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Tema 1: métodos y estrategias de investigación

Uno de los métodos de investigación para estudiar las funciones cerebrales requiere destruir una parte del
encéfalo y evaluar la conducta subsecuente del animal, esto se denomina ablación experimental, es el
método más antiguo usado en neurociencia.

Producción de lesiones cerebrales:


1. Método estereotáxico: Cuando se quiere destruir esta en regiones subcorticales por lo general se
pasa una corriente eléctrica por un electrodo de acero inoxidable. Para realizarlo se necesita un atlas
estereotáxico y localizar el bregma (punto de referencia en cirugía estereotáxico)
2. Ácido cainico: es un método más selectivo de producir lesiones cerebrales al emplear un aa
excitatorio que destruye las neuronas estimulándolas hasta que mueren (lesiones excitotoxicas)
3. 6-hidroxidopamina: provoca lesionas todavía más específicos, se inyecta para eliminar poblaciones
específicas de neuronas DA y Na
4. Falsas lesiones
5. Muscimol (reversible): impide temporalmente la actividad de una región del cerebro, es un
anestésico local que bloquea los potenciales de acción en de los axones que entran o salen de la
región y producen una lesión temporal. Este estimula los receptores de GABA
6. Enfriando el tejido (reversible): el instrumento que lo produce se llama criodo

Marcado de axones neuronales:

- Método de marcado anterógrado: marcado de axones eferentes (se usa con la proteína PHA-L)
- Método de marcado retrogrado: marcado de axones aferentes (se usa con la sustancia oro
fluorado): para descubrir cuáles son las regiones del encéfalo que están involucradas en los
componentes de la corriente superior de los circuitos neurales.

Estudio del cerebro humano en vivo


El primer método que se ideo fue el TAC (tomografía axial computarizada): instrumento que emplea un
ordenador para analizar los datos obtenidos por un haz de rayos-x, el cual efectúa un barrido para
presentar una radiografía bidimensional.

Una radiografía más detallada es la RM (resonancia magnética) se parece al TAC pero no usa rayos X, sino
que hace pasar un campo magnético extremadamente intenso a través de la cabeza del paciente. Se ajusta
para detectar la radiación de los átomos de hidrogeno. Puede elaborar imágenes de secciones del encéfalo,
qua diferencia del TAC que solo están en plano horizontal.

REGISTRO Y ESTIMULACION DE LA ACTIVIDAD NEURAL

Registro de la actividad neural


- Registro con microelectrodos: registran la actividad eléctrica de neuronas individuales, registra
potenciales de acción del axón. Los electrodos se implantan por cirugía estereotáxico. Las
señales que registran son bastante débiles y tienen que ampliarse
- Registro con macroelectrodos: registran una región global del encéfalo, representan los
potenciales postsinápticos de muchas células del área. Frecuentemente se registra con
electrodos pegados al cuero cabelludo y se observa el registro por un polígrafo. Estos registros
se llaman EEG. Puede usarse para el diagnóstico de la epilepsia, observar las fases del sueño y
vigilia, para supervisar el estado del encéfalo durante intervenciones.
- Magnetoencefalografía: detecta la actividad de neuronas que descargan sincronizadamente,
gracias al campo magnético inducido por actividad eléctrica de estas. Se realiza mediante
neuromagnetometros que contienen una matriz de varios SQUID. Estos aparatos pueden servir
para localizar el foco de las crisis epilépticas y así poder extirparlas quirúrgicamente

Registro de la actividad metabólica y sináptica del cerebro


- Autorradiografía con 2-DG radioactiva: se inyecta 2DG en el torrente circulatorio del animal, esta
sustancia es similar a la glucosa y es transporta al interior de las celular (a diferencia de la
glucosa esta no puede ser metabolizada y queda dentro de la celula). Luego se localiza la
sustancia radioactiva en una sección de tejido. Las zonas más activas del encéfalo contienen el
mayor grado de radioactividad, esta se manifiesta en la emulsión revelada como puntos oscuros.
- otro método para identificar regiones activas del encéfalo es sacando provecho de que cuando
las neuronas son estimuladas, determinados genes del nucleo (genes de expresión temprana),
son activados y se producen proteínas específicas. Estas proteínas se unen entonces a los
cromosomas del nucleo. La presencia de estas proteínas nucleares indica que las neuronas
acaban de ser activadas. Ej. La proteínas Fos
- Tomografía por emisión de positrones (TEP): mide la actividad metabólica cerebral de regiones
específicas, inyecta 2-DG radioactiva, cuando estas se descomponen emiten partículas
subatómicas llamadas positrones que son detectadas por el equipo del TEP. El quipo muestra
cuales son las regiones del encéfalo que ha absorbido tal sustancia radioactiva.
Inconveniente: su coste de funcionamiento, las sustancias que se activan tienen una vida media
muy corta, a ello hay que añadirle ciclotrón (acelerador de partículas atómicas hacia el lugar
donde se utilizan), y hay que añadir los salarios del personal.
- Resonancia magnética funcional (RMf): permite medir el metabolismo regional, detectando los
niveles de oxígeno en los vasos sanguíneos del encéfalo. Su imagen tiene mejor resolución que
las del TEP y se obtiene mucho más rápidamente.

Medidas de secreciones cerebrales


- Microdialisis: analiza alas sustancia existentes en el líquido intersticial (espacio entre las células)
por medio de un pequeño fragmente de tubo, hecho de una membrana semipermeables que se
implanta en el encéfalo. Para usar este tubo se usa la cirugía esterotaxica. Se bombea una
pequeña cantidad de una solución similar al líquido extracelular hacia el tubo, donde se recoge
para analizarlo. El TEP también puede usarse para medir cualquier sustancia radioactiva que
emita positrones.

Estimulación de la actividad neuronal


- Estimulación química: inyectando un aa excitatorio, esta es más compleja que la eléctrica (se
requieren tubos, cánulas…) pero tiene una ventaja con respecto a la eléctrica (activa somas
celulares, pero no los axones. Puesto que los somas contiene receptores glutamanérgicas) así
pues los efectos de la estimulación química son más circunscritos que la eléctrica. Ej. el ácido
cainico, esta produce lesiones a dosis altas, pero a dosis bajas solo las estimula.
Para inyectar la sustancia se usa microinotoforesis, es un procedimiento que emplea electricidad
para expeler una sustancia de un micro pipeta con el fin de determinar los efectos de dicha
sustancia en la actividad eléctrica de la celula.
- Estimulación eléctrica: Estimulación magnética trasncraneal (EMT) usa campos magnéticos para
estimular neuronas induciendo corrientes eléctricas en el tejido mediante una bobina
electromagnética situada en una zona próxima al cráneo. Este también se ha usado como tto
para la depresión.

Métodos neuroquímicos, para la detección de neuronas que producen sustancia neuroquímica específica:
- Hidratación in situ: producción de ADN complementario de un ARN mensajero determinado a fin
de detectar la presencia del ARN
Métodos neuroquímicos, para la localización de receptores específicos: Doble marcado: estos métodos de
- Autorradiografía: manifiesta la distribución de un ligando localización de sustancia neuroquímicas
radioactivo, al cual se ha expuesto el tejido se pueden combinar con marcadores
- Inmunocitoquimica: como los receptores son proteínas se anterógrados y retrógrados.
pueden producir anticuerpos frente a ellos, y lego se observa las secciones al microscopio.

Rosenzweig:
Técnicas ideadas posteriormente de los rayos X:

- Angiograma: se inyecta un tinte radiopaco (bloqueador de rayos X) en el suministro de la sangre


al cerebro, lo que permite visualizar los vasos sanguíneos cerebrales. Es de gran ayuda para
diagnosticar enfermedades vasculares como las apoplejías

- TAC o Tc (Tomografía axial computarizada): se crea una imagen de cerebro con energía de rayos
X. los detectores del lado opuesto de la cabeza miden la cantidad de radiación absorbida, este
valor es proporcional a la densidad del tejido por el que pasan los rayos. Se repite el proceso,
para generar un mapa anatómico del cerebro.
Son imágenes de resolución mediana, útiles para visualizar problemas como hemorragias,
apoplejías, tumores o atrofia cortical.

- RM (Resonancia magnética): proporciona representaciones de mayor resolución que han


sustituido a las TC. su ventaja es que a los sujetos no se le expone a rayos X dañinos. Tiene tres
pasos:
1. Se coloca la cabe del paciente en un imán, que hace que todos los protones (núcleos de
átomos de hidrogeno) de los tejidos del cerebro se alineen en paralelo.
2. Los protones son bombardeados por un poderoso impulso de ondas d radio.
3. Este apaga los protones se relajan y vuelven a su configuración original metiendo sus propias
ondas de radio.
Gracias a su resolución las imágenes pueden revelar cambios en el cerebro, como la
desmielinizacion características en la esclerosis multiple

- TEP (tomografía por emisión de positrones): obtiene imágenes de la actividad de los cerebros
más que de su estructura. Se inyecta en el torrente sanguíneo sustancias radiactivas. Las más
habitual usa un forma radiactiva de glucosa, el combustible es absorbido y usado por regiones
cerebrales muy activas. Esto ha comprendido mejor el control neural de diversas actividades,
como el control del movimiento, el procesamiento visual, la conducta verbal, la atención
selectiva…
La TEP es útil para identificar regiones que son metabólicamente anómalas a pesar de conservar
la estructura intacta

- RMf (Resonancia magnética funcional): crean imágenes tridimensionales de alta resolución de


la actividad cerebral. Pone de manifiesto más resolución temporal y más resolución espacial.
Aunque la tecnológica es igual que la RM usan gradiente de campo magnético de oscilación
rápida y de gran intensidad para detectar cambios pequeños en el metabolismo cerebral,
sobretodo en el consumo de oxígeno.
Esta refleja inputs sinápticos y procesamiento local más que la producción de impulsos neurales.

- Imágenes ópticas: usan la luz para conseguir imágenes de la actividad cerebral, con una luz casi
infrarroja. Ciertos detectores captan los reflejos a a traves del cuero cabelludo, las RR evidencia
la actividad. Unos componentes de las RR ópticas reflejan las señales eléctricas de las neuronas
otras el flujo sanguíneo.

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