ELECTROFORESIS DE ADN 
 
 

 
Objetivos 
 Realizar la electroforesis del ADN extraído, purificado y cuantificado. 
 Analizar las bandas obtenidas en el gel. 
 
 
Antecedentes académicos 
 Fundamento de la electroforesis 
 Moléculas que se pueden separar por electroforesis 
 Medios de soporte para realizar la electroforesis 
 Modos de disposición del soporte: Horizontal, Vertical 
 Ejemplos de separación electroforética 
 Tinción de proteínas y de ácidos nucleicos 
 
 
 
Introducción 
La  electroforesis  es  una  técnica  de  separación  de  moléculas  en  una  mezcla 
por aplicación de un campo eléctrico. Las moléculas disueltas se desplazan o 
migran  en  un  campo  eléctrico  a  una  velocidad  determinada  por  su  relación 
carga‐energía. 

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Bioquímica Celular y de los Tejidos I 
 

La  electroforesis  en  gel  de  agarosa  es  un  método  bastante  utilizado  para 
separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. La agarosa es un polímero 
lineal, extraído de algas marinas, que al gelificar forma redes en las cuales las 
moléculas  de  ADN  de  doble  cadena  migran  de  manera  inversamente 
proporcional  al  logaritmo  en  base  10  (log10)  de  sus  tamaños  moleculares. 
Dado  que  el  ADN  está  cargado  negativamente  debido  a  los  grupos  fosfatos 
de  la  molécula,  la  migración  en  la  cámara  de  electroforesis  ocurre  del  polo 
negativo hacia el polo positivo.  
Entre  los factores que afectan la tasa de  migración  del ADN  en los geles de 
agarosa se incluyen: 
1.  El tamaño del fragmento: como ya se mencionó, las moléculas lineales 
de ADN de doble cadena se desplazan en los geles de agarosa de una manera 
inversamente  proporcional  a  log  10  de  sus  tamaños  moleculares,  de  modo 
que a menor tamaño, mayor velocidad de migración. 
2.  Concentración de Agarosa: Existe una relación lineal entre el logaritmo 
de  la  movilidad  electroforética  del  ADN  y  la  concentración  del  gel:  a  mayor 
concentración, menor rango de separación (Cuadro 1). 
3.  La  conformación  del  ADN:  las  moléculas  circulares  y  las  lineales 
presentan diferencias en su migración a través de la matriz de agarosa; es así 
como  las  formas  circulares  plegadas  migran  más  rápido  que  las  formas 
circulares con rompimientos del enlace fosfodiéster en una de las cadenas y 
que las formas lineales. 
4.  Voltaje aplicado: a voltajes bajos la migración de las moléculas lineales 
de  ADN  es  proporcional  al  voltaje  aplicado.  Sin  embargo,  si  la  fuerza  iónica 
del  campo  es  elevada,  la  movilidad  de  los  fragmentos  de  alto  tamaño 
molecular  se  incrementa  diferencialmente.  Por  lo  tanto,  el  rango  de 
separación efectiva en los geles de agarosa decrece cuando se eleva el voltaje 
aplicado. 
5.  Amortiguador utilizado: la migración del ADN se ve afectada tanto por 
la  composición  como  por  la  fuerza  iónica  del  amortiguador  empleado,  de 
manera  que se  debe establecer un balance de  iones  que genere  una fuerza 
iónica  suficiente  para  lograr  la  conductancia  eléctrica,  sin  excederse  y 
ocasionar en el peor de los casos un calentamiento excesivo con fusión de la 
agarosa  y  desnaturalización  del  ADN.  Entre  los  amortiguadores  más 

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 Electroforesis  de ADN 

empleados se encuentran: Tris‐acetato‐EDTA (TAE), Tris‐borato‐EDTA (TBE) y 
Tris‐fosfato‐EDTA (TPE). 
Una vez terminada la electroforesis, la visualización de las moléculas de ADN 
se  logra  mediante  tinción  con  bromuro  de  etidio  u  otro  colorante  como  el 
Midori  Green®.  Esta  sustancia  se  intercala  entre  las  bases  del  ADN,  de 
manera que el colorante unido al mismo presenta una mayor fluorescencia, 
que el colorante sólo en solución. 
Cuadro 1. Eficiencia de separación de ADN de acuerdo a la concentración de 
agarosa. 

Concentración de agarosa en el gel Eficiencia en el rango de separación de

(%) moléculas lineales de ADN (kb)
o.3 5.0-60.0
0.6 1.0-20.0
0.7 0.8-1.0
0.9 0.5-0.7
1.2 0.4-6.0
1.5 0.2-3.0
2.0 0.1-2.0
 

Material y Equipo 
 Cámara de electroforesis 
 Micropipetas p20, p200 y p1000 µL 
 Puntas nuevas para micropipetas  
 Fuente de poder  
 Papel cera 
 Transiluminador 
 Matraz Erlenmeyer de 200 mL  
 Probeta de 1000 mL 
 Frasco de 1 Litro para TBE 
 
 

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Bioquímica Celular y de los Tejidos I 
 

Reactivos 
‐ Amortiguador TBE 10X  
‐ Reactivo Midori green® 
‐ Buffer de carga 6X Promega® 
‐ Marcador de peso molecular Promega® 
‐ Agarosa grado biología molecular 
 

Método 
1. Preparar 1L de amortiguador TBE 0.5X a partir de TBE 10X. 
2. Pesar  la  cantidad  de  agarosa  requerida  según  el  porcentaje  del  gel.  Por 
ejemplo, para preparar 100ml de un gel de agarosa al 0.7% pesar 0.7g de 
agarosa y disolverlo en TBE al 0.5% en un matraz Erlenmeyer.  
3. Calentar  la  solución  con  el  fin  de  disolver  por  completo  la  agarosa  en  el 
microondas  durante  aproximadamente  un  minuto  y  medio  hasta  que  se 
observe transparente (Fig. 1). 
4. Enfriar  un  poco  y  agregar  5µL  de  Midori  Green,  continuar  enfriando  y 
antes que solidifique, servir en el soporte del gel y colocar los peines para 
formar los pozos en número y tamaño deseados (Figs. 2 y 3). 
 
 
 
 
 
  Fig. 1. Calentamiento de  Fig. 2. Llenado del soporte 
  Agarosa  del gel 

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 Electroforesis  de ADN 

 
Fig. 3 Colocación del peine Fig. 4 Gelificación de la agarosa 
 
5. Esperar de 20 a 30 minutos para la gelificación  de la agarosa, colocar en la 
posición correcta la cámara de electroforesis y llenar la misma poco antes 
del borde máxino marcado con el amortiguador 0.5X (Figs 4, 5 y 6). 
 
 
 

 
 
 
 
Fig. 5. Colocación de la placa en la  Fig. 6. Llenado de la cámara
  cámara 
 
 
6. Colocar en el primer pozo 5µl del marcador de peso molecular y después 
las muestras utilizando 4µl de cada una, mezclando con 4µl de buffer de 
carga  y  colocándolas  a  partir  del  pozo  siguiente  en  donde  se  agregó  el 
marcador de peso molecular (Figs. 7 y 8). 

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Bioquímica Celular y de los Tejidos I 
 

 
  Fig. 8. Colocación de marcador y 
Fig. 7. Preparación de muestras muestras en pozos
7. Conectar  los  electrodos  y  correr  a  80  voltios  durante  1hora  20  minutos 
(Fig. 9). 
Nota: Recordar que el ADN migrará en la cámara de electroforesis del polo 
negativo hacia el polo positivo 

 
 
 
 
Fig. 9. Conexión de la cámara a la fuente de poder. 
8. Observar  la  presencia  de  las  bandas  separadas  de  ADN  en  el 
Transiluminador (Fig. 10). 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 10. Observar la presencia de bandas. 

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 Electroforesis  de ADN 

 
 
Resultados 
 Obtener una foto de la electroforesis de las muestras de ADN. 
 Comparar  las  bandas  de  cada  carril  y  establecer  el  peso  molecular 
aparente de cada banda. 
 Realizar un análisis de resultados. 
 
 

 
Cuestionario 
1. ¿Qué otros polímeros existen para realizar geles para electroforesis? 

2.  Mencione otros ejemplos de electroforesis. 

3. ¿Qué características presentan las moléculas que se pueden separar por 
medio de la electroforesis? 

4.  Mencione el fundamento de la tinción con Bromuro de etidio. 

5.  ¿Qué  otros  tipos  de  colorantes  se  pueden  utilizar  para  teñir  geles  de 
agarosa? 

   

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Bioquímica Celular y de los Tejidos I 
 

 
Referencias 
1. Concepción  J.  Puerta  B.  Prácticas  de  Biología  Molecular.  Bogotá, 
Colombia: Editorial pontificia Universidad Javeriana; 2005. 
2. Freifelder  D.  Técnicas  de  Bioquímica  y  Biología  molecular.  Barcelona: 
Editorial Reverté. 2003. 
3. González‐Morán  MG.  Técnicas  de  laboratorio  en  biología  celular  y 
molecular. México: Facultad de ciencias, UNAM, AGT Editor, S.A.; 2008. 
4. Karp G. Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos. 6ª ed. 
México: Mc Graw‐Hill Interamericana; 2011. 
5. McKee T, McKee J. Bioquímica: las bases moleculares de la vida. 4a ed. 
Madrid: Mc Graw Hill‐Interamericana; 2009. 
6. Mendoza‐Rincón JF, García del Valle A, Aguilar‐Santelises L. Protocolos 
en Biología molecular. México: FES Zaragoza, UNAM; 2004. 
7. Voet  D,  Voet  JG,  Pratt  ChW.  Fundamentos  de  Bioquímica.  La  vida  a 
nivel  molecular.  2ª  ed.  Buenos  Aires,  Argentina:  Editorial  Médica 
Panamericana; 2007. 
 
 

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