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PRCTICA N: 6
I. TEMA:
PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE COMPUESTOS
LIGNOCELULSICOS
II. OBJETIVO:
Objetivo General:
Objetivos Especficos:
III. INSTRUCCIONES:
Todo accidente deber ser notificado de inmediato.
Toda sustancia qumica dentro del laboratorio se considerar peligrosa y su manipulacin estar
sujeta a tal condicin.
Prohibido, fumar, consumir alimentos, bebidas, masticar chicle, maquillarse, o usar calzado
abierto (tipo sandalias).
Las sustancias, equipos y materiales, debern ser manejados con el mximo cuidado, de acuerdo
a los manuales de uso o de seguridad, segn sea el caso.
Durante el desarrollo de las actividades de laboratorio, no debern hacer bromas, juegos de
manos o actitudes impropias que pudiesen originar accidentes.
Es obligatorio reportar de inmediato cualquier desajuste o desperfecto en los equipos.
Utilizar bata de laboratorio en buen estado (ni sucia, ni rota o sin botones).
IV. LISTADO DE EQUIPOS , MATERIALES Y RECURSOS:
Fuentes de carbono Muestra microbiolgica (Saccharomyces
cerevisiae)
- Glucosa
- Bagazo de caa (NH4)2SO4
- Lactosa
- Sacarosa MgSO4 7H2O
Cajas Petri
KH2PO4
Matraces de 500ml
Extracto de levadura.
Sembrar la levadura por tcnica de estra cruzada, a fin de obtener colonias aisladas y asegurar la
axena de los experimentos.
La composicin del medio de cultivo en g/L es: 20 gr. (fuente de carbono), 2gr. de (NH4)2SO4, 0,4 gr.
de MgSO4 7H2O, 5 gr. de KH2PO4 y 1 gr extracto de levadura.
En condiciones estriles, inocular los matraces con al menos 3 colonias de la levadura previamente
reactivada e incubar a 30C y 150 rpm durante una semana.
Se determinar el crecimiento celular por absorbancia a 620 nm, usando como blanco agua. El etanol
producido ser cuantificado por tcnica de microdifusin. Este ensayo se realizara en dos tubos
colocados uno dentro del otro. En el compartimiento exterior (tubo ancho) se colocar 0.5 ml de
solucin saturada de carbonato de potasio que causar que el alcohol sea menos soluble en la
solucin acuosa. Por otro lado se prepara el compartimiento interior (tubo angosto) que contendr 1.0
ml de solucin de dicromato de potasio 0.145 % en cido sulfrico 10 N y se coloca dentro del tubo
ancho con la ayuda de una pinza; en presencia de esta solucin el etanol es oxidado a cido actico y
el Cromo pasa a Cr3+ cambiando su color de amarillo anaranjado a transparente.
Una vez preparado el dispositivo se agrega al compartimiento exterior 0.1 ml de muestra y se tapa
con un tapn de goma. Se incuba 60 min a 45C, se saca el tubo angosto y se le agrega 0.5 ml de
agua destilada y se mide la absorbancia a 450 nm.
VII. CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia de obtener etanol a partir de compuestos lignocelulsicos?
Los materiales lignocelulsicos presentan un gran potencial de uso como materia prima para la
obtencin de varias sustancias importantes a nivel industrial despus de ser sometidos a tratamientos
biolgicos microbianos o enzimticos. Los procesos de transformacin de materiales lignocelulosicos
para la produccin de etanol pueden tener una finalidad energtica o bien tener por objeto la obtencin
de materiales transformados o productos qumicos que pueden ser o no utilizados como fuentes de
energa. El empleo de la biomasa lignocelulsica como materia prima en la obtencin de bioetanol,
representa una oportunidad relevante para la produccin de este biocombustible a bajos costos, adems
de contribuir a la solucin de la problemtica ambiental generada por los desechos agroindustriales.
(Montao H. 2014)
(Fernndez J. 1956)
http://www.bdigital.unal.edu.co/45408/1/80765033.2014.pdf
revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/anales/article/view/10747
Proceso de fermentacin
Inocular los matraces con al menos 3 colonias de la levadura previamente reactivada e incubar a
30C y 150 rpm durante una semana.
Determinar el crecimiento celular por absorbancia a 620 nm, usando como blanco agua.
El etanol producido ser cuantificado por tcnica de microdifusin. Este ensayo se realizara en dos
tubos colocados uno dentro del otro. En el compartimiento exterior (tubo ancho) se colocar 0.5 ml
de solucin saturada de carbonato de potasio que causar que el alcohol sea menos soluble en la
solucin acuosa. Por otro lado se prepara el compartimiento interior (tubo angosto) que contendr 1.0
ml de solucin de dicromato de potasio 0.145 % en cido sulfrico 10 N y se coloca dentro del tubo
ancho con la ayuda de una pinza; en presencia de esta solucin el etanol es oxidado a cido actico y
el Cromo pasa a Cr3+ cambiando su color de amarillo anaranjado a transparente.
Una vez preparado el dispositivo se agrega al compartimiento exterior 0.1 ml de muestra y se tapa
con un tapn de goma. Se incuba 60 min a 45C, se saca el tubo angosto y se le agrega 0.5 ml de
agua destilada y se mide la absorbancia a 450 nm.
VIII. CONCLUSIONES:
IX. RECOMENDACIONES:
Fecha de elaboracin:____________________
https://www.researchgate.net/profile/Enrique_Navarro/publication/241216642_Etanol_a_partir_
de_biomasa_lignocelulosica/links/0c96051c8409028b93000000/Etanol-a-partir-de-biomasa-
lignocelulosica.pdf