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GUA DE PRCTICAS

LABORATORIO x TALLER SIMULACIN xX CAMPO

CARRERA: Ingeniera en Alimentos

ASIGNATURA: Biotecnologa de los Alimentos II

NIVEL: Octavo PARALELO: U

REA ACADMICA: DOCENTE: Liliana Cerda-Meja, PhD

CICLO ACADMICO: Septiembre 2017 Febrero 2018

PRCTICA N: 6

I. TEMA:
PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE COMPUESTOS
LIGNOCELULSICOS

II. OBJETIVO:

Objetivo General:

Se evaluar la capacidad de la levadura Saccharomyces cerevisiae de producir etanol a partir de


diferentes compuestos.

Objetivos Especficos:

Preparar diferentes medios de cultivo variando la fuente de carbono para el crecimiento de la


levadura S. cerevisiae en un sistema de lote.

Monitorear la cintica de crecimiento de la levadura S. cerevisiae y la produccin de etanol en los


diferentes medios preparados.

Comparar los rendimientos obtenidos en cada ensayo

III. INSTRUCCIONES:
Todo accidente deber ser notificado de inmediato.
Toda sustancia qumica dentro del laboratorio se considerar peligrosa y su manipulacin estar
sujeta a tal condicin.
Prohibido, fumar, consumir alimentos, bebidas, masticar chicle, maquillarse, o usar calzado
abierto (tipo sandalias).
Las sustancias, equipos y materiales, debern ser manejados con el mximo cuidado, de acuerdo
a los manuales de uso o de seguridad, segn sea el caso.
Durante el desarrollo de las actividades de laboratorio, no debern hacer bromas, juegos de
manos o actitudes impropias que pudiesen originar accidentes.
Es obligatorio reportar de inmediato cualquier desajuste o desperfecto en los equipos.
Utilizar bata de laboratorio en buen estado (ni sucia, ni rota o sin botones).
IV. LISTADO DE EQUIPOS , MATERIALES Y RECURSOS:
Fuentes de carbono Muestra microbiolgica (Saccharomyces
cerevisiae)
- Glucosa
- Bagazo de caa (NH4)2SO4
- Lactosa
- Sacarosa MgSO4 7H2O
Cajas Petri
KH2PO4
Matraces de 500ml
Extracto de levadura.

V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

PARTE I: Aislamiento de la Cepa de Saccharomyces cerevisiae

La cepa de S. cerevisiae. Ser activada en medio PDA.

Se prepararn 100 mL de medio PDA y se vertira en 4 cajas.

Sembrar la levadura por tcnica de estra cruzada, a fin de obtener colonias aisladas y asegurar la
axena de los experimentos.

Incubar a 30C hasta el inicio de las fermentaciones

PARTE II: Preparacin del medio de cultivo

La composicin del medio de cultivo en g/L es: 20 gr. (fuente de carbono), 2gr. de (NH4)2SO4, 0,4 gr.
de MgSO4 7H2O, 5 gr. de KH2PO4 y 1 gr extracto de levadura.

Colocar 250 del medio en matraces de 500 ml.

Esterilizar a 121 C por 15 minutos

PARTE III: Fermentacin

En condiciones estriles, inocular los matraces con al menos 3 colonias de la levadura previamente
reactivada e incubar a 30C y 150 rpm durante una semana.

Diariamente tomar al menos 3 muestras para evaluar el estado del cultivo.

Se determinar el crecimiento celular por absorbancia a 620 nm, usando como blanco agua. El etanol
producido ser cuantificado por tcnica de microdifusin. Este ensayo se realizara en dos tubos
colocados uno dentro del otro. En el compartimiento exterior (tubo ancho) se colocar 0.5 ml de
solucin saturada de carbonato de potasio que causar que el alcohol sea menos soluble en la
solucin acuosa. Por otro lado se prepara el compartimiento interior (tubo angosto) que contendr 1.0
ml de solucin de dicromato de potasio 0.145 % en cido sulfrico 10 N y se coloca dentro del tubo
ancho con la ayuda de una pinza; en presencia de esta solucin el etanol es oxidado a cido actico y
el Cromo pasa a Cr3+ cambiando su color de amarillo anaranjado a transparente.

Una vez preparado el dispositivo se agrega al compartimiento exterior 0.1 ml de muestra y se tapa
con un tapn de goma. Se incuba 60 min a 45C, se saca el tubo angosto y se le agrega 0.5 ml de
agua destilada y se mide la absorbancia a 450 nm.

VI. RESULTADOS OBTENIDOS:


Reportar el rendimiento de produccin de etanol para cada una de las fuentes de carbono y elaborar
un anlisis de resultados detallado, en el que se comparen los resultados obtenidos.

VII. CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia de obtener etanol a partir de compuestos lignocelulsicos?

Los materiales lignocelulsicos presentan un gran potencial de uso como materia prima para la
obtencin de varias sustancias importantes a nivel industrial despus de ser sometidos a tratamientos
biolgicos microbianos o enzimticos. Los procesos de transformacin de materiales lignocelulosicos
para la produccin de etanol pueden tener una finalidad energtica o bien tener por objeto la obtencin
de materiales transformados o productos qumicos que pueden ser o no utilizados como fuentes de
energa. El empleo de la biomasa lignocelulsica como materia prima en la obtencin de bioetanol,
representa una oportunidad relevante para la produccin de este biocombustible a bajos costos, adems
de contribuir a la solucin de la problemtica ambiental generada por los desechos agroindustriales.

(Montao H. 2014)

2. En qu consiste la tcnica de microdifusion de Conway?

El mtodo de microdifusin de Conway, utilizando un sistema de cmara cerrada, permite la


determinacin de sustancias susceptibles de volatilizacin y fijacin en medio apropiado. Dicho
sistema comprende dos compartimentos ubicados de modo que, si en uno de ellos colocamos la
sustancia a volatilizar y en el otro un fijador o atrapador adecuado, al hacer hermtica la cmara se
establecer una corriente del gas desde el rea de su liberacin hacia la de su fijacin; corriente que
estar dada por el simple juego de las diferencias de tensin del gas en ambas superficies.

(Fernndez J. 1956)

3. Describa el proceso de fermentacin alcohlica y mencione por que no se requiere oxgeno


para este ensayo.

http://www.bdigital.unal.edu.co/45408/1/80765033.2014.pdf
revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/anales/article/view/10747

Proceso de fermentacin

Inocular los matraces con al menos 3 colonias de la levadura previamente reactivada e incubar a
30C y 150 rpm durante una semana.

Diariamente tomar al menos 3 muestras para evaluar el estado del cultivo.

Determinar el crecimiento celular por absorbancia a 620 nm, usando como blanco agua.

El etanol producido ser cuantificado por tcnica de microdifusin. Este ensayo se realizara en dos
tubos colocados uno dentro del otro. En el compartimiento exterior (tubo ancho) se colocar 0.5 ml
de solucin saturada de carbonato de potasio que causar que el alcohol sea menos soluble en la
solucin acuosa. Por otro lado se prepara el compartimiento interior (tubo angosto) que contendr 1.0
ml de solucin de dicromato de potasio 0.145 % en cido sulfrico 10 N y se coloca dentro del tubo
ancho con la ayuda de una pinza; en presencia de esta solucin el etanol es oxidado a cido actico y
el Cromo pasa a Cr3+ cambiando su color de amarillo anaranjado a transparente.

Una vez preparado el dispositivo se agrega al compartimiento exterior 0.1 ml de muestra y se tapa
con un tapn de goma. Se incuba 60 min a 45C, se saca el tubo angosto y se le agrega 0.5 ml de
agua destilada y se mide la absorbancia a 450 nm.

4. Qu desventaja tiene la produccin de alcoholes a partir de biomasa lignocelulosica? Cmo se


puede resolver este problema?

5. Investigue los rendimientos reportados en la produccin de etanol a partir de distintos sustratos


como los usados en esta prctica.

VIII. CONCLUSIONES:

IX. RECOMENDACIONES:

VALIDACIN DE LAS GUAS DE PRCTICAS

Fecha de elaboracin:____________________

DOCENTE PLANIFICADOR UTA


COORDINADOR DE REA COORDINADOR DE CARRERA

https://www.researchgate.net/profile/Enrique_Navarro/publication/241216642_Etanol_a_partir_
de_biomasa_lignocelulosica/links/0c96051c8409028b93000000/Etanol-a-partir-de-biomasa-
lignocelulosica.pdf

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