenina es un ficocoloide que se extrae de algas
pertenecientes al orden Gigartinales (entre las que destaca
Gigartina chamissoi), del musgo Chondrus crispus y de
Eucheuma spp. La carragenina es un polmero de galactosa,
fuertemente sulfatados y con numerosos grupos hemisteres, que
hacen de estos polmeros fuertemente aninicas. Todas las
carrageninas reaccionan con las protenas y bajo ciertas
condiciones puede tener lugar una interaccin directa polianin-

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policatin. En otros casos los iones calcio participan en la

formacin del complejo. Los carragenatos son solubles en agua
caliente, sus soluciones tienden a aumentar el volumen, estos
polmeros; as como otros polisacaridos de las algas marinas
carecen de toxicidad a mediano y a largo plazo (Pretel Sevillano,
Nomberto Rodriguez, Acosta Pretel, & Reyna Sanchez, 2006).
Porto (2003), refiere que es un hidrocoloide extrado de algas

marinas rojas de las especies Gigartina, Hypnea, Eucheuma,
Chondrus y Iridaea. Es utilizada en diversas aplicaciones en la
industria alimentaria como espesante, gelificante, agente de
suspensin y estabilizante, tanto en sistemas acuosos y lcticos.
2.2.6. Estructura de la carragenina:

La carragenina est ubicada en la pared de las clulas y en
la matriz intercelular del tejido de las algas. Es un polisacrido de
alto peso molecular con contenido de ster sulfato de 15% a 40%
formado por unidades alternadas de D-galactosa y 3,6-anhidro-
galactosa (3,6-AG) unidas por ligaduras -1,3 y -1,4-glucosdica.
La posicin y el nmero de grupos de ster sulfato as como el
contenido de 3,6-AG determinan las diferencias primarias entre
los tipos de carragenina kappa, iota y lambda. Los mayores
niveles de ster sulfato implican en una menor fuerza de
gelificacin y baja temperatura de solubilizacin. La carragenina
tipo kappa contiene de 25% a 30% de ster sulfato y de 28% a
35% de 3,6-AG. La carragenina tipo iota contiene de 28% a 35%
de ster sulfato y de 25% a 30% de 3,6-AG. La carragenina tipo
lambda contiene de 32% a 39% de ster sulfato y no contiene 3,6-
AG, segn Porto (2003). (Ver anexo: Fig. 01)
2.2.7. Leucograma:
El leucograma es la fraccin del hemograma que se refiere al
conteo total de los leucocitos (glbulos blancos) y de las diferentes

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clases de leucocitos. En s est compuesto por dos anlisis segn

Laboratorios Echandi (2017):
A. Conteo total de leucocitos: los leucocitos son las clulas

encargadas de proteger al organismo contra las infecciones.
Si un virus, bacteria u otro microbio penetra dentro del
organismo, los leucocitos se organizan para atacarlo y
destruirlo. La presencia de una infeccin normalmente altera
el nmero total de leucocitos. Otras condiciones que pueden
alterar el conteo de leucocitos son inflamaciones dentro del
cuerpo, trauma (golpes, cadas, fracturas, etc) y el estrs
excesivo.
B. Conteo de leucocitos diferencial: apodado simplemente

"diferencial", determina la proporcin o porcentaje de las
principales clases de leucocitos dentro del conteo total de
leucocitos. Estos tipos principales de leucocitos son los
neutrfilos, eosinfilos, basfilos, linfocitos y monocitos.
Cada clase tiene un papel diferente en la defensa del
organismo. La cantidad de cada clase de leucocito da
informacin muy valiosa acerca del estado del sistema
inmune. Demasiados o muy pocos leucocitos de una clase
puede contribuir a encontrar la causa de una infeccin,
definir la presencia de una reaccin alrgica y evaluar la
presencia de enfermedades tales como leucemias.
2.2.8. Conteo celular y valores estndares de leucocitos:

Segn vila y col. (2017), para el clculo de leucocitos se
emple la siguiente frmula (ver tabla 01):
WBC = Recuento de leucocitos (nmero de leucocitos por

mm3 de sangre)

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L = Leucocitos contados en 4 cuadrantes grandes

D = Factor de dilucin (20)
2.3. Definicin de trminos bsicos

A. Intoxicacin: es la entrada de un txico en el cuerpo en cantidad
suficiente como para producir un dao (Revista de Salud y Bienestar,
2016).
B. Mococho: alga parda abundante en las costas, con el aspecto de una
planta de grandes hojas y tallos tubulares, puede alcanzar hasta
quince metros de largo; habita en zonas de fuerte oleaje y se adhiere
a las rocas mediante un disco basal (Lista depalabras, s.f.).
C. Inmunopotenciador: es un qumico, droga, estresor o accin que
potencie la respuesta inmune innata por interaccin directa con las
clulas que componen el sistema inmune innato (Perez, y otros,
2013).
D. Carragenato: es un hidrocoloide procedente de algas rojas, producto
natural similar al Agar Agar (Cocinista, s.f.).
III. HIPOTESIS:
3.1. Formulacin de la hiptesis
H0= El carragenato del mococho no tiene efecto inmunopotenciador sobre
los ratones cepa Balb/c intoxicados con plomo.
H1= El carragenato del mococho tiene efecto inmunopotenciador positivo
sobre los ratones cepa Balb/c intoxicados con plomo.
3.2. Operacionalizacin de las variables

Conteo de leucocitos de los ratones
VARIABLE DEPENDIENTE
intoxicados con plomo.
VARIABLE INDEPENDIENTE Dosis aplicada de carragenato de mococho.

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IV. MATERIALES Y METODOS

4.1. Materiales, insumos e instrumentos:
Plomo a 200 ppm
Cmara de Neubauer marca Marienfeld
Microscopio cientfico marca Primo star
Reactivo Turck
Bistur
Micropipetas
3kg Mococho
Centrifuga
Algodn
Etanol
Jeringas tuberculinas
Tubos de ensayo
Colador
Hidrxido de sodio
Guantes
Mascarillas
Gradilla
Agua destilada
4.2. Tipo de diseo de investigacin

La investigacin a efectuarse es de tipo experimental, ya que se va a
probar la efectividad del carragenato como inmunopotenciador sobre los
ratones cepa/balb C intoxicados con plomo.
4.3. Material de estudio

4.3.1. Poblacin
Los ratones cepa/Balb c.
4.3.2. Muestra
2 grupos de 4 ratones cepa/Balb c. cada uno donde:

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TABLA 02: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C
Ratn (G1) Peso (gr) Sexo Edad

Rc1 88.08 F 2 meses
1P 86.04 M 2 meses
1PC1 109.41 M 2 meses
1PC2 123.09 F 3 meses
Leyenda:
Rc1 Ratn control del primer grupo.
1P Ratn intoxicado con plomo del primer grupo.
1PC1 Ratn intoxicado con plomo y con 0.1 ml de carragenato del primer grupo.
1PC2 Ratn intoxicado con plomo y con dosis de 0.5 ml carragenato del primer
grupo.
TABLA 03: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C
RATN (G2) PESO (GR) SEXO EDAD

RC2 67.03 M 2 meses
2P 86.79 M 2 meses
2PC1 94.82 F 2 meses
2PC2 72.31 F 2 meses
Leyenda:
Rc2 Ratn control del segundo grupo.
2P Ratn intoxicado con plomo del segundo grupo.
2PC1 Ratn intoxicado con plomo y con 0.1 ml de carragenato del segundo grupo.
2PC2 Ratn intoxicado con plomo y con 0.5 ml carragenato del segundo grupo.

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4.4. Tcnicas, procedimientos e instrumentos

Se separa a los ratones cepa/Balb c de tal manera que se tenga un
grupo control (blanco), un ratn intoxicado con plomo y dos ratones
intoxicados con plomo respaldados con dosis distintas de
carragenato, tal como se muestra en el siguiente esquema.
Encasillado 1 Encasillado 1 Encasillado 1
xPC1
Rcx xP
xPC2
Blanco Plomo Plomo y carragenato
Se toma lectura del peso de todos los ratones y se realiza un primer

reconteo de leucocitos de cada ratn antes de intoxicarlos con
plomo para saber en qu estado se encuentran antes de la
experimentacin.
Despus de esto, se administra va oral 15 ml de plomo a 200 ppm
(3 mg de Plomo) a los ratones xP, xPC1 y xPC2 de cada grupo
diariamente por una semana.
Despus de una semana se administra 0.5 ml y 1 ml de carragenato
a los ratones xPC3 y xPC4 respectivamente.
Se realiza un reconteo de leucocitos despus de este proceso para
compararlos con los resultados antes de la experimentacin.
Se realiza el mismo procedimiento para el segundo grupo de
ratones.

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3.1. METODO PARA RECONTEO DE LEUCOCITOS.

Se tom 20 microlitros de sangre y se coloca en un vial.
Se agreg 380 microlitros de reactivo de Turck al vial.
Se dej reposar la mezcla entre 20 a 30 minutos.
Se retir una parte de la mezcla con ayuda de una micropipeta y
se coloca en la cmara de neubauer.
Se dej reposar durante 2 3 minutos y luego se lleva al
microscopio.
Se cuentan los leucocitos en los 4 cuadrantes y se aplica la frmula
para calcular el nmero de leucocitos por mm3 de sangre.
WBC = Recuento de leucocitos (nmero de leucocitos por mm3 de

sangre)
L = Leucocitos contados en 4 cuadrantes grandes
D = Factor de dilucin (20)
3.2. EXTRACCIN DEL CARRAGENATO

Se hirvi 1 Kg de mococho durante 2 horas y a un volumen de 10 litros
de agua (utilizando hidrxido de sodio o potasio al 0.02%)
Se dej enfriar y luego se tamizo hasta que pase toda la parte del gel.
Se hirvi el queque restante en 2 litros de agua y se dej enfriar y
tamizo hasta que pase toda la parte del gel.
Seguidamente se uni las dos extracciones realizadas anteriormente
y se someti a un procedimiento de congelacin (hasta llegar a hielo)
y descongelacin (T ambiente).
Se procedi a centrifugarlo a 3000 rpm por 10 minutos.
Se separ por decantacin, eliminando el sobrenadante y al sedimento se le
someti a precipitacin con etanol al 96% (permite precipitar el gel).
Se centrifug por segunda vez y se purifico 4 veces; disolviendo el
centrifugado en agua destilada y precipitndolo con etanol al 96%.

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V. RESULTADOS
TABLA 04: RESULTADOS DEL PRIMER GRUPO DE EXPERIMENTACIN
Leucocitos/mm3
Ratn Dosis de
Peso Pre con con dosis Post
carragenato
(g) experimentacin plomo carragenato experimentacin
diaria
Rc1 88.08 9800 0 9850 9900 9900

1P 86.04 9500 0 4000 3700 3600
1PC1 109.41 12100 0.1 ml 5000 8000 8000
1PC2 123.09 12300 0.5 ml 5600 6900 6950
Fuente: Resultados de leucograma del primer grupo experimental de cepa balb/c

Elaboracin: Propia
GRFICO 01: COMPARACIN ENTRE EL LEUCOGRAMA

INICIAL Y DURANTE LA ADMINISTRACIN DE PLOMO DEL
GRUPO 1
14000
12100 12300
12000
9800 9850
Leucocitos/mm3
10000 9500
8000
5600
6000 5000
4000
4000
2000
0
Rc1 1P 1PC1 1PC2
Pre experimentacin con plomo
Fuente: Tabla 04 de resultados del primer grupo experimental.

Elaboracin: Propia

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Interpretacin: Se puede ver una disminucin notable de leucocitos, esto se debe

al carcter txico del plomo en el organismo de los ratones y es por eso que cuando
fueron intoxicados sus niveles de leucocitos disminuyeron significativamente.

CON ADMINISTRACION DE PLOMO Y DURANTE LA
ADMINISTRACIN DE CARRAGENATO DEL GRUPO 1
12000
9850 9900
10000
Leucocitos/mm3
8000
8000 6900
5600
6000 5000
4000 3700
4000
2000
0
Rc1 1P 1PC1 1PC2
con plomo con carragenato
Fuente: Tabla 04 de resultados del segundo grupo experimental.

Elaboracin: Propia
Interpretacin: Es notable el incremento en los niveles leucocitarios de los ratones

que fueron tratados con carragenato. Asimismo se puede observar que los
leucocitos del ratn 1PC1 se elevaron mucho ms que los del ratn 1PC2, esto se
debe a que al ratn 1PC1 se le administr 1 ml de carragenato, mientras que al ratn
1PC2 slo se le administr 0.5 ml.

pg. 19
GRFICO 03: COMPARACION ENTRE LA DOSIS

DE 0.1ML Y 0.5ML POR SU EFICIENCIA DEL
GRUPO 1
120 99.28 100
Porcentaje de eficacia
100 80.58
80 100 100
60
40 62.5
20
0
con plomo con carragenato Post
experimentacin
con 0.1 ml de dosis diaria de carragenato


Elaboracin: Propia
Interpretacin: Se observa que los leucocitos del ratn control no variaron, mientras
que los de los dems ratones disminuyeron significativamente. Por otro lado, la
disminucin de leucocitos del ratn intoxicado con Plomo es mucho mayor a la de
los ratones a los que se les suministr carragenato.
G R AF I C O 0 4 : V AR I AC I O N D E L E U C O C I T O S D E L O S
R AT O N E S D U R AN T E E L P E R I O D O D E E X P E R I M E N T AC I N
14000
12000
Leucocitos/mm3
10000
8000
6000
4000
2000
0
PRE CON PLOMO CON POST
EXPERIMENTACIN CARRAGENATO EXPERIMENTACIN
Rc1 1P 1PC1 1PC2

Elaboracin: Propia

pg. 20
Interpretacin: El ratn control present escasa variacin de niveles leucocitarios,

el ratn que fue intoxicado con plomo 1P tuvo disminucin de niveles leucocitarios a
lo largo del tiempo, mientras que los ratones a los que se les suministr carragenato
decayeron en sus niveles leucocitarios, pero gracias al carragenato tuvieron
tendencia de ascenso en sus niveles leucocitarios.
TABLA 05: RESULTADOS DEL SEGUNDO GRUPO DE EXPERIMENTACIN
Leucocitos/mm3
Ratn Dosis de
Peso Pre con con dosis Post
carragenato
(g) experimentacin plomo carragenato experimentacin
diaria
Rc2 67.03 8800 0 8850 8600 8600

P2 86.79 9700 0 3900 3600 3400
2PC1 94.82 10200 0.1 ml 5100 7800 7900
2PC2 72.31 9200 0.5 ml 3600 4800 4800
Fuente: Resultados de leucograma del segundo grupo experimental de cepa

balb/c
Elaboracin: Propia
GRFICO 05: COMPARACIN ENTRE EL

LEUCOGRAMA INICIAL Y DURANTE LA
ADMINISTRACIN DE PLOMO DEL GRUPO 1
12000
9700 10200
10000 8800 8850 9200
Leucocitos/mm3
8000
6000 5100
3900 3600
4000
2000
0
Rc2 P2 2PC1 2PC2
Pre experimentacin con plomo

Elaboracin: Propia

pg. 21

CON ADMINISTRACION DE PLOMO Y DURANTE LA
ADMINISTRACIN CARRAGENATO DEL GRUPO 1
10000 8850 8600
7800
8000
Leucocitos/mm3
6000 5100 4800

3900 3600 3600
4000
2000
0
Rc2 P2 2PC1 2PC2
con plomo con dosis carragenato

Elaboracin: Propia
GRFICO 07: COMPARACION ENTRE LA DOSIS DE

0.1ML Y 0.5ML POR SU EFICIENCIA DEL GRUPO 1
120.00 100
100.00
Porcentaje de eficacia
100.00 75.00
80.00 98.73 100

60.00
64.56
40.00
20.00
0.00
con plomo con carragenato Post
experimentacin


Elaboracin: Propia

pg. 22
G RAFI CO 0 8 : VARI ACI O N DE LE UCO CI TO S DE

LO S RATO NE S DURANTE E L P E RI O DO DE
E X P E RI ME NTACI N
LEUCOCITOS/MM3
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
PRE CON PLOMO CON DOSIS POST
EXPERIMENTACIN CARRAGENATO EXPERIMENTACIN
Rc2 P2 2PC1 2PC2

Elaboracin: Propia
VI. DISCUSIN
Los resultados muestran que la ingesta de plomo por ratones cepa Balb/c causa
algunos cambios en las funciones del sistema inmune; la concentracin de plomo
administrada a los ratones tuvo como efecto la disminucin de leucocitos de estos,
pues en el conteo inicial de leucocitos se obtuvo valores mayores a 9000
leucocitos/mm3 y con la administracin de plomo estos valores disminuyeron
aproximadamente en un 50%; esto se ve explicado por (Rodrguez Daz & col, 2002)
al sealar que el plomo acta como inmunomodulador y adems puede deprimir o
estimular a los linfocitos T y B encargados de la respuesta inmune humoral y celular,
lo cual justifica dicha disminucin en los niveles leucocitarios de los ratones cepa
Balb/c. Asimismo, esto tambin lo explica (Gonzles Riquelme, 2002) que seala
que la exposicin a metales puede desrregular la respuesta inmunolgica,
generando hipersensibilidad o autoinmunidad, siendo capaces adicionalmente de
suprimir los mecanismos de defensa inmune.
La carragenina y los lipopolisacridos actan como estimulantes de la respuesta

del sistema inmunitario (Garca Tamayo, 1997, pg. 176), por esta razn la
administracin de carragenina a los ratones fortaleci su sistema inmune y por ende
aument los niveles leucocitarios de estos despus de haber sido intoxicados con
plomo, esto se evidencia en las grficas 02 y 06. Las algas marinas como el mococho
son ricas en polisacridos que poseen diversos efectos beneficiosos como actividad

pg. 23
inmunoestimulante y prebitica, que los convierten en compuestos funcionales

prometedores y en una buena alternativa a la utilizacin de antibiticos. () Los
efectos fisiolgicos demostrados hasta el momento para el carragenato son:
reparacin de daos intestinales, estimulacin del sistema inmune de peces. (Peso
Echarri & col , 2012). Entonces, de acuerdo con lo descrito por los autores antes
mencionados se puede decir que, al ser un polisacrido, la carragenina induce la
formacin de anticuerpos (macrfagos) que potencian la respuesta inmunitaria de
los ratones.
La Carragenina, por otra parte, es una sustancia inflamatoria (Vitalone & col,
2000), pues en diversos trabajos de investigacin se utiliza este compuesto como
un inductor a la inflamacin, proceso que tambin requiere la intervencin del
sistema inmune. Autores como (Zaa & Valdivia, 2012) utilizaron 0.5 ml como dosis
de inflamacin en ratones, por lo que la dosis de 0.1 ml tuvo mayor eficiencia que la
de 0.5 ml como se muestra en las grficas 3 y 7, pues la dosis de 0.1 ml alcanz una
eficiencia mxima de 37.5%; mientras que, la dosis de 0.5 ml alcanz una eficiencia
mxima de 25%.
La carragenina es un betaglucano, el cual la produccin de macrfagos,
neutrfilos, monocitos y clulas dentrticas (clulas especializadas caractersticas
del sistema inmunitario de los mamferos) modulando la respuesta inmune y
potenciando adems la fagocitosis (Revista mensual de salud y medicina, 2017).
VII. CONCLUSIONES
Se extrajo el carragenato a partir de mococho, para ser utilizado como
inmunopotenciador frente al efecto inmunomodulador negativo del plomo.
Se realiz recuento de leucocitos, antes y despus de la administracin de
plomo y despus de la administracin de carragenato y se pudo observar
que el plomo redujo significativamente el nmero de leucocitos/mm3, pero el
efecto inmunopotenciador de carragenato estimul el incremento de estos.
Se observ que la dosis ms eficiente de carragenato fue de 0.1 ml, ya que
logr alcanzar mayor eficiencia que la dosis de 0.5 ml.

pg. 24
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
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antioxidante del extracto hidroalcohlico de Petiveria alliacea. Recuperado el 14

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de Julio de 2017, de http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1727-

99332012000300015&script=sci_arttext&tlng=pt
IX. ANEXOS
Ilustracin 1: Ratones Cepa/Balb. c
Ilustracin 2: Pesado de los ratones Cepa/Balb.c

pg. 28
Ilustracin 3: Rotulacin para la diferenciacin y separacin de los grupos a estudiar.
Ilustracin 4: Extraccin de sangre de los ratones Cepa/Balb.c
Ilustracin 5: Preparado de la cmara de N Neubauer

pg. 29
Ilustracin 7: Recuento de Leucocitos.

pg. 30
Ilustracin 8: Lavado del Mococho.para la extraccin de la carragenina
Ilustracin 9: Seleccin del mococho

pg. 31
Ilustracin 10: Colocar hervir el mococho
Ilustracin 11: Agregar Hidrxido de sodio antes de hervir

pg. 32
Ilustracin 12: Colar el mococho para su posterior conservacin
Ilustracin 13: Refrigeracin del mococho

pg. 33
Ilustracin 13: Extraccin de la carragenina
Ilustracin 14: Obtencin de la carragenina

pg. 34
Ilustracin 15: Preparacin para inyectar los 0.1ml y 0.5ml de carragenina
Ilustracin 16: Inyeccin de la carragenina al ratn

pg. 35
Ilustracin 17: Recuento de leucocitos post-experimentacin

pg. 36

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FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

EFECTO INMUNOPOTENCIADOR DEL CARRAGENATO

CURSO DE BIOQUIMICA Y TOXICOLOGA

Docente: GELDRES VIGIL, Mara Elena

CARRANZA VILLA, Kenia

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

Los alimentos y las bebidas pueden contener plomo, si el polvo que

La fabricacin casera o reciclaje de bateras, la imprenta, alfarera con la

Una vez que el plomo logra ingresar al cuerpo de un organismo, se

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En La Oroya, la gente est condenada a muerte antes de los 40 aos de

Ante tal problemtica, es imprescindible para la humanidad buscar

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

utilizar el carragenato, para fortalecer el sistema inmunolgico frente al efecto

1.2. Formulacin del problema

Los costos por restablecer la salud humana de miles de personas son

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

1.5.2. Objetivos especficos

II. Marco terico.

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

En el estudio realizado por Calcine y Paredes (2016) denominado

En el estudio realizado por Lpez, M. (2010), En la investigacin

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

MpB y MpAC indujeron la produccin de TNF-, IL-6 y de xido ntrico por

Segn Rodrguez Espejo, M (2010) en el proyecto titulado

2.2. Bases Tericas:

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

nocivos del plomo sobre seres humanos y animales (Agencia para

TABLA 01: NIVELES DE TOXICIDAD DEL PLOMO EN EL HOMBRE Y SU

CONCENTRACIN INGESTA DIARIA EFECTO

Elaboracin: PAHO (Pan American Health Organization)

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

2.2.3. Bioacumulacin del plomo

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

policatin. En otros casos los iones calcio participan en la

Porto (2003), refiere que es un hidrocoloide extrado de algas

2.2.6. Estructura de la carragenina:

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

clases de leucocitos. En s est compuesto por dos anlisis segn

A. Conteo total de leucocitos: los leucocitos son las clulas

B. Conteo de leucocitos diferencial: apodado simplemente

2.2.8. Conteo celular y valores estndares de leucocitos:

WBC = Recuento de leucocitos (nmero de leucocitos por

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

L = Leucocitos contados en 4 cuadrantes grandes

2.3. Definicin de trminos bsicos

3.2. Operacionalizacin de las variables

VARIABLE INDEPENDIENTE Dosis aplicada de carragenato de mococho.

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

IV. MATERIALES Y METODOS

4.2. Tipo de diseo de investigacin

4.3. Material de estudio

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

TABLA 02: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C

Ratn (G1) Peso (gr) Sexo Edad

TABLA 03: CARCTERISTICAS DEL PRIMER GRUPO DE CEPA BALB/C

RATN (G2) PESO (GR) SEXO EDAD

Carranza Villa, K.; Estela Monteza, T.; Juregui

4.4. Tcnicas, procedimientos e instrumentos

Encasillado 1 Encasillado 1 Encasillado 1

Blanco Plomo Plomo y carragenato

Se toma lectura del peso de todos los ratones y se realiza un primer