BASES MOLECULARES DE LA MTACION Y ENFERMEDADES GENETICAS

Desplazamiento marco de lectura ”frameshif”, tay sachs autosómico recesivo gen

afectado subunidad alfa de hexoaminidasa A, por inserción TATC
MUTACION: cambio o alteración en la secuncia de DNA salvaje o silvestre wild
transmitida por herencia en forma de DNA mutante, producidas por errores en
replicación, alteración espontanea de nucleótidos, acción agentes físicos o
químicos(mutagenos), nunca de recombinación meiotica entre cromosomas
homologos

CLASIFICACION DE MUTACIONES

Tipo de célula: germinal son heredables, minoritarias

Somática nunca son heredables, mayoritarias

Magnitud: Grandes mutaciones o anomalías cromosómicas duplicaciones, pérdida o

reagrupamientos

Mutaciones medianas en secuencias repetidas

Mutaciones puntuales o pequeñas Implican normalmente un solo

nucleótido y complementario
mutaciones mitocondriales, se transmiten por herencia materna exclusivamente

 CAMBIOS EN LA SECUENCIA DEL DNA

a. SUSTITUCION:
i. Cambio de una sola base o nucleótido:
- Transiciones: Pi. por Pi. o Pu. por Pu (4 posibilidades)
- Transversiones: Pi. por Pu. o Pu. por Pi (8 posibilidades
b. DELECION , PERDIDA O ELIMINACION
c. Consiste en la perdida de uno o más nucleótidos de una secuencia, es
muy común en el DNA no codificante, pero infrecuente en el DNA
codificante INSERCION
La aparición de uno o varios nucleótidos adicionales en una secuencia, es muy común en
el DNA no codificante, pero rara en el DNA codificante
MUTACIONES SILENCIOSAS (sinónimas, neutrales, sintomáticas, o con sentido, “sense
mutations”), constituyen del 23 al 25% de todas las mutaciones en DNA codificante. Se
caracterizan porque a pesar de haber un cambio en la secuencial del DNA, no se altera
la secuencia de su producto proteico.

a. MUTACIONES NO SILENCIOSAS
En este caso, la alteración en la secuencia de nucleótidos afecta a la secuencia
proteica

Mecanismo:

1. Mutaciones endógenas (espontáneas o fortuitas)

Incorporación de nucleótidos erróneos durante la replicación
tautomería de bases
deslizamiento DNA poli
Sustituciones por desaminación oxidativa
Perdida de bases por inestabilidad quimica del enlace N-glicosídico
Modificación de bases por mutágenos endógenos:
o Errores en la replicación
o Desaminación oxidativa de bases
o Inestabilidad química N-glicosidico
o Mutágenos endógenos
 Mutaciones exógenas (inducidas por mutágenos) mutagenesis
o Agentes químicos: acción directa, alquilantes, intercalantes bifuncionales
o Agentes físicos: radiación UV, radiaciones ionizantes
o Agentes fisiológicos: virus
 La mutación da lugar a un diferente aminoácido:
mutaciones no sinónimas, de sentido equivocado, falso o
alterado “missense mutation”. 73% de las mutaciones
Efecto de la 2-aminopurina (2AP) como mutágeno, ácido nítrico como
mutágeno, hipoxantina
como mutágeno, Hidroxilamina
Agentes intercalantes: nitrógeno mostaza y etilnitrosourea, benzopireno
mayor mutageno smok cigarrillo en adulto. 5BU

REPARACION DEL DNA

Aparentemente funcionales cuando faltan o se dañan genes no esenciales,
posiblemente las células utilizan la cadena de ADN complementaria, si no ha sido
modificada, o la cromatida hermana como plantilla, para restaurar la nformacion
original, ULTIMO RECURSO “SINTESIS DE TRANSLESION”
DAÑO A 1 UNICA CADENA, la otra puede usarse de plantilla
-reparación sobre la marcha: ADN poli I, III, exonucleasa 3’-5’, si aun no se ponen más
nucleótidos.
-reparación directa: no elimina nucleótidos ni bases, usa fotoliasa Rayos UV,
metiltransferasa q retira grupos metilo
-por escisión de base (BER): 1 solo nucleótido dañado por oxidación, alquilación,
hidrolisis, desaminacion; Usando glicosidasa, endonucleasa, polimerasa y ligasa
-por escisión de nucleótido (NER): 2-30 bases UvrABC endonucleasa y reparación
acoplada a transcripción
- de malapareamiento o mismatch (MMR), solo procariotas
En juego la supervivencia celular, respuesta SOS; procariotas sistema RecA proteasa
elimina proteínas represoras de polimerasas de bypass
P53 induce a la apoptosis
Daños a cadena doble:
repara roturas NHEJ (Non homologous DNA END Joining)
ADN ligasa+ cofactor XRCC4 forman complejo une directamente 2 extremos, linfocitos
T y B, topoisomerasas, etc
FUNDAMENTOS MANIPULACION GENETICA
Ingeniería genética = tecnología DNA recombinante
Grandes avances: producción proteínas, hormonas, interferones, vacunas, anticuerpos
monoclonales, factores de coagulación, enzimas, posibilitan Dx. Y tratamiento
enfermedades, permite entender cáncer en términos moleculares
Tecnologia Dna recombinante: corta DNA; endonucleasas de restricción “tijeras”
moleculares, une 2 fragmentos DNA ligasa, utiliza vectores vehículos clonadores,
introduce moléculas DNA recombinante a la celula hospedera q proporciona
maquinaria enzimática para replicación de moléculas, permite seleccionar células
hospederas con inserto especifico “fragmento a amplificar”.
Enzimas de restricción ”endonucleasas” con letras romanas y DNA Ligasa principales
para construcción de moléculas de DNA recombinante; 3 tipos de enzimas de
restricción las de tipo II muy útiles Ing. Genética ya que, no requieren ATP, cortan DNA
secuencia de nucleótidos específicos, reconocen secuencias cortas “palindromos” 4-6
bp.
Vectores de clonaje:
Plasmidos pBR322 HIND II cortan en dos lugares a la vez -10KB
Lambda CHaron 4ª -20KB
Cosmidos -50 KB
BAC -250 KB
YAC -3000 MB
Retrovirus penetran muy fácil celula; reemplazo de genes y terapia génica
Localizar gen,aislarlo, insertarlo en otro segmento de ADN (vector) lo resultante= ADN
recombinante, introducir ADN recombinado en celula huésped, confirmar producción
proteína correspondiente, clonar gen.
Proteinas sintetizadas: eritropoyetina, insulina humana, interferones, TPA activa
plasmina, anticuerpos monoclonales, factores de coagulación, vacunas.
Bibliotecas genómicas: colección fragmentos DNA derivados de genoma de
organismo, cada fragmento unido a vector clonador
PCR:
- DESNATURALIZACION: 95° 10 min Separacion de hebras DNA
- HIBRIDACION: 45°-60° -1 min Union de pequeños fragmentos “primers”
- ELONGACION 72°: Extension de fragmentos usando molde ADN muestral
- Enzima soporte alta temperatura de desnaturalización ADN Poli “Taq
Polimerasa”
Permite: amplificar muestra adn con una molecula se genera infinidad de copias,
conocer dueño rastro genético particular, estrategias Dx. Medico; detección virus
mutaciones genéticas con cabello o gota de sangre.
Aplicaciones: detección mutaciones (galactosa 1P uridil transferasa en
galactosemia, mutaciones c-Ras, gen CFTR), Dx. Prenatal y preimplantacion,
secuenciación ADN fosiles, identificación especies y control de cruzas animales,
Proyecto genoma humano, análisis paternidad y criminalística.
Mutaciones mitocondriales.
ENFERMEDADES MITOCONDRIALES:
Radicales libres de oxigeno, subproductos OXPHOS, ZONA BUCLE D, origen
replicación: OH, promotores transcripción: MtTFA MtTERF, elementos reguladores
expresión DNA.
Replicacion MtDNA: OH y OL, DNA polimerasa gamma, rRNA7S iniciador L, inicio
OH.
Transcripcion: RNA Polimerasa, factor de transcripción para iniciador: (MtTFA),
factor de transcripcion para terminación: MtTERF, puntos de inicio H1 y H2 y L.
cadena pesada: H1: tRNAPhe-rRNA12S-tRNAVal-rRNA16S
H2: rRNA12S 12 peptidos 14 tRNA
cadena ligera: rRNA7S (poliA-RNA: L) -8tRNA – 1 peptido.
 Genes transcritos de cadena L
NADHdesh: sub 6
• tRNAs: Ala, Asn, Gln,Cys, Tyr, Ser , Glu, Pro
• rRNA mitocondrial 7s
Genes transcritos de cadena H
NADH desh: sub 1,2,3,4,5
• Cit oxidasa: sub 1, 2, 3
• ATPasa: sub 6, 8
• Cit b
• rRNAs: 12S, 16S
• tRNAs: Phe, Val, Leu (1 y 2), Ile, Met, Trp, Asp, Lys, Gly, Arg, His, Ser, Thr
GENETICA MITOCONDRIAL
• Herencia materna
• Poliplasmia
• Segregación mitótica al azar
• Homoplasmia
• Heteroplasmia
• Genotipos (3): homoplásmico, heteroplásmico
• Efecto umbral para el fenotipo
• Tasa de mutación x 10
• Envejecimiento
Mutación patogénica
• Familias de etnias diferentes
• Correlación entre el porcentaje de mutación y el fenotipo
• Se expresa junto con el fenotipo
• Afecta una base muy conservada
Neuropatía óptica hereditaria de Leber (LHON)
Dr. Wallace centro de Medicina Molecular de Atlanta Abril 2001 describe las
mutaciones
• Ceguera bilateral aguda
• Atrofia del nervio óptico
• Mutaciones primarias 11778, 3460 y 14484
• Ligamento locus DXS7

Síndrome de neuropatía, ataxia y retinopatía pigmentaria (NARP)

• Mutación
T 8993 G
sub 6 ATPasa
Heteroplasmia
Debilidad muscular
Neurogenica, demencia, ataxia, retinopatia
Síndrome de Leigh (MILS)
Descubren el gen relacionado a la acidosis láctica Enero 2003 Proceedings of
National Academy of Sciences
• Disfunción tallo cerebral, ganglios basales, desmielinización, regresión
psicomotora, convulsiones, ataxia.
• Lesiones necróticas tálamo, tallo cerebral, núcleo dentado
• Neuropatía periférica
• Necrosis cerebral
• Mutación mtDNA T8993G
Homoplasmia
• DNAnu C por T 1684 (Arg por Trp)
Síndrome de Encefalopatía mitocondrial con acidosis láctica y episodios de
accidentes cerebro-vasculares (MELAS)
• Mutación A 3243 G tRNALeu (UUR)
• Disfunción cerebral y cambios en la estructura cerebral, acidosis lactica, fibras
rojo rasgadas… oftalmoplejia, cardiomiopatias, diabetes mellitus y sordera…
Síndrome de Epilepsia mioclónica con fibras rojo rasgadas MERRF
• Debilidad muscular, ataxia, convulsiones, miopatia mitocondrial.
• Mutacion A 8344 G
gen tRNALys
Mutaciones asociadas a reorganizaciones del mtDNA
• Síndrome de oftalmoplejia externa progresiva PEO
• Síndrome de Kearns-Sayre
• Síndrome de Pearson
• Duplicaciones del mtDNA
• Deleciones múltiples en el mtDNA
• Depleción del mtDNA
Síndromes de oftalmoplegia externa progresiva (PEO)
• Oftalmoplegía
• Ptosis bilateral de los párpados
• Miopatía
• Fibras rojo rasgadas y COX negativas
• Esporádica a jóvenes
• Deleciones grandes y únicas en mtDNA
Síndrome de Kearns-Sayre
• Neuromuscular -20a
• PEO, miopatia mit
• Retinitis pigmentaria sordera y demencia, fallos endocrinos y renales.
• Bloqueo conduccion cardiaca, ataxia Hipoacusia
• CSFProtein
• FRR +
• Deleción - esporádica
Síndrome de médula osea/páncreas de Pearson
• Neonatos
• anemia macrocítica, trombocitopenia y neutropenia.
• Delecion 2 a 9 Kb en mtDNA y multiples (4997 y 7436 pb) +60%
MANIFESTACION CLINICAS
• Demencia, desordenes motores, intolerancia al ejercicio
• Accidentes cerebro vasculares, convulsioes
• Ptosis, oftalmoplejia, retinopatía pigmentaria, atrofia óptica, ceguera
• Sordera, diabetes
• Cardiomiopatia, disfunciones hepáticas y pancreáticas, obstrucción intestinal
Estudio Bioquìmico
• ^Lactato, piruvato, alanina séricos
• ^aa séricos
• Indice de Oxido reducción
• Estudio de Consumo de Oxígeno
• Defecto en uno o varios complejos respiratorios
• Actividad Enzimática en Biopsia
• Cuantificación de enzimas respiratorias
Estudio Molecular
• Análisis de polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción
• Transferencia Southern blot
• FISH