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Tecnico
[Título del curso]
MANUAL DE
MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
1
DEDICATORIA
Y así también este manual servirá a los microbiólogos como una guía de trabajo
diaria, contando con pautas y procedimientos de cultivo, esterilización y demás.
3
Seguridad en el laboratorio
Recomendaciones importantes
1. El uso de bata en el laboratorio es obligatorio cuando se realizan
experimentos. Es recomendable vestir ropa sencilla, que proteja la mayor
parte del cuerpo de preferencia de algodón, zapatos cerrados con suela
gruesa, y tener el pelo recogido.
2. No introducir ni consumir alimentos o bebidas en el laboratorio. No fumar,
ni tocarse la cara o los ojos con las manos.
3. Lavarse de manera meticulosa las manos con jabón y agua antes del
laboratorio, incluso cuando salgan por breves periodos.
4. Al manipular sustancias químicas corrosivas o peligrosas se utilizarán
guantes, lentes protectores y/o, mascarillas. No se deberá pipetear
oralmente ningún tipo de solución o cultivo microbiano. Siempre se
utilizarán propipetas adecuadas.
5. No se admitirán visitas personales ni el uso de aparatos que distraigan la
atención y pongan en riesgo la seguridad en el trabajo.
6. Evitar la acumulación de materiales innecesarios en las mesas de trabajo.
Realizar las actividades de manera ordenada y en silencio para evitar
accidentes.
7. Localizar extintores, botiquín y salidas de emergencia.
Métodos de esterilización
Vía Seca
La esterilización por vía seca o calor seco es una variante del autoclave en la
que no se usa vapor, al ser menos agresivo (en ausencia de agua el calor se
transfiere peor al material) se utiliza a más alta temperatura y durante más
tiempo. El calor seco desnaturaliza las proteínas, funde los lípidos de las
membranas y provoca la desecación de los microorganismos.
Los objetos que pueden esterilizarse con calor seco son los metálicos, el vidrio
o plásticos como PTFE/PFA (teflón) que pueden soportar la elevada
temperatura.
Métodos químicos
Mediante este método se puede conseguir desinfectar y/o esterilizar material de
laboratorio usando diversos productos químicos tanto en fase gaseosa como en
liquida por su capacidad para eliminar los microorganismos. Los métodos
químicos permiten la esterilización de materiales e instrumentos a baja
temperatura.
Como apenas produce calor y no genera residuos se puede usar con muchos de
los materiales de laboratorio e instrumental clínico de metal, vidrio y plástico.
El uso de estos materiales, así como de los diferentes medios de cultivo tienen
aplicaciones específicas. Por ejemplo:
Los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones
de algodón o tapones especiales. Un cultivo liquido puede ser transferido
mediante un asa microbiológica, un hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inoculo se
deposita dentro del caldo o medio líquido. Una de las ventajas que presenta este
tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de
microorganismos anaerobios. La desventaja, es que en ellos es difícil detectar
contaminación a simple vista.
Los medios semisólidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra
(asa recta) o pipeta pasteur; en este último caso es necesario calentar el medio
y cuando se encuentra en estado líquido y a una temperatura de
aproximadamente 42°C se agrega el inoculo se homogeniza y se deja solidificar.
Técnicas de siembra
Método de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos.
Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la población
mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio
solido preparado en una placa Petri (a las placas Petri también se le
llaman simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag
con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región
donde se han realizado las ultimas estrías y se continua la siembra con la
misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este
proceso varias veces se logra separar células individuales. A
continuación, las placas se incuban suficiente de divisiones para formar
colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon
derivado de una sola celula, no podemos asegurarlo. Quizas, dos células
quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia
mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo
axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien
aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda
vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.
Posteriormente el filtro es transferido a una caja de petri que cuenta con un caldo
nutritivo, en la cual las colonias surgen de las bacterias en la superficie del filtro.
Las colonias bacterianas formadas por este método son distintivas cuando
ocupan un medio diferencial.
Método de turbidez
Para algunos experimentos, es necesario estimar turbidez, ya que es una forma
práctica de monitorizar el crecimiento bacteriano. Como una bacteria se
multiplica en un medio líquido, éste se torna turbio o de aspecto nublado por las
células. El instrumento usado para medir la turbiedad es un espectrofotómetro
(colorímetro). En el espectrofotómetro, un haz de luz es transmitido a través de
la suspensión bacteriana a un detector sensible a la luz. Mientras incremente el
número de bacterias, menor será la luz captada por el detector. Este cambio en
la luz se registrará en la escala del instrumento como el porcentaje de
transmisión. También se registra una expresión logarítmica llamada absorbancia
(algunas veces nombrada densidad óptica), un valor derivado del porcentaje de
transmisión que puede ser reportado. Más de un millón de células por mililitro
deben estar presentes para que la primera señal de turbidez sea visible.
Aproximadamente de 10 millones a 100 millones de células por mililitro son
necesitadas para hacer una suspensión suficientemente turbia para leer en el
espectrofotómetro. La turbidez no es útil para medir contaminación en líquidos
por la pequeña cantidad relativa de bacterias.
Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual está
formado por una serie de tubos rígidos ramificados, dentro de los cuales se
encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el nombre de hifas.
De esta forma a partir de una espora en germinación se desarrolla una hifa, esta
se ramifica y forma un micelio.
El crecimiento del hongo se prolonga hasta que los nutrientes desaparezcan. Las
hifas pueden ser de dos tipos: vegetativas que penetran el substrato con el fin
de absorber nutrientes e hifas aéreas que son las portadoras de las estructuras
reproductoras. La clasificación de los hongos se hace según las características
de las hifas, la formación de esporas asexuales, las estructuras que contienen
éstas y la capacidad de producir esporas sexuales.
BIBLIOGRAFÍA
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