BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

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GUÏA DE PRÁCTICA

Trujillo
2016-10

7 Actividades de Práctica E.L.L. & P.Ch.M.

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OBSERVACION DE ORGANELOS CITOPLASMATICOS

1. OBJETIVOS
1. Identificar a los componentes del sistema de endomembranas como el retículo endo-
plasmático (rugoso y liso), aparato de Golgi y lisosomas en cortes de tejidos animales.
2. Identificar mitocondrias en cortes histológicos de tejidos animales.

2. INTRODUCCIÓN

El citoplasma de las células eucariotas, a diferencia del de las procariotas, se

caracteriza porque se encuentra recorrido en toda su extensión por un sistema
membranoso que separa el citosol de las cavidades internas que limita. Este complejo de
membranas, que puede ocupar una buena parte del volumen total del citoplasma, consta
de una serie de compartimientos membranosos dotados de enzimas, que les permite llevar
a cabo actividades celulares específicas como los procesos metabólicos propios de toda
célula, el almacenamiento y transcripción de información genética, síntesis de proteínas,
etc.
Este alto grado de compartimentación originó los organelos citoplasmáticos como el
retículo endoplasmatico (rugoso y liso), complejo de Golgi, endosomas y lisosomas los
mismos que junto a la envoltura nuclear forman el Sistema de Endomembranas donde existe
constantemente intercambio de materiales entre ellos. Esto es facilitado por una red
dinámica integrada en la que los materiales se distribuyen en pequeñas vesículas de
transporte limitadas por membranas que se mueven por el citoplasma en forma dirigida, a
menudo tirada por proteína motoras que operan sobre rieles formados por microtubulos y
microfilamentos del citoesqueleto.
Muchas proteínas destinadas al retículo endoplasmático (RE), al aparato de Golgi, a
los lisosomas, a la membrana plasmática o aquellas que son secretadas se sintetizan en
ribosoma fijos (adheridos a la membrana del retículo endoplasmático), constituyendo la via
biosintética o secretora. Durante su síntesis por los ribosomas, estas proteínas son
translocadas cotraduccionalmente al lumen del RE donde son plegadas y procesadas en su
primera fase luego transportada, a través de vesículas de transporte, al aparato de Golgi
donde termina dicho procesamiento. En la cara trans del Golgi, son clasificadas,
empaquetadas y dirigidas a diversos lugares como la membrana plasmática (proteínas
integrales), los lisosomas o exportadas fuera de la célula, como también sucede con
polisacáridos complejos producidos en el aparato de Golgi. Algunos de estos organelos,
además de los endosomas, participan en la vía endocítica donde diversas proteínas son
internalizadas desde el medio extracelular.
Como se podrá apreciar, existe un tráfico intracelular de membranas donde diversos
materiales (lípidos, proteínas, etc,) son transportados constantemente entre los
componentes del sistema de endomembranas, los mismos que a continuación se describirá
brevemente:
Retículo Endoplasmático: Aproximadamente la mitad del área total de membrana de una
célula eucariota engloba los espacios laberínticos del retículo endoplasmático. En el hígado
se calcula que hay aproximadamente 11 m2 de retículo endoplasmático en 1 cm3 de tejido.
Este organelo está diferenciado en dos compartimientos cuyas superficies citoplasmáticas
de sus membranas presentan ribosomas, como es el caso del retículo endoplasmático
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rugoso (RER) o carecer de ellos como el retículo endoplasmático liso (REL). El RER tiene una
morfología variable, presentándose como vesículas membranosas cuando es muy
abundante, en forma de cisternas aplanadas (sáculos) o adquiriendo el aspecto de láminas
paralelas. La disposición de los sáculos varía en función de la naturaleza de la célula y de la
importancia de su actividad. El RER está muy desarrollado en células que producen
proteínas para exportación como en los acinos pancreáticos o en las células de las glándulas
salivales. El REL está constituido por un sistema laberíntico de túbulos irregulares,
ramificados y anastomosados e interviene en diversos procesos como la detoxificación,
metabolismo de hidratos de carbono, almacenamiento de calcio, etc. Está bastante
desarrollado en células que secretan hormonas esteroideas.

Aparato de Golgi: Morfológicamente este organelo está compuesto por bolsas aplanadas
rodeadas de membranas (cisternas) constituyendo los dictiosomas cuyo número varía en
función del tipo celular. Los dictiosomas, que están conformados por cuatro a seis
cisternas, presentan dos caras distintas: una cara cis (o cara de entrada) y una cara trans
(o cara de salida). Cada una de ellas están unidas a su respectiva red de estructuras túbulo-
vesiculares: red tubular cis del Golgi (CGN) o red tubular trans del Golgi (TGN). Tanto la CGN
como la TGN funcionan como estaciones de clasificación: mientras que en la primera se
distingue entre las proteínas que deben enviarse de regreso al RE y aquellas a las que se les
permite avanzar a la siguiente estación de Golgi; en la segunda, se clasifican y se
empaquetan en diferentes tipos de vesículas que se transportaran a su destino final.
Lisosomas: Son vesículas membranosas que contienen enzimas hidrolíticas que intervienen
en la digestión intracelular. Estas enzimas comparten una propiedad importante: todas
alcanzan su actividad óptima en un pH ácido, por lo que son hidrolasas ácidas. El pH óptimo
de estas enzimas se sitúa por debajo del pH del compartimiento lisosómico, que se
aproxima a 4.6. En una célula que tiene poco combustible, los lisosomas pueden degradar
organelos (autofagia), de manera que sus componentes puedan utilizar la energía
generada. También degradan moléculas extrañas ingeridas por las células. Cuando un
leucocito o una célula de defensa ingieren bacterias o restos de una célula muerta, el
cuerpo extraño es incluido en una vesícula compuesta de una porción de la membrana
celular. Los lisosomas se fusionan con el endosoma que contiene al cuerpo extraño y
forman una gran vesícula, llamado lisosoma secundario. Las potentes enzimas digestivas
entran en contacto con las moléculas. Los lisosomas tienen una importancia particular en
medicina, ya que están involucradas en muchas enfermedades y síndromes. Las
enfermedades lisosomales puede deberse a una lesión de su membrana o por acumulación
intracelular de sustancias.
Las mitocondrias y los peroxisomas no forman parte de este sistema inter-
conectado de compartimientos membranosos, aunque en la actualidad existen indicios de
que los peroxisomas tienen un origen doble; es probable que los elementos básicos de su
membrana limitante surjan del RE, pero la mayor parte de sus proteínas de membrana y
luminales son tomadas del citosol. En seguida haremos breve descripción de estos
organelos.
Mitocondrias: A diferencia de la mayoría de los organelos citoplasmáticos que son de
membrana simple, las mitocondrias son de membrana doble y lo bastantes grandes para
verse con el microscopio óptico. A microscopía óptica, se observan como gránulos,
bastones, filamentos o raquetas cuyo tamaño varía entre 1 y 4 µm de largo y con un
diámetro de 0,5 - 1,0 µm. Esta apariencia ha fomentado la ampliamente aceptada visión de
que las mitocondrias son entidades separadas y que son organelos grandes y numerosos.
El condrioma ocupa aproximadamente el 15 a 20% del volumen de una célula hepática
promedio de mamífero. Estos organelos contienen las enzimas del ciclo de Krebs y de la
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fosforilación oxidativa, así como los componentes de la cadena transportadora de

electrones. De ahí su importancia metabólica, tanto en la oxidación de los carbohidratos
como en la de los lípidos con la consiguiente formación de ATP. Pueden sufrir alteraciones
de tipo cualitativa o cuantitativa. Entre las primeras están, la tumefacción turbia, cristolisis,
homogeneización de crestas (en hepatitis viral). Alteraciones cuantitativas son: la
hipertrofia (por alcohol, uremia, falta de riboflavina, desnutrición, etc.); mitocondrias
gigantes (en células hepáticas en daño por alcohol), y otras.
Peroxisomas Estos organelos, junto con las mitocondrias, desempeñan una función
primordial en la utilización del oxígeno. Se asemejan a la mayoría de organelos que forman
parte del sistema de endomembranas en el sentido que está limitada por membrana
simple. Son vesículas esféricas con un diámetro de 0,1 – 1,0 µm que puede contener un
centro denso y cristalino de enzimas oxidativas. Según el tipo celular, intervienen en
diferentes funciones, pero siempre, como resultado de la actividad, se forma y degrada
peróxido de hidrógeno (H2O2), sustancia tóxica para las células pero degrado en agua y
oxígeno por la catalasa.

3. MATERIALES

Microscopio, preparados histológicos, aceite de cedro.

4. PROCEDIMIENTO

A. RETÍCULO ENDOPLÁSMICO RUGOSO:

1. Observe al microscopio con objetivo de 40x un corte transversal de médula espinal.
2. Identifique en las neuronas pequeñas granulaciones denominados corpúsculos de
Nissl, constituidos por el retículo endoplásmico rugoso y ribosomas, que se tiñen
intensamente con los colorantes básicos (hematoxilina). La coloración del
preparado puede ser Hematoxilina de Ehrlich ó Luxol fast blue.
3. Esquematice.

B. RETÍCULO ENDOPLÁSMICO LISO:

1. Observe al microscopio con objetivo de 100X un corte de glándula suprarrenal.
2. Identifique en la zona cortical unas células de forma poliédrica, con un núcleo
esférico central y citoplasma acidófilo o débilmente basófilo con gran número de
gotitas de lípidos (extraídas por solventes orgánicos durante la técnica
histológica), que le dan la apariencia de un aspecto esponjoso (espongiocitos). La
coloración del preparado es Hematoxilina-Eosina.
3. Esquematice.

C. APARATO DE GOLGI:
1. Observe al microscopio con objetivo de 40x, un corte transversal de epidídimo.
2. Identifique en el corte, un tubo epididimario. Observe las células principales con
núcleo oval localizado cerca a la membrana basal. Se observa en el citoplasma el
complejo de Golgi bastante desarrollado, que se encuentra arriba del núcleo cerca
a la membrana apical. Este organelo se observa como unas formaciones
reticulares de color oscuro. La coloración del preparado es Impregnación
Argéntica.
3. Esquematice.

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D. LISOSOMAS
1. Observe al microscopio con objetivo de 100x, un corte transversal de riñón.
2. Identifique unas zonas donde se aprecia un precipitado negro (debido a la
presencia de fosfatasa ácida que es un marcador lisosomal). La coloración del
preparado es Glicerofosfato de Plomo.
3. Esquematice lo observado.
E. MITOCONDRIAS.
1. Observe a 100x el corte transversal de riñón
2. Identifique la porción de las células que presentan abundantes prolongaciones
laterales que se interdigitan con las de las células vecinas. Tales prolongaciones
aumentan considerablemente la superficie basal de la célula y es donde las
mitocondrias están concentradas. La coloración del preparado es fosfotúngstica
de Mallory.
3. Esquematice lo observado.

5. RESULTADOS

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6. RESUELVA

1. Qué importancia tiene la compartimentación celular?

2. Explique a que se debe que los ribosomas solo se unan a la membrana del RER y no a la
del REL si son organelos que presentan continuidad física de sus membranas?
3. Establezca diferencias en el proceso de glucosilación de proteínas producidas en el RER
y aparato de Golgi.
4. A que se denomina secreción constitutiva y secreción facultativa. Cite ejemplos.
5. Porque se dice que las mitocondrias son organelos autónomos?
6. Explique brevemente porque la respiración aeróbica aportan más energía que la
anaerobia?
7. Explique brevemente el mecanismo que produce las enfermedades lisosomales.
8. Como explica Usted que las enzimas lisosomales no digieran los componentes químicos
de la membrana lisosomal?

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7. BIBLIOGRAFIA

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