UNIDAD 3.

PASO 4 - RECONOCER LAS TÉCNICAS DE BIOTECNOLOGÍA

REPRODUCTIVA ANIMAL

TUTOR VIRTUAL

EDWIN MANUEL PAEZ BARON

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”

ECAPMA

REPRODUCCÓN AVANZADA

ZOOTECNIA

12 DE MAYO DE 2017
 INTRODUCCÍON

El presente trabajo consta de un caso de estudio que está relacionado con un ganadero del
municipio de Chiquinquirá (Boyacá, Colombia), que tiene una ganadería lechera especializada de
tipo Bos taurus, de raza Holstein, el planea adquirir una hembra de raza Jersey de alto valor
genético, campeona nacional y quisiera obtener varias crías de las misma para esto se le deberá
aconsejar sobre la técnica de fertilización in vitro (FIV) y posterior a ello, la transferencia de los
embriones.

La biotecnología reproductiva, consiste en una serie de procedimientos, los cuales tienen como
objetivo principal el mejoramiento genético y por ende aumentar la producción y productividad en
sistemas de producción ya sea ovinos, caprinos, equinos y como es el caso en bovinos, por otra
parte la transferencia de embriones es una herramienta biotecnológica de uso cada vez mayor que
permite optimizar la recolección de embriones por cada hembra donante, y así multiplicar la
población bovina con una excelente genética.
 OBJETIVOS

General

Compilar Consolidar la información recolectada para poder dar una asesoría indicada, en pro del
bienestar del animal y la rentabilidad del sistema de producción en este caso para un hato lechero.

Asesorar a un ganadero del municipio de Chiquinquirá en cuanto a la técnica de fertilización in

vitro como técnica de biotecnología reproductiva para el mejoramiento genético de la ganadería
lechera

Específicos

 Reconocer aspectos generales de la Fertilización in vitro, la obtención y maduración de

ovocitos para la adecuada transferencia de embriones.
 Identificar la técnica de fertilización in vitro para su posterior aplicación.
 Indicar los productos y protocolos a utilizar.
 Mencionar los materiales y costos que se emplearan.
 Identificar y dar a conocerAnalizar las ventajas y desventajas de la técnica seleccionada.
 Dar a conocer de forma minuciosa los materiales y protocolos necesarios para la técnica y sus
respectivo análisis de costos


Contextualización del caso

Un ganadero del municipio de Chiquinquirá (Boyacá, Colombia), tiene una ganadería lechera
especializada de tipo Bos taurus, de raza Holstein, con un total de 400 animales en el hato,
constituyendo los animales en producción un total de 120 animales, con hembras entre 1 y 6 partos.
Con manejo de tipo semi-intensivo, con pastoreo rotacional, praderas con pastos mejorados (Rye
grass, Avena) y suplementación con alimento balanceado según producción.

El ganadero maneja la inseminación artificial como herramienta reproductiva de su hato, sin

embargo, quiere mejorar la eficiencia reproductiva del mismo, ya que se presenta animales con
días abiertos de hasta 155 días, e intervalos entre partos de hasta 470 días, teniendo un plan de
manejo nutricional y sanitario adecuado implementado en su hato. El ganadero solicita su asesoría
para conocer qué tipo de herramientas de biotecnología reproductiva puede incorporar en su hato,
cuales los requerimientos, los elementos, los beneficios y las desventajas de su implementación,
entre otros aspectos.

Asimismo planea adquirir unos animales de alta genética con el fin de mejorar el hato, para lo cual
usted deberá también asesorarlo en la implementación de las técnicas de biotecnología
reproductiva a implementar.
En este sentido, usted deberá realizar la investigación acerca de las condiciones de la zona, y
plantear cuales serían las mejores recomendaciones para el ganadero.

El ganadero quiere incorporar al hato la técnica de Fertilización in vitro, ya que planea adquirir
una hembra de raza Jersey de alto valor genético, campeona nacional y quisiera obtener varias
crías de las misma por medio de la utilización de esta técnica. Usted deberá aconsejarle cuales
alternativas para este proceso propondría y cuál sería el protocolo más aconsejable para
implementar.

Técnica in vitro
Consiste en la incubación de ovocitos maduros con espermatozoides altamente capacitados dando
lugar a la fecundación fuera del aparato reproductor femenino, proceso que se lleva a cabo en
laboratorio, cuando ya ha pasado el tiempo indicado, se hace la trasferencia de embriones a las
hembras receptoras, es importante tener en cuenta los siguientes factores:

 Obtención de espermatozoides.
 Capacitación de los espermatozoides.
 Obtención de ovocitos.
 Maduración de los oocitos cuanto estos no son maduros.
 Coocultivo de los espermatozoides y los ovocitos.
 Valoración de los resultados.

1. Teniendo en cuenta que hay varios técnicas para realizar la fertilización in vitro, le recomiendo
al productor la siguiente:

Técnica Ovum Pick Up (OPU)

Consiste en la recolección de oocitos de folículos en ovarios de hembras vivas, por medio de la

aspiración folicular transvaginal, para realizar este proceso adecuadamente, es necesario emplear
la ecografía a través de la pared del fornix vaginal, teniendo en cuenta que se puede presentar un
impacto considerable en la cantidad y morfología del cumulus oophorus (CCOs), es el grupo de
del folículo ovárico que rodean al óvulo en el estado de folículo preovulatorio.

En conclusión, la aspiración folicular transvaginal es un procedimiento que permite la

recuperación repetida de ovocitos de donantes vivas, siendo una técnica de alta eficiencia y
repetibilidad, lo que permite al combinarla con la fertilización in vitro superar con creces el número
de becerros obtenidos por donante en un periodo fijo de tiempo en comparación con la
superovulación. La aplicación de esta técnica puede, además, incrementar el número de donantes
de ovocitos entre las cuales se podrá contar con hembras pre-puberales, lo que permitiría reducir
el intervalo generacional y así incrementar el progreso genético. Para emplear esta técnica en la
especie bovina se debe tener en cuenta la edad, raza y su estado corporal. Para llevar a cabo esta
 técnica de aspiración folicular in vivo se
requiere contar con un equipo de
ultrasonografía, un transductor sectorial, una
bomba de aspiración y un sistema de guía de
la aguja. La sonda ultrasonográfica para OPU
ha sido construida con la finalidad de que
permita la manipulación de la aguja desde el
exterior del animal y que el transductor esté
en contacto con los ovarios; de ese modo, el
extremo de la aguja pueda ser visualizado cuando penetra dentro de los folículos que serán
aspirados. La aguja está conectada a la bomba de vacío por medio de una tubería plástica o de
silicona, lo que permite que el contenido folicular sea vaciado directamente al filtro, que es similar
al utilizado para la recolección de embriones.

Teniendo en cuenta que esta técnica se implementara en una vaca raza Jersey, se debe
considerar lo siguiente:

 Debe ser seleccionada previamente por cualidades de genética superior demostradas en su

fenotipo y en sus características productivas y características reproductivas ováricas, ella es la
encargada de donar oocitos.
 Se colecta toda la información posible de las donadoras, para ello se llena un formato el cual
contiene los siguientes datos. Por ejemplo: edad, estado reproductivo, número de trabajos
realizados por medio de la biotecnología, diagnostico de palpación y por último se evalúan los
ovarios para saber que clasificación pueden llegar a tener.
 También se tiene en cuenta el estado sanitario, nutricional y el factor ambiental en que se
encuentran estos animales ya que esto puede llegar a repercutir en la producción y calidad de
los oocitos.
De igual forma las vacas receptoras deben manejar un estándar de salubridad, el peso mínimo es
de 350 Kg., deben encontrarse en buen estado nutricional y vermifugadas. A nivel del tracto
reproductivo deben presentar un cuello uterino grado1, deben tener una estructura dominante en
ovarios ya sea cuerpo lúteo o folículo dominante, cada receptora se sincronizara para que coincida
con el dia que se haga la aspiración folicular de la vaca donante, teniendo en cuenta que son estas
quienes reciben el embrión y realizaran el proceso de gestación hasta feliz término.
Vaca donante

En la vaca raza jersey no se empleara ningún protocolo, se hará por detección de celo natural, se
debe tener en cuenta que esta ya haya ovulado hace 4 días para proceder a realizar la aspiración
folicular y esto se evidencia por ecografía transrectal. Es de tener en cuenta que en el dia 9 de la
receptora se implementara el procedimiento OPU.

Aspiración folicular transvaginal - OPU -

Es la técnica por medio de la cual se recolectan ovocitos de folículos en ovarios de hembras vivas,
utilizando la aspiración guiada por ecografía a través de la pared del fornix vaginal.

 En primer lugar, al iniciar el trabajo, las hembras a utilizar deben ser sedadas con xilazina y
además deben recibir anestesia epidural con lidocaína al 2% (3-5 ml/vaca), luego de esto se
debe proceder a limpiar y desinfectar la vulva y el periné.
 Una vez realizada la limpieza y desinfección del tren posterior, se procede a armar el portaguja
en la guía y se acopla el transductor al sistema. Una vez acoplado se protege con una funda
plástica que puede ser un guante desechable.
 Se introduce el transductor dentro de la vagina, hasta el fornix vaginal, ubicando la cabeza
del mismo en el lado del ovario a puncionar. Luego se introduce la mano izquierda por el recto
y se retrae el ovario, fijándolo contra la cabeza del transductor.
 Se ubica el ovario a aspirar, se impulsa la aguja suavemente para que penetre la pared vaginal
y la folicular. Una vez logrado esto la bomba de vacío aspira el contenido y lo deposita en el
filtro de embriones o en el recipiente destinado para tal fin. En cualquiera de los casos estos
deben contener medio de aspiración heparinizado (PBS+10% de suero fetal bovino).
 Luego de completar la aspiración de los folículos, los ovocitos son depositados en
un recipiente y con posterioridad ser seleccionados para su consecuente maduración.
 Posterior a esto los ovocitos son procesados igual que para fertilización in vitro.

A nivel de laboratorio
El lavado de la aguja y el medio de recibimiento de los oocitos se efectúaefectúan con PBS al que
se le agregan 50 UI/ml de Heparina, 50 mg/ml de Gentamicina y 1% de Suero fetal Bovino.

El tubo de centrifuga que contiene el líquido folicular aspirado es llevado a un cuarto, cercano al
brete, donde se “improvisa” un laboratorio, en el cual se realiza el lavado y filtrado de los oocitos
con el mismo medio utilizado en el lavado de la aguja. El sedimento restante en el filtro es pasado
a cajas de Petri y se procede al conteo y selección de los oocitos aspirados por medio de la
utilización de microscopios y micropipetas. Los oocitos son clasificados de acuerdo a su
morfología (número de camadas de células de cúmulos y aspecto del citoplasma) en Grado I, II y
III (GI, GII y GIII), oocitos sin cúmulos (s/c), expandidos (exp), degenerados (deg), y atrésicos
(atr) según Lonergan et al (1992).

Después de ser clasificados los oocitos se lavan en solución de TMC 199 suplementada con 10%
de Suero Fetal Bovino. Se colocan en criotubos con la misma solución en baño maría, entre 30 –
34 o C. y son transportados al laboratorio donde se realiza la maduración, fecundación y cultivo
In Vitro.

Es importante emplear los medios de cultivo celular idóneos, son aquellos nutrientes necesarios
que permiten que se dé el proceso de la fertilización del ovocito, al igual que el crecimiento del
embrión y la capacidad para ser trasferido.

Estos medios varían desde los muy simples a los muy complejos, contienen sustancias como:

 Iones inorgánicos: cuyas funciones son catalíticas y fisiológicas.

 Fuentes de energía: como el lactato, piruvato y glucosa.
 Aminoácidos: que intervienen en la síntesis proteica. Sirven como fuente de energía, como
tampones intracelulares del pH y reguladores del desarrollo embrionario.
 Vitaminas: que juegan un papel importante en el metabolismo de los hidratos de carbono y los
aminoácidos, como coenzimas.
 Elementos orgánicos: como fuente adicional de proteínas. Entre estos tenemos el Suero
Bovino (SB) y la Albumina Sérica Bovina (BAS).

 Fecundación In Vitro, FIV.

Para efectuar la fecundación In Vitro se utilizan muestras de semen congelado del toro programado
con la donadora. El semen se prepara mediante la técnica de gradiente de Percoll para remover el
plasma seminal, el diluyente y obtener espermatozoides móviles. La concentración se ajusta a
2x106 sptz/ml. El medio que se utiliza es el Tyrode modificado añadido a soluciones de
Penicilamida, Hipotaurina y Epinefrina e 10 µg/ml de heparina. Los gametos (oocitos y
espermatozoides) permanecen incubados en microgotas recubierta por aceite mineral entre 18 a 20
horas a 38.5o C en atmósfera controlado de 5% de CO2.

Se adicionan 30 µg/ml de medio de cultivo fresco 48 horas después de la “inseminación”

(alimentación).

 Cultivo In Vitro, CIV.

Después de incubados los gametos, son transferidos a microgotas de medio de cultivo CR2
modificado suplementado con 10% de SBF y permanecen en están por un lapso de 6 a 8 días hasta
que los zigotos alcanzan al estado de mórula y blastocisto.

 Transferencia de los Embriones, TE.

En esta fase se transfieren los embriones a receptoras previamente sincronizadas que se encuentren
en el día siete después de la ovulación. Las receptoras aptas son inmovilizadas en el brete, se les
aplica anestesia epidural baja con 5ml de clorhidrato de lidocaína al 2%, se les realiza una asepsia
perineal y se procede a la transferencia transcervical ubicando el embrión en el cuerno
correspondiente al que contiene el cuerpo lúteo.

Ventajas de la FIV:

 Hace posible mantener la primera generación, facilita el manejo de corssbreeding cuando

se trabaja con más de dos razas (Reyes 1995).
 Permite producir in vitro embriones de sexo conocido utilizando semen sexado haciendo
posible una racionalización de la explotación de hatos (Reyes 1995).
 Producir embriones de vacas donantes de alto valor, con problemas reproductivos
(adherencias en los ovarios y el oviducto, obstrucción de oviductos, baja respuesta
superovulatoria, desarrollo de quistes ováricos, infecciones genitales) (Díez et al. 2010).
 Producción de mayor número de embriones.
  Producción de embriones de vacas gestantes.
 Utilización de becerras/mautas pre púberes.
 Utilización de vacas que no responden a TE.

Desventajas o inconvenientes de FIV

 A pesar de los esfuerzos realizados para mejorar la eficiencia de la FIV, esta tiene aún un bajo
rendimiento ya que el porcentaje de ovocitos capaces de transformarse en embriones
transferibles está entre el 30 – 40%.
 Los embriones producidos in vitro son de menor calidad que los obtenidos in vivo, existiendo
entre ellos numerosas diferencias.
 Existe una mayor divergencia en el desarrollo de los embriones obtenidos in vitro respecto de
los obtenidos in vivo, ya que los segundos dependen del momento de la ovulación y la
fecundación, sin embargo, en el modelo in vitro el momento de la fecundación es más preciso
y por lo tanto tiene una mayor sincronización.
 Los embriones in vitro tienen menor resistencia a la criopreservación, siendo uno de sus
principales problemas, ya que la supervivencia después del congelamiento es menor que el de
los embriones producidos in vivo, lo cual dificulta su conservación a largo plazo.
 Nacimiento de terneros voluminosos, conocido como exceso de volumen fetal. Más del 30%
de los terneros nacidos por FIV presentan un peso superior a los 50 Kgs, independientemente
de su raza. Lo cual aumenta el porcentaje de distocias por este concepto.

Vaca donante

Di Hora Producto (base Dosis Vía de Nombre Valor por Observaciones Formatted Table
a genérica) aplicación comercial animal

9 8:00 Xilazina 2.5 cm Epidural Rompun 33.000 Frasco de 10 ml.

Frasco de 50 ml.

Clorhidrato de 20-40 Epidural Lidocaína 10.900 La aspiración

lidocaína ml folicular se realiza
 en el dia 9 de las
vacas receptoras.

Protocolo receptora

Dia Hora Producto Dosis Vía de Nombre Valor Observaciones Formatted Table
(base aplicación comercial por
genérica) animal

0 8:00 Progesterona Un Intravaginal CIDR 62.000 Cada paquete

activa 10% dispositivo/ trae 10
vaca. dispositivos
por lo cual se
comprara 1
paquete para
la vaca
donante y las 6
receptoras.

Se compra 1
frasco de 50 ml
0.8 ml
Benzoato de para que
Intramuscular. Metrigen 2600
estradiol. alcance para la
Fuerte.
segunda dosis.

Formatted: Indent: Left: 0.2", First line: 0.2"

 8 8:00 Lutalyse 5 ml Intramuscular Dinoprost 11000 Se retira el
trometamina dispositivo y se
procede a
aplicar el
Lutalyse frasco
de 30 ml.

9 8:00 Benzoato de 0.4 ml Intramuscular Metrigen ---------

estradiol Fuerte

10 14:00 Se
presentara el
.
celo, cuando
este pase, se
contara siete
días para
realizar la
transferencia
de embriones

17 Provenientes
del laboratorio
Se realiza la donde se
trasferencia realizó la FIV
de embriones

300.000

Mano de obra

Materiales utilizados con las receptoras

 NOMBRE DE MATERIALES COSTO ($)
Agujas 2000
Jeringa desechable 1000
Desinfectante 10.000
Balde ----------
Toallas absorbentes 5.000
Guantes o mangas 8000
Costo de los materiales requeridos para realizar la tecnica OPU

 Ecógrafo Veterinario Portátil V9………..$4.900.000

 Transductor lineal……………………….$180.000
 Guía de aspiración folicular…………….$4.477.000
 Aguja hipodérmica calibre 18…………..$22.500
 Bomba de vació…………………………$4.840.000
 Filtro para lavado embriones……………$47.5000
 Mano de obra……………………………$500.000
 Total…………………………………….$14.967.000

Análisis económico

 Receptoras: $1.053.000.
 Donante: $43.900.
 Materiales requeridos para realizar la técnica OPU: $14.467.000.
 Laboratorio: 4000 por pajilla.
Total: $15.563.900.
De acuerdo a los requerimiento de esta técnica es necesario realizar una inversión de
$15.563.900,sin embargo es una inversión inicial ya que para el siguiente procedimiento será
necesario realizar la inversión del protocolo de sincronización e inseminación lo cual equivale a
$ 1053.000 y posterior a esto se realizara el aprovechamiento de los equipos por alrededor de los
5 años, tiempo justo donde se recuperara la inversión y se obtendrá una rentabilidad importante ya
que se contara con la oportunidad de aspirar a una hembra con alto valor genético dos veces por
semana durante 6 meses esto permite aproximadamente realizar 384 fertilizaciones
aproximadamente es decir en 6 meses puedo preñar 384 animales sean propias o venta. Si se desea
vender solo los embriones se recuperaría la inversión en dos meses y en seis meses obtiene 2 veces
la inversión realizada. Y si por lo contrario se opta por preñar animales y realizar la crio
preservación la recuperación de la inversión será a largo plazo pero la rentabilidad será mayor
teniendo en cuenta que se lograran animales de alto valor genético.
 CONCLUSIONES

En esta actividad fue posible cada una de las actividades propuestas por la guía del curso, se ha
logrado adquirir nuevos conocimientos, relacionadas a las técnicas biotecnológicas como es el
caso de la técnica de fertilización in vitro, logrando así obtener los datos de gran importancia
cuanto requeridos en cuanto a protocolos de sincronización, materiales y sus respectivos costos
económicos, información importantetrascendental que debe conocer el productor, por otra parte
como zootecnista se esta estoy en la obligación de darle a conocer los beneficios y limitaciones,
que conlleva implementar esta técnica en su hato lechero.

Así las cosas con plena certeza se sugiere le sugiero al productor que empleear dicho método en
su explotación ganadera, la inversión es algo costosa, pero aun mediano plazo recuperara la
inversión y su producción será más rentable y sostenible y como valor agregado se la
biotecnolgias permite abrir puertas en el mercado nacional y extrajero..
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