Conocimiento pata el desarrollo, julio-diciembre 2013, 4(2):109-116 Accion genocontaminante del agroquimico metamidofos y del saborizante glutamato monos6dico en el ciclo nucleolar de Aifium cepa L.. Action genocontaminante of the agrochemical methamidophos and the flavoring monosodium glutamate in the AJtinm cepa L. nucleolar cycle Raiil A. Beltrén Orbegoso!, Lidia M. Lizarzaburu Montero Resumen El objetivo del trabajo fue determinar la accion genocontaminante del plaguicida metamidofos 0,05; 0.1 ¥ 0.15 mUL y del saborizante glutamato monosédico 1.0; 2.0 y 3.0 g/L. en los indices de fases del ciclo nucleolar de wna poblacién celular mouonucleada de dium cepa L. Se uso el disetio experimental en estinnlo ereciente: los genatexicas se aplicaron tomanda coma referencia Ins duraciones teoricas de los eiclos celular y nucleolar de 4. cepa L. Luego, las muestras se sometieron a la técnica de coloracién de impregnacién argéntica. Se hallo que metamidofes 0,08 mL altera los indices de fases del ciclo nucleolar y que las conveutraciones de 0,1 y 0.15 m/L retienen a la poblacion celular en las fases del iicléolo organizado y en desorganizacién, anormales, Asi mismo, metamidofos 0,1 mVL induce Ia generacién de células interfisieas con cuatro y cinco nucléolos, evidenciando un probable efecto ‘zenocontaminante en las regiones organizadores del nuciéolo (NOR). El ghitamato monosédieo 1, 3.0 g/L inducen variaciones en los indices de fases del cielo nucleolar de 4. cepa L. pero no generan formas anormales: incluso, se presentan figuras mitoticas de profase, metafase, anafase y telofase, lo cual evidencia que al saborizante ao tiene efecto citostitico. La prueba de los indices de fases del ciclo auclealar de 4. cepa L. se podria usar coma un test complementario a Ia prueba de Ins aberraciones ‘cromosémicas, para identificar los perfiles ecotoxicoldgicos de los productos quimicos que hoy se usan smasivamente en Peri, “Abstract This research evaluates the likely genotoxic effect of pesticide metamidophos 0.05: 0.1 and 0.15 tul/L aud davoring monosodium glutamate 1.0: 2.0 and 3.0 eVL, on Adfium cepa L, monoubeleada cell population nucleolar cyele indexes, Used experimental design in growing: stimulus the genotoxic applied by reference to theoretical durations cell cycles and nucleolar of. cepa L. then the samples submitted to colouring of impreauation teclnique. We found that metamidophos 0,05 mi/L alters nucleolar eyele rates tnd concentrations of 0.1 and 0.15 millL. retain the cell population in the phases of the organized nucleokis and disorganization, abnormal, Likewise, metamidophos 0.1 mU/L induces cell interphase with four and five-generation aucléolos, showing a probable regions genotoxic effect organizers of the nucleolus (NOR), Monosodium glutamate 1.0; 2.0 and 3.0 gL induce changes in indices of nucleolar a. eyele of A. cepa L., but do not generate abnormal: forms even occur mitoticas figures in prophase, metaphase, snaphase and telophase, which evidence thatthe avoring has cytostatic effect. [nsexes of nucleolar test of A cepa L. cond be nsed as a supplementary proof of chromosomal aberrations, test to identify the ‘chemicals that are today used massively ecotoxicological profiles in Per. Introduccién El nucléolo es la estructura del nticleo interfisico eucariota generado por la actividad transcripeional de genes codificantes del ARN ribosémico (Alberts y col., 2002: Paniagua y col, 2007). Durante el ciclo celular, el nucléolo presenta una progresion de diversas formas denominadas en conjunto ciclo nucleolar, dichas formas reflejan los diversos grados de intensidad que alcanza la actividad trauseripcional durante el ciclo vital de una eélula. * Universidad Nacional de Trujillo, sbeltean@unit.ed pe 2 Oficina Central de Investigacion Universitaria, Universidad San Pedeo Recibido: 2 de ochibre del 2013 Aveptado: 20 de diciembre dl 2013,Conocimiento para el desarrollo, 2013, 4(2) El ciclo nucleolar, convencionalmente, ha sido secuenciado en cuatro fases: a) la del muctéolo visible u organizado, asociado a las fases G1, S y G2 de la interfase, en donde se evidencia una intensa actividad transcripcional de los genes mencionadas: b) adel nueléolo en desorganizaci6n, asociado al momento final de la fase Go, en donde el proceso transcripcional disminuye; ¢) del nucléolo ausente, relacionado con Ia etapa de Ja division celular, en donde la transcripcién es escasa: y, d) la del nucléolo en reorganizaciéu, relacionado con el momento terminal de Ia telofase, en donde la actividad transeripeional se reanuda (Alberts y col., 2002; Berkaloff y col, 1996; Paniagtia y col, 2007). Investigaciones recientes han asociado ef nucléolo con Ia regulacion del envejecimiento celular mediante su relacién eon la telomerasa (Rosete y col, 2007), ¥ 1a modulacién de las respuestas de ciertos vertebrados al stress celular ocasionado por cambios estacionales (Alvarez y col., 2003; Alvarez, 2004). Sus regiones argiréfilas se ‘usan como indicadores tempranos de carcinomas en tejidos linfoides humanos (Pich y col, 1995; Kawasaki y col., 2000), de su transeriptoma y proteoma (Andersen y col. 2002; Andersen y col.. 2005: Gracey y col.. 2004), Precisamente, el presente trabajo se orienta a usar las fases del ciclo nucleolar de 4. cepa L. como criterio para medir la citotoxicidad de productos quimicos como plaguicidas, hidrocarburos, ffirmacos, productos de limpieza, solventes de la industria del calzado, golosinas, saborizantes alimentarios que actualmente se expenden y usan. en forma masiva y sin control, en las diversas actividades agricolas, mineras, industriales, sanitarias y domésticas, de nuestro pais y de Ia region La Libertad (Calderén y eol., 2009: Ianacone y Albariito, 2009: Quispe , 2008; Rodriguez, 2009), En la region La Libertad, en los valles de Moche y Vini en el sur, en los valles de Chicama y Jequetepeque en el norte y en la cuenca alta del rio Moche al este de la regidn, los agricultores usan intensamente pesticidas organofosforados y organoclorados. como el metamidofos para el control de plagas y de malezas en cultivares de hortalizas, frutas y legumbres de intensa demanda en el consumo diario (Beltran, 1996; Ministerio de Agricultura, 1999), En cuanto a los saborizantes. el glutamato monosédico (GMS), conocido por el nombre comercial de ajinomoto. y el aspartamo constituyen los potenciadores alimentarios con mayores voltimenes de venta en los principales centros de abastos y supermercados de la regién La Libertad. El GMS se expende como tal y también se halla habitualmente en sopas de sobre, cibit cos”, papitas especiales, snacks, 0 productos “diet” o sin aziicar: algunos estudios reportan su caracter de agente causante del “sindrome del restaurant chino” y de efectos nocivos en el sistema nervioso, ottos reportes aseguran su inocuidad, Por tanto, la interrogante fie {Cudles son los efectos del agroquimico metamidofos a las concentraciones de 0.05: 0.1 y 0.15 ml /L y del saborizante GMS a las coucentracioues de 1,0; 2.0 y 3.0 g/ L, en los indices de fases del ciclo nucleolar de Allium cepa 1.2, fornulandose la hipotesis estocastica causal: Basado en las estructuras quimicas del metamidofos y del GMS, es de esperarse que ambos productos quimicos induzcan variaciones en los indices de fases del ciclo nucleolar de 4. cepa L. El objetivo de la investigacién fue determinar los efectos del agroquimico metamidofos y del saborizante glutamato monosédico en los indices de fases del ciclo nucleolar de 4. cepa,‘Conocimianto para el desarrollo, 2013, 42) Selecci y adecuacién del material biolégico a ser usade como biosensor de los Productos quimices, 50 bulbos irescos de allium cepa L. var. “roja arequipelia” 22 mannrvieron en azua freses, sireecién comstante y temperatura ambiental promedio dz ‘20°C para indocir el crecimiento de raicillas; cuando éstas, alcanzarom los tres cam de Jongitud, 22 constituyeronm en las unidades experimentales. Diseiio experimental. La: raicillas se trabajaron en dos sistemas experimentales I 4. cepa, sometido al metamidofos y I: 4. capa sometido al glutamate monosddico. Cada. sistema estuve constituide por un grupo testigo y tres grupos experimentales A, B,C. Las raicillas Faeron mantanidas en ‘quimicos desde las Oa las 11,0 horas, tiempo en que las células meristemaiticas wanzcurren por las fazes G1 y S de la imerfase. De Les 11,0 a las 17,0 horas, las raicillas se pasaron 2 agua fresca para su zecuperacion, ‘A pamtir de las 17.0 horas, los Spices de las rsicillas fueron disectados pars sar tratsdos 3 1s técnica de impreenacién arzéatica. ‘Técnica de impregnaciin argéntica para coloracién del aucléolo. 2) Fijaciin en ma mezcla 1:1 de formol al 10%¢ e kidroquinona al 1%, b) Lavado de los apices, tres veces, con agua destilada. c) Sumergir los apices en AZNO3 acuoso al 2%, en una astute a JOC por diez horas. d) Lavado de lox apices, wet veces, com agua destilads, €) Postijacicn en formel-hidroquinena por una hora #) Aplastamients de los apices en ‘Scido acético al 50% en Kminillas de vidrio, Determinaciin de los indices de fases del ciclo nucleolar de 4. capa L. Las mmestras Fuerou cbservadas en un microscopio dptice Olympus con los objetives de 4X, LOX, 40 My 100K Los indices de las cuatro fases del ciclo mclaolar de 4. cepa L. 38 100 Mex Burac | 3 8 — vos 902 91 —_ 100 O15 mii Pramedies 376 ia — s 10951005 8 aI? BIT ES 18 13Conocimiento para desarrollo, 2013, 42) ‘Tabla 3 indices promedio, ranes (2) y angulares, de las cuatro fase del ciclo nucleolar dela poblacion monanscleada de.4.cepal. somstia al stborimere sluzamaro monosedico. Cais com moe dexorzmnincion musente reormnimcion Balbo a 100 EulboR 100 Gham: Balbo C 100, omaro- so, 100 sdico PIMOS G99 100 190 100, 100 202t ¢ 22 5 tas ES as: Balboa ; ios 100 Balbo 4s na 108, teams Buibes Ea 40 10 omace- ‘ 38 ao 100 sitio Prametios 1125 Tess 302 ¢ na s ae ES 2 Figura 1. Cust célules maristemticas mononuclesdas de . cepa L., sometides al agroquimico metamsidofos 0,1 ml, mostrendo exe Cato y cinco muclaoios en la fe del mucisolo orgumzzado, 100050Conoamiento para el desarrolie, 2013, 4,2) Discusion La tabla 1, presents los ivdices promadio reales de las custro fares del ciclo ‘mcleolar hallados en la poblackin meristemitica monomuclesda, te:tizo, los cuales son, de 81,0%; 4 39%; 3,5% y 11,284 de células con mucléclo organirado, en desorgmnizacicn, susenie ¥ en reorganizacion, respectivamente. Los indices de las fases mncleolares hhallados en el presente trabajo son similares 2 los determinados en investizaciones sobre a1 muléolo, 10 cual indica que Is proporcionalidad de las fuses a: constame 3 Is ‘temperanura en Ia cual 52 wabaje, siendo Ia duracién dal ciclo lo variable (Lm y col. 1924; Lm y Tang. 1991; Lia, 1994). En ls tabla 2, 52 presentan los indices promedio reales de las cuatro fases del ciclo micleolar hallados en la poblacién meristemérica somenda al plazuicids orgmofosforado metamidefos en las concentraciones de 0,05 mi/L; 0,1 mill y 0,15 mi/L. Metamidofos es uno de los plazuicidas més usados en la agriculmra peruana, (Ministario de Agriculture, 1990), se Ie expande con dos formulacionss de diferente Categoria wsicolizice [Monofos®, categoria Ia (extemadamene palizrow) y Tamaron‘, categoria (altamente peligroso)] (Ministerio de Agriculrua, 1997. Su uso se hha prohibido en Is commmidad europea, pero en Sudamérics s emplea como scaricida = insecticide, El metamidafos 0,03 mJ/L genera $5,1%%; 10,096; 2.6% y 23% de céhulas con smcléolo organizado, en desorgmnizacién, amsente Yen reorganizacion, respectivamnente. ‘Al comparar los valores de Iz tabla 2 com los del grupo se evidenda un ‘nportante incremento dz Ia faze del mucléolo en descrzanizacion y una disminncign de Je Gize del mucliolo en reorganizacién, lo cual nos indica qua al azroquimico be sfectado Ia dinamica celular de loz meristemos. El afzcto 22 azudiza en lz poblaciin celular sometida a las concentraciones de 0,10 y 0,15 ml/L, en donde el azroquimico cevidencia in fuerte eftcto citostitico, al detener el ciclo celular en las fases mucleolares de orzanizacién y desorzmnizacién, pues no se hallaron células en las fases de-mocléolo susamte ni del muclolo an reorzanezacién. En el anilisis de ciertos campos microscipicos se pudo vieualicar a 1000, a cétulas mostrando custro o cinco mucléoles en su miles, tal como se observa en Is figura 1. Ls anormal expresida de los miciéolos, se debe a una anormal expresisn de las regiones AgNORS y por tanto 3 tm probable efecto genotsxico del metamidofos 0,1 anl/L em los bucles del ADN encargados de la sintests del ARN mbosdmmico (Lodish y col, 1990). Esta dissresaciéa de las reziones AsNORs se podkia constituir en un sezmdo criterio de evaluaciGn para daterminar Ia cittozicided de los productos quimices, tomande como referencia al ciclo nucleolar. En reciente: investizacionss sobre Is relacién del muciéolo con carcinomas y melanomss, las altersciones de los AENORs han sido considersdas como indice biolégico de agresividad de un tumor (Pich y col, 1995; Kawasaki y col., 2000). En le tabla 3, se presentan los indices promedio reales de las cuatro fases del ciclo mmcleolar llados en la poblaciin meristemitica sometida al seborizame glutamato monosédico au les concemmaciones de 0,1 pL, 0,2 gh y 03 gL. El gluamo mmonosédico (GMS) 2: al saborizante mas consumide x el Berd yal mundo, es la zal sédica del aminoicido écido elutamico o glutamate que s2 encuentra de forma natural ea mumerosos alimentos como los tomates, setas, verduras, proteins ¢ incluso 1a leche mmaterma. Su formule es CsHONO.Na ¥ su nombre quimico es sodio (2S)-2-amino-- bidroxi-5-ono-pentanoato. El GMS ex uno 2 los productos induswiales ms polémicos (Pues mientras que un grupo de ciantificos sostienen su cardcter de inocuo, owo grupo de msConocimiente para el desarrotio, 2013, #12) Investigadores lo considera como una sustancia capa de inducir cuadros de alteracioncs: sicolegicas (Berk y col, 2001; Tanaka y cal, 1997, Paul y Skolaiek, 2003). Al comparar los promedios veales de este grupo experimental con los. del grupo testig, fo existen diferencias significativas, EL GMS 0,1 gil. genera #2,0%, 3.9%, 2.8% y 11,3% de células con nucléolo organizado, en desoeanizaciin, ausenie yen reorganizacién, respectivamente: y a las concentraciones dé 0.2 g/L. y 0.3 g/L. presenta tuna. ligera disminucion de la fise del nucigalo en reorganizacion. Sin embargo, Ea ccinetica y proporcion celular de las cuatro fases nucleolares es similar al testigo. Los resultados mucsiran que ¢l GMS nu tendria efecto citotGxico, fo cual no concucrda eon investigaciones recientes que sefilan su caricier toxico para Ia salud, sin embargo, habria que realizar pruebas complementarias pora foemular una eonclusién definitiva. ‘Conclusiones £1 agragquimico metamidlofos 0,05 mi/L afecta Jos indices de fases nucleotares de Aili cepa |. generando 85.1%, 10.08%, 2.6% y 2.3% de eélulas con indices nucléolo organizado, en desorganizacidn, usents ¥ en teorganizacion, respestivamete El metamidofos 0,10 y 0,15 mV eviencia un fuerte efecto citostiticn, al detencr el rice celular de 4. coper Len las fases nucleolares de arganizacién y desorganizaciGn, asi mismo, a la coneentracidn de 0,L mV. induce la generaciéin de eelulas interfisicas £00. cuatro ¥ cesco nuelkoles, exidenciande un probable efector genotowica en las Fegiones organtzinlores del nucleolo (NOR). EL saborizante glutamato monosixdico (1; 0.2 y 02 gil no genera un indice significative de fies nucleotares anormales Sin embargo, st probable inocuidad sdeberia evalunrse con pruebas eomplementarias Referencias bibliogrificas Alberts, B., Johnson, A, Lewis, J, Raff, M., Roberts, K. & Waller, P (2002) Molecuiar biology of the cell. Ed.) New York: Garland Science Alvarez, M.. Quezada. C., Navarro, C_, Molina, A., Bouvet, P, Krauskopf, Mt. & Vera, M1. (2003), An increased expression of nucleolin is associated with a physiological nucleolar segregation. Biochem. Biophys. 301- 152=158 Alvarez, M., Molina, A., Quezada, C., Pinto, R., Krauskopf, M. & Vera, M1 (2004) Eurythermal fish acclimatization and nucleolar function. J. Therm, Biol 29: 663— 667 Andersen, JS... Lyon. CE, Fox, AH. Leung. AK., Lam, YW. Steen, H. Mann, M. & Lamond, A.J. (2002), Directed proteomic analysis of the human nuclealiss, Cut, Biol. 83) 111 Andersen, J.S.. Lam, YW. Leung. 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