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Thème
Juin 2011
1
Dédicace
Je dédie ce mémoire à mes parents , mes sœurs ( SOULEF , FETHIA, FARIDA ) et mes
frères ( YOUNES ,SALAH , KARIM , TAREK , KHALED , BADRE-EDDINE)
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Dédicace
Dédié ce Mémoire :
Mon cher mari, qui assiste pour m'aider toujours à ma mère et mes frères : Asma, Samah,
Haroun, Ibrahim et Abd elouhd
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Remerciements
Remercier tous ceux qu’ont contribués à la réalisation de la présente note en remerciant le pur
du Mr : Mohamad Bala et Mr : Goubi Djamel et L'école Para Médicale .La nourriture décente
ici et tous Les parents de tous les personnels hospitaliers Djamaa et des membres du
Laboratoire
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Table de matière
- dédicace.
- remercîments.
- choix du thème.
- problématique.
- hypothèse.
- introduction.
Chapitre I :
- partie théorique.
- historique………………………………………………………….05
- description général………………………………………………..06
- les prélèvements…………………………………………………..07
- matériel utilisé……………………………………………………08
- les paramètres…………………….………………………………09
- définition de glycémie………………………………………..….09
- dosage de la glycémie……………………………………………10
5
- méthode de dosage…………………………………………….…10
- méthode enzymatique……………………………………….……11
- l’intérêt clinique……………………………………………..…...11
- variation physiologique…………………………………….….…11
- variation pathologique…………………………………….….….12
- hyperglycémie………………………………………………..….12
- hypoglycémie……………………………………………..……..12
- définition de l’urée………………………………………….…...13
- dosage de l’urée………………………………………….…..…..13
- méthode a l’hypobromite………………………………………..13
- méthode enzymatique……………………………………….…..14
- les valeurs normales…………………………………………….14
- l’intérêt clinique………………………………………..……….14
- variation physiologique…………………………………….…..14
- variation pathologique……………………………………....….14
- définition de calcémie……………………………………….…16
- dosage de la calcémie……………………………………….…16
6
- méthode physique par absorption atomique…………………...16
- méthode de tronchet…………………………………………...16
- méthode colorimétrique…………………………………….….17
- l’intérêt clinique…………………………………………….....17
- variation physiologique…………………………………….…17
- variation pathologique………………………………….……..17
- hypocalcémie…………………………………………….……17
- hypercalcémie…………………………………………………18
Chapitre II :
- partie pratique.
- personnels exerçants………………………………………....20
- méthode utilisé……………………………………………..…21
- principe…………………………………………………….…21
- réactifs………………………………………………………..21
- préparation et stabilité………………………………………..21
- échantillons………………………………………………..…21
- mode opératoire……………………………………………...21
- linéarité…………………………………………………...….22
7
- méthode Berthelot modifiée de l’urée Colore………………….23
- principe………………………………………………………23
- réactifs………………………………………………………..23
- préparation et stabilité…….....................................................23
- échantillons…………………………………………………..24
- mode opératoire………………………………………….….24
- linéarité………………………………………………………….24
- principe……………………………………………………….…25
- préparation du réactif……………………………………….…..25
- détérioration du réactif……………………………………….....25
- instruments……………………………………………………...25
- préparation de la verrerie……………………………………......25
- substances interférentes……………………………………..…..26
- procédure……………………………………………………..…26
- étalonnage…………………………………………………….....27
- contrôle de qualité……………………………………………….27
- limitations……………………………………………………......27
- résultat……………………………………………………..….…28
- décessions………………………………………………….....…32
8
- conclusion…………………………………………………….…33
- référence bibliographique.
- table de matière.
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Choix du thème
L’analyse biochimique jouent un rôle élémentaire dans les diagnostiques des malade, pour
cette raison l'exactitude de résultats est en fonction de personnel qualifié.
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Problématique
Est-ce que le nettoyage de cuves et tubes de dosage biochimique ont une influence directe
sur la fiabilité des examens biochimiques ?
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Hypothèse
D après les normes d’analyses biochimique connues, les cuves et tubes de dosage
biochimique doivent être bien propre et ne portant pas de traces soit des réactifs soit de
produits pathologiques (sérums)
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Introduction
Les examens biochimique sont très importantes dans le monde médicale, le bute de notre
travail est améliorer des les conditions d’utilisation des examens ou investigations
biochimiques par les praticiens. Il ne sert à rien de pratiquer des analyses si les principes
de l’exécution et l’utilisation du matériel ne sont pas respectés .Ces connaissances
permettent une fiabilité dans l’interprétation des résultats
Chaque examen, chaque épreuve retenus dans ce récit fond l’objet d’une étude
systématique en commençant par la préparation du malade au prélèvement, préparation du
matériel, le choix de la méthode le respect du temps d’incubation, et de la T° exigée.
En respectant tout ces conditions, les laboratoires soufrent de certaines interférences qui
sont liées à la verrerie mal nettoyée. Ce dernier paragraphe revêt, a nos yeux ; une
importance capitale, car sa connaissance devrait entrainer une régulation de la
consommation d’actes de laboratoire, en même temps que l’amélioration de leur
efficacité et fiabilité des résultats.
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1- Historiques de biochimie :
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2- Rappel sur le sang
- Description générale:
Le sang est un textures liquide visqueux d'une forme de couleur rouge dans le tissu
conjonctif remplit le cœur et qui se passe à l'intérieur du corps par les vaisseaux sanguins
(veines et artères et capillaires), et le volume de sang dans le corps 5-6 litres chez un adulte
avec un 8,7 pour % Du poids corporel et la quantité de sang dans le système circulatoire
(cœur et vaisseaux sanguins) des deux tiers de la quantité dans le corps entier tandis que le
tiers restant est stocké dans le foie, la rate et d'autres parties du corps
Le tube échantillon de sérum de contenir une des anti-coagulations ... Tube tandis que
l'échantillon est le plasma contient une substance telle que la preuve de la coagulation
(héparine sodique, le fluorure de sodium, EDTA) et d'autres ne doit donc pas être inversée ou
bien jusqu'à ce que mélangé avec l'inhibiteur de la coagulation du sang.
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3- Les prélèvements :
Le sang est prélevé sur fluorure de sodium afin d’inhiber la glycolyse, et maintenu à 4c si
l’analyse n’est réalisée immédiatement .En absence de fluorure, le glycose plasmatique
diminue d’environ 5% par heure dans du sang anti coagulé à température ambiante.
La mesure de glycémie peut se faire à jeun ou à n’importe quel moment (glycémie aléatoire).
Le dosage est effectué sur sérum, plasma et urines de 24h ; il faut noter que la contamination
par les bactéries possédant une uréase aura pour effet une décroissance (qui peut être
importante). Du taux d’urée des urines de 24h.
L’analyse est réalisée sur sérum de patient à jeun et sur urines de 24h. Nombreuses
substances (notamment en d’imprégnation ostrogénique) perturbent le test.
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4- Matériel utilise
seringue
Cotton
Garrot
Alcool
Tubes héparine ou sec
Tubes en verres
Les réactifs
Portoir
L’haricot
Pipette de 1000µl
Pipette de 10µl
Cuve à1cm
Centrifegeuse
Minuterie
L’étuve
spectrophotomètre
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I. Les paramètres :
1) La glycémie :
La pénétration intracellulaire du glucose sanguin résulte d’un processus actif initié et accéléré
par l’insuline.
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2) Dosage de glycémie :
Réactif :
Le sang est déféqué par nitrate mercurique puis traité par une solution d’odo-mércureate en
milieu alcalin.
Prélèvement :
- Mode d’opératoire :
Défection.
Réduction d’odo-mercurique.
Dosage du mercure.
Réactifs :
- Réactif n°1 : solution étalon de glucose à 2g /l.
- Réactif n°2 : solution de l’ortho-toluidine :
• Ortho-toluidine….60ml.
• Thio-urée………..1.5g.
• acide –acétique…..940ml.
- Prélèvement :
- Mode d’opératoire :
Bien agiter, plonger tous les tubes pendant 8minutes dans bain-marie bouillant .Refroidir dans
un bain d’eau froide. Après 10 minutes ; lire à630nm les tubes dosage et étalon contre le blanc
réactif, la coloration reste stable pendant au moins 30mn.
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2.1.3 Méthode enzymatique:
Réactif :
Glucose-oxydase.
- Prélèvement :
- Mode d’opératoire :
Réactif +sérum ; mélanger et incuber 10mn à37°C ou 30mn à20-25 °C et lire à505nm.
3) La valeur normale :
4) Intérêt clinique :
1- Chez le sujet à jeun depuis plus 10 h et ayant reçu dans les jours précédant une
alimentation équilibrée en glucides (250 à300g /jour). Les méthodes chimiques donnaient des
résultats nettement plus élevés entre 5 et 7.2 m mol.
Aujour d’hui, on ne parlera d’hypoglycémie que pour une valeur répété à plusieurs examens
inférieur à2.75mmol mais on évoquera l’hyperglycémie diabétique désque la valeur de base
dépasse habituellement 6mmol.
2-Dans l’heure qui suit un repas normal, il existe chez le sujet sain une (flèche
d’hyperglycémie) qui en principe, ne doit pas dépasser 6.5mmol. Entre 6.5 à7.25mmol, on ne
peut affirmer un diabète, mais il est prudent de pratiquer une épreuve d’hyperglycémie
provoqué, le retour à la norme est souvent suivi d’une légère hypoglycémie transitoire.
3-Chez le nouveau né, il existe une hypoglycémie physiologique très nette, entre 1.75 et2.25
m mol entre la 3et 8h, qui doit remontrer et se stabiliser autour de 2.75mmol dés la 48 h le
nourrisson conserve normalement pendent un an une glycémie à jeun assez instable, voisine
de 2.75 m mol.
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4.2 La variation pathologique :
4.2.1 Hyperglycémie :
Les critères diagnostiques du diabète les plus récents (OMS 1999) sont :
En absence de symptômes évident, le diagnostic de diabète ne peut jamais être établir sur la
base d’une valeur anormale de glycémie=au moins une deuxième valeur normale et requise
(à jeun, aléatoire ou lors d’une épreuve) on parle d’intolérance au glucose lorsque :
4.2.2 Hypoglycémie :
La plupart des épisodes d’hypoglycémie surviennent chez les patients diabétiques, en cas :
Hypoglycémie à jeun :
• insulinome (tumeur des cellules B des ilots de Langerhans).
• atteinte hépatique grave.
• trouble de stockage du glycogène.
• insuffisance surrénalienne.
Hypoglycémie réactive :
• injections d’insuline.
• après un repas en cas de gastrectomie.
• abus d’alcool.
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L’urée :
L’urée est formée dans le foie, la synthèse résulte de processus métaboliques se déroulant
dans le l’oruithine(ou cycle de Crèbs-Henseleit) et constitue la voie métabolique principale
d’excrétion du surplus d’azote corporal, l’urée filtrée par les glomérules, est partiellement
réabsorbée par les tubules.
5) Dosage de l’urée :
Réactifs :
• l’hypobromite de sodium.
• acide trichloracétique.
• solution de soude.
• -solution alcoolique de phénolphtaléine.
Prélèvement :
Mode d’opératoire :
Cette techniques, applicable aussi bien au depuis longtemps, mais c’est qui à donné le nom
d’azotémie au taux d’urée dans le sang.
Réactif :
• Diacétyl_monoxine.
Prélèvement :
• Sérum ou plasma sur tube sec ou l’héparine.
Mode d’opératoire :
• Diacétyl-monoxine en milieu acide à chaud donne en présence d’urée une coloration
jaune utilise pour le dosage colorimétrique.
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Cette méthode est souvent utilisée après dèproténisation, mais elle peut aussi être utilisée
directement.
Réactif :
• L’uréase.
Prélèvement :
Mode d’opératoire :
Sérum+réactif, bien mélangé, laissé 30mn à la T° du laboratoire lire les tubes à 650 nm.
6) Valeur normale :
Femme : 19_43mg/dl.
7) Intérêt clinique:
Une chute du taux d’urée sanguine de 2mmol chez l’adulte avec des taux de l’urée urinaire
s’observe au stade terminal des grandes insuffisances hépatiques, témoignant d’une
déchéance profonde et irréversible de la fonction uréogénique du foie ,en moment temps
l’installent l’hyperammoniémie,encephalopathie et le coma hépatique .Beaucoup plus
fréquent est le « syndrome de rétention azotée » qui associe une urémie élevée a des taux
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d’urée urinaire variables ,dans le cadre très général des « insuffisances rénales aigues ou
chronique ».L’urée sanguine reste un paramètre de dépistage grossier des maladies rénales.
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8) Définition de calcium :
L’ion calcium ca++ est le plus abondant de l’organisme son métabolisme, étroitement lié à
celui des phosphates, est complexe : il participe à la régulation de perméabilité des
biomembranes, à l’activation ou l’inhibition de nombreux enzymes, à l’action de plusieurs
hormones, à l’excitabilité neuromusculaire, à la coagulation sanguine. Du point de vue
quantitatif, la principale fonction du calcium consiste à réaliser la minéralisation du tissu
osseux, essentiellement sous forme de phosphate tricalcique isomorphe aux apatites.
En biochimie clinique : la calcémie totale plasmatique ou sérique doit figurer sur la liste des
paramètres urgents dans tout laboratoire d’analyses. Elle complète la colonne cationique de
l’ionogramme plasmatique ; d’autre part, en pédiatrie elle peut résoudre dans l’immédiat le
problème posé par la survenue de convulsion chez le nourrisson et le jeune enfant.
9) Dosage de calcémie :
Réactifs :
1) Solution d’E.D.T.A
2) Solution alcaline de KCN
3) Indicateur de Patton et Reader
4) Solution étalon de calcium à 100mg/l
Prélèvement :
Mode d’opératoire :
Dans un erlenmeyer de 25ml, introduire le sérum non hémolyse (2ml) avec eau distillé +
solution alcaline de KCN+ indicateur de Patton-Reeder .
-Le mélange est rose, titrer avec la solution d’EDTA jusqu’au virage bleu-vert. Soit n ml
- Acide chlorhydrique
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Prélèvement :
-Sérum ou plasma
Mode d’opératoire :
Réactif :
Cresolphtaline
Prélèvement :
Mode d’opératoire :
Il y’a une hypocalcémie physiologique vers 2 m mol qui doit céder en quelques jours. Penser
au rachitisme, avec phosphatémie abaissé, phosphatase alcaline élevée, devant une
hypocalcémie transitoire du nourrisson.
- A part les hypo protéinémies, puisque la moitié du calcium plasmatique est liée aux
protéines (état de dénutrition, cirrhose confirmé, néphrose lipoïdique, stéatorrhee massive.
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-Chez l’adulte et l’adolescent trois causes principales l’hypocalcémie :
a) l’hypoparathyroïde souvent iatrogène après chirurgie thyroïdienne calcémie < 1,75 m mol
12.2.2 Hypercalcémie
*l’adénome hyperparathyroïdien
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I - Description du terrain d'application :
Le laboratoire externe de cette polyclinique est étroit. La direction prévoit son extension a fin
qu'il répond à L'inspiration de la population de Djamaa.
* Hématologie
* Biochimie
* Parasitologie
* Sérologie
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II - Personnel exerçant :
Il disposé d'un personnel spécialisé :
_ 01. Breveté
_ 03 biologistes.
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III - Méthode utilisés
1. Méthode enzymatique (GOD – PAP) de glucose ( biomagrèb ):
A. Principe
Détermination enzymatique du glucose sel ou les réactions Suivantes :
B. Réactifs :
C. Préparation et stabilité :
-1 mois à 20- 25 C0
- 2 mois à 2- 8 C0
D. Echantillons
E. Mode opératoire :
Température : 37 C0 (20-25 C0 )
Cuve : 1 cm d'épaisseur
30
Ajuster le zéro du spectrophotomètre sur le blanc réactif
Ou 30 min à 20 – 25 C0
F. Linéarité :
Recommence le dosage sur l'échantillon dilué au 1/2 avec une solution de NaCl à 9g/L
Multiplier le résultat par 2
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2 -Méthode Berthelot modifié d’Urée colore (biomagrèb) :
A. Principe
Uréase
B. Réactifs
Réactif 1: Tampon
Uréase 30000u/l
8.325m mol/l
Préparation et stabilité :
Les réactifs de travail sont stables : 6 mois à 2 –8°c ,14 jours à 20 – 25°c
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C. Echantillons:
D. Mode opératoire:
Température : ………………………… 25 – 30 - 37 ◦c
Réactif 4 1 ml 1 ml 1 ml
Mélanger, incuber 5 min, à 37◦c ou 10 min. à 20-25 ◦c lire contre le blanc.
Stabilité de la coloration 2 heures à l'abri de la lumière
E. Linéarité:
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3) Méthode Arsenazo III – colorimétrique de calcium (spinréact) :
A. Principe :
B. préparation du réactif :
Le réactif inclus demeure stable jusqu'à la date d'expiration indiquée sur l’étiquette à 18-26°C.
D. Détérioration du réactif :
E. Instruments :
Tout instrument muni d'un contrôle de température de ± 0.5 °C et pouvant fournir une lecture
d'absorption précise à 0.001 unité à650 nm peut être utilisé. La largeur de la bande ne doit
pas dépasser 10 nm et la lumière parasite ne doit pas excéder 0.5 %. La Longueur d'onde doit
être précise à 2 nm près.
G. Préparation de la verrerie :
Toute verrerie utilisée pour le dosage du calcium devrait être décontaminée en la laissant
tremper jusqu'au matin dans du HCl 1 N, ou pendant 6 heures dans du HCl 6 N. La verrerie
devrait être bien rincée avec de l'eau dé ionisée avant l'usage.
Les seringues des distributeurs devraient aussi être rincées dans du HCl 6 N, puis avec de
l'eau dé ionisée avant de servir au dosage du calcium.
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H. Substances interférentes :
On peut trouver un résumé de l'influence des drogues sur les dosages en laboratoire chez
Young, D.S. (2).
I. Procédure :
-Matériaux fournis :
-Matériaux requis :
5. Eau dé ionisée.
J. Paramètre :
Température . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18-26°C
Chemin optique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm
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K. Méthodologie :
M. Étalonnage :
Un standard de calcium équivalent à 2.5 m mol/L (10 mg/dl) de calcium est fourni avec 140-
20 et 140-S7 et doit être utilisé tel
Qu’indiqué pour calibrer la procédure. Le numéro de catalogue 140-24, 140-15 n'incluent pas
de standard. Cependant, on doit en utiliser un d'après les instructions, pour calibrer la
procédure.
N. Contrôle de qualité :
On devrait analyser un sérum contrôle à niveau normal et un autre à niveau anormal pour
chaque série d'échantillons.
Les résultats de ces contrôles devraient donner en deçà de deux déviations standard de la
valeur déjà établie.
O. Limitations :
Un échantillon avec un niveau calcium dépassant la limite de linéarité doit être dilué avec un
salin de 0.9 % et dosé de nouveau en tenant compte du facteur de dilution dans les calculs.
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** Pour mon étude j ai utilise comme outils de travail.
Tableau I :
N° de malade Résultat de gly avec cuve non propre Résultat de gly avec cuve propre
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Les résultats de L'urée
Tableau II :
N° de malade Résultat de l’urée avec cuve non Résultat de l’urèe avec cuve propre
propre
1 0.19 g/l N 0.24 g/l N
2 0.14 g/l - 0.20 g/l N
3 0.10 g/l - 0.06 g/l -
4 0.13 g/l - 0.18 g/l N
5 0.10 g/l - 0.09 g/l -
6 0.10 g/l - 0.09 g/l -
7 0.10 g/l - 0.13 g/l -
8 0.10 g/l - 0.10 g/l -
9 0.11 g/l - 0.14 g/l -
10 0.21 g/l N 0.30 g/l N
11 0.20 g/l N 0.23 g/l N
12 0.11 g/l - 0.10 g/l -
13 018 g/l N 0.26 g/l N
14 0.10 g/l - 0.10 g/l -
15 0.31 g/l N 0.33 g/l N
16 0.14 g/l - 0.14 g/l -
17 0.25 g/l N 0.26 g/l N
18 0.19 g/l N 0.18 g/l N
19 0.15 g/l N 0.18 g/l N
20 0.22 g/l N 0.31 g/l N
21 0.12 g/l - 0.12 g/l -
22 0.11 g/l - 0.23 g/l N
23 0.19 g/l N 0.29 g/l N
24 014 g/l - 0.27 g/l N
25 0.21 g/l N 0.23 g/l N
26 0.15 g/l N 0.29 g/l N
27 0.20 g/l N 0.29 g/l N
28 0.13 g/l - 0.22 g/l N
29 0.12 g/l - 0.22 g /l N
30 0.12 g/l - 0.12 g/l -
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Les résultats de Calcémie
Tableau III :
N° de malade Résultat de calcémie avec cuve non Résultat de calcémie avec cuve
propre propre
1 65 mg/l - 115 mg/l +
2 64 mg/l - 95 mg/l N
3 76 mg/l - 99 mg/l N
4 72 mg/l - 119 mg/l +
5 79 mg/l - 97 mg/l N
6 97 mg/l N 86 mg/l -
7 83 mg/l - 114 mg/l +
8 116 mg/l + 108 mg/l +
9 56 mg/l - 99 mg/l N
10 83 mg/l - 87 mg/l -
11 116 mg/l + 97 mg/l N
12 111 mg/l + 73 mg/l -
13 93 mg/l N 113 mg/l +
14 103 mg/l N 76 mg/l -
15 158 mg/l + 70 mg/l -
16 91 mg/l N 89 mg/l -
17 86 mg/l - 94 mg/l N
18 78 mg/l - 72 mg/l -
19 76 mg/l - 100 mg/l N
20 99 mg/l N 85 mg/l -
21 180 mg/l + 84 mg/l -
22 88 mg/l - 110 mg/l +
23 77 mg/l - 98 mg/l N
24 41 mg/l - 94 mg/l N
25 59 mg/l - 104 mg/l N
26 27 mg/l - 103 mg/l N
27 73 mg/l - 100 mg/l N
28 24 mg/l - 162 mg/l +
29 16 mg/l - 96 mg/l N
30 22 mg/l - 96 mg/l N
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Tableau 1 :
Les résultats de tableau résultent une petite variation de glycémie entre ceux réalisées dans un
cuve propre et ceux réalisée dans une cuve in propre
Tableau II :
Tableau III :
Pour le calcémie on remarque une grande incidence des impuretés sur les résultat car ce
dernier set très sensible.
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Discussions
D'après les résultats obtenus, notre hypothèse est justifiée et le travail confirme qu'un bon
nettoyage du matériel mène vers des résultats proches aux normes.
41
Conclusion
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Références bibliographiques :
- www. RXLIST.com
-www.goole.dz
-www.mediadeco.com
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