Especialistas en medios de cultivo

AGAR BILIS Y ROJO VIOLETA

USO
EL AGAR BILIS Y ROJO VIOLETA, ES UN MEDIO UTILIZADO PARA LA DETECCIN Y RECUENTO DE ORGANISMOS COLIFORMES PRESENTES EN AGUA, LECHE Y OTROS
MATERIALES DE IMPORTANCIA SANITARIA

EXPLICACIN
Este medio es utilizado en uno de los procedimientos para llevar a cabo la deteccin, enumeracin e identificacin presuntiva de
microorganismos coliformes. En este medio las colonias de coliformes presentan una morfologa tpica que permite su identificacin
presuntiva y que debe ser confirmada mediante reacciones bioqumicas.
El grupo de bacterias coliformes incluye bacilos Gram negativos aerobios y anaerobios facultativos no esporulados, que fermentan la
lactosa y forman cido y gas a 35 C entre 24 a 48 horas.
Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se desarrollan en este medio, el cido producido por la
fermentacin de lactosa, ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la precipitacin de las sales biliares por lo que las colonias son
color rojo obscuro y generalmente estn rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa y la posibilidad de
contar las colonias se fundamenta en su dispersin y separacin.
En este medio, la peptona provee la fuente de carbono y nitrgeno necesaria para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de
levadura provee vitaminas del complejo B para estimular el crecimiento bacteriano. Las sales biliares y el cristal violeta actan como
inhibidores de microorganismos Gram positivos. La lactosa es la fuente de carbohidratos y el rojo neutro acta como indicador para
evidenciar el cambio de pH como consecuencia de la fermentacin de la lactosa. El agar acta como agente solidificante.

FRMULA

Extracto de levadura.................................. 3.0 g Peptona de gelatina............................................................... 7.0 g

Mezcla de sales biliares............................. 1.5 g Lactosa........................................................................................ 10.0 g

Cloruro de sodio.......................................... 5.0 g Rojo neutro................................................................................ 0.03 g

Cristal violeta................................................ 0.002 g Agar bacteriolgico................................................................ 15.0 g

pH...................................................................... 7.4 0.2 a 25 C

PREPARACIN
Mtodo
Suspender 41.5 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante
un minuto. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas Petri estriles. Si se desea
puede esterilizar en autoclave a 118C durante 15 minutos.

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Procedimiento
1. Seguir las recomendaciones apropiadas para la toma y procesamiento de las muestras.
2. Colocar una alcuota de 1.0 mL de la muestra en una placa de Petri estril.
3. Adicionar 15 mL del medio enfriado a una temperatura de 45-50C y mezclar suavemente.
4. Permitir que el medio solidifique y adicionar 4 mL del medio enfriado a una temperatura de 45-50C.
5. Permitir que el medio solidifique e incubar a 35 2C durante 18 a 24 horas. Se recomienda la incubacin a 32C para muestras de
productos lcteos.
6. Examinar las colonias de color rojo a prpura, de 0.5 mm de dimetro (o ms grande) rodeadas por un halo con precipitado de
cidos biliares.

RESULTADOS
La morfologa colonial tpica se describe en la siguiente tabla:

MICROORGANISMO ATCC CRECIMIENTO MORFOLOGA COLONIAL

Enterobacter aerogenes 13048 Bueno Rojo, puede tener ligero precipitado rojo alrededor
de las colonias.

Escherichia coli 25922 Bueno Rojo profundo con precipitado rojo alrededor de las
colonias.
Staphylococcus aureus 25923 Inhibicin parcial -----
o completa

Salmonella enterica 14028 Bueno Colonias incoloras.

serotipo Thyphimurium

Examinar las placas despus del perodo de incubacin. Las caractersticas morfolgicas se resumen en la siguiente tabla:
Fermentadores de Lactosa Colonias de color prpura a rojo con o sin zona de precipitado.
No fermentadores de Lactosa Colonias incoloras o transparentes, puntiformes.

PRESENTACIN Y ALMACENAMIENTO

CAT. N PRESENTACIN ALMACENAMIENTO

7011 Medio deshidratado Frasco 450 g 2 - 30C
7012 Medio deshidratado Frasco 500 g 2 - 30C
7013 Medio deshidratado Caja con 20 sobres para un litro 2 - 30C
7014 Medio preparado en paquete con 10 placas 2 - 8C
7016 Medio semipreparado en frasco caja con 12 frascos 2 - 8C

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BIBLIOGRAFIA
1. Marshall, R. T. (ed.). 1993. Standard methods for the examination of dairy products, 16th ed. American Public Health Association, Washington, D.C.
2. Vanderzant, C., and D. F. Splittstoesser (eds.). 1992. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health Association, Washington, D.C.
3. U.S. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD.
4. Allaert. V.C. y Escol, R.M. 2002 Mtodos de anlisis microbiolgicos de alimentos. Ed. Daz de Santos. Pgs. 248.

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