RESISTENCIA A METALES TÓXICOS EN BIOFILMS: DIVERSIDAD DE

RESPUESTAS MICROBIANAS Y SU EVOLUCIÓN

Resumen

Dado que las biopelículas son un tema importante en los campos de la medicina y
la salud, varios estudios microbiológicos recientes se han centrado en su
formación y su contribución a los mecanismos de resistencia de compuestos
tóxicos. En esta revisión, describimos cómo los metales afectan la formación de
biopelículas y resistencia, y cómo las biopelículas pueden ayudar a las células a
resistir los metales tóxicos. Primero, la matriz orgánica actúa como una barrera
que aísla las células de muchos ambientes tensiones ambientales En segundo
lugar, cambia el metabolismo de las células y una subpoblación de células de
crecimiento lento o no creciente conocida como persiste surge. En tercer lugar, en
el caso de las biopelículas de múltiples especies, se desarrollan interacciones
metabólicas que permiten que las células sean más persistentes o tener una
mayor capacidad para sobrevivir que una sola especie de biofilm. Finalmente,
discutimos cómo la alta densidad de las células puede promover el gen horizontal
procesos de transferencia, lo que resulta en la adquisición de nuevas
características. Todos estos mecanismos cruciales permiten a los
microorganismos sobrevivir y colonizar ambientes tóxicos, y probablemente
aceleran los procesos evolutivos en curso.

Palabras clave: Adaptación; Tolerancia del metal; Secuestro; Drenaje de ácido

minero; Persisters; Variantes

1. Introducción

En muchos ambientes, poblaciones de microorganismos concentrarse en las

interfaces sólido / líquido o líquido / gas, resultado en la formación de perifiton
(biofilms que se forman en superficies sólidas fusionadas), estromatolitos (hongos
y torres) biofilms en forma en aguas quietas) o agregados de células no unido a
una superficie sólida (flóculos nombrados) o serpentinas (biofilms filamentosos en
el agua que fluye), que tienen características [1,2] . Todos estos tipos de biofilms
consisten principalmente de células incrustadas en una matriz orgánica compuesta
de hidratado biopolímeros como proteínas (incluidas enzimas), exopolitio
sacáridos, glicolípidos y ADN extracelular [3] . Considerable interés se ha
centrado durante los últimos años en el proceso de formación de comunidades
adherentes a la superficie y su dispersión, en parte debido a la llegada de
microscópica métodos como la microscopía confocal y el desarrollo de nuevos
sistemas de cultivo celular (que fueron revisados recientemente en
[1, 3-6] ) En pocas palabras, las bacterias planctónicas primero se adhieren a un
biótico o superficie abiótica; este primer paso a menudo requiere, pero no es
restringido a, la presencia de flagelos o pili ( Fig. 1 ). Una vez que se han unido
firmemente, las células migran juntas usando un proceso de contracción de la
motilidad o reclutar células planctónicas y crecer para formar microcolonias. Las
bacterias sésiles excretan extra- sustancias poliméricas celulares (EPS) formando
un heterogéneo matriz intercalada con canales de agua abiertos. Lo especifico
componentes de la matriz determinan la arquitectura y su estabilidad, e influir en la
eficiencia funcional de la biopelícula, en particular, sus propiedades adhesivas,
intercambio molecular procesos, contenido de agua de la matriz, carga y sorción
propiamente corbatas [3] . La composición del EPS depende de la microempresa
organismos presentes y las condiciones ambientales, incluidos la temperatura y la
disponibilidad de nutrientes. La lisis celular puede ser responsable de la formación
de cavidades huecas en una madurez biofilm ( Figura 1 ) Otras células pueden ser
pasivas o activas (a través de proceso de dispersión impulsado por la motilidad)
separado del sésil comunidad y se dispersan en el líquido (a través de su baño)
ming motility) o en la superficie (enjambrando en superficies húmedas caras o
mediante un proceso de deslizamiento o contracción de la motilidad) y colonizar
otros sitios ( Fig. 1 ). Un enlace entre la regulación de formación de biofilms y
enjambrado, natación o espasmos los procesos de motilidad han sido
recientemente descritos y revisados [1,7] . La formación de biopelículas es un
programa de desarrollo coordinado basado en comunicaciones de célula a célula
que involucra varios procesos de regulación, como la detección de quórum (QS),
Regulación mediada por sistemas de dos componentes o c-di-GMP [2,7,8] .
Existen varias líneas de evidencia que sugieren que el biofilm formación protege
las células de una amplia gama de medio ambiente desafíos [ 9e11] . En el campo
de la ecología microbiana, el papel de biofilms en la resistencia celular a
compuestos tóxicos como el metal iones es de particular interés [2,10] . Varios
iones metálicos son tóxicos ya que bloquean muchos procesos celulares cruciales
en todo los dominios de la vida [12,13] . En células eucariotas y procariotas, la
toxicidad de los metales depende de si son o no metales esenciales, su
especiación y su concentración [12,13] . Metales redox activos esenciales como
hierro (Fe), copolímeros por (Cu), cromo (Cr) y cobalto (Co), que se someten
reacciones cíclicas que participan en los procesos de transferencia de electrones,
son tóxicos cuando están presentes en exceso, mientras que no son esenciales
metales tales como arsénico (As), mercurio (Hg), plomo (Pb) y el cadmio (Cd) es
tóxico incluso en concentraciones muy bajas. los mecanismos implicados en la
toxicidad de los metales han sido revisado recientemente [12,13] . En resumen, los
metales pueden directamente o producen indirectamente radicales reactivos a
través de Fenton y Haber- Reacciones de Weiss, lo que resulta en la formación de
oxígeno reactivo y especies de nitrógeno (ROS o RNS). Este mecanismo fue
observado en el caso de Fe, As, Cr, telurio (Te), Co, Hg, plata (Ag) y Cu. ROS,
como el radical hidroxilo ( OH) en particular, reacciona con el ADN, dando como
resultado bases dañadas o filamentos, peroxidación lipídica (que conduce
indirectamente a bases dañadas) o modificaciones de proteínas. Además, metal la
toxicidad puede estar relacionada con el metabolismo del glutatión, que juega un
importante papel antioxidante en las células e induce la quelación de varios
metales. La presencia de exceso de As, Ag, Cd, Co, Cr o Te induce la depleción
de glutatión, afectando el celular equilibrio redox Los metales interfieren con la
actividad proteica mediante unión a tioles u otros grupos funcionales, catalizando
la oxidación ción de cadenas laterales de aminoácidos, desplazando iones de
metales esenciales en metaloproteínas e interfiere con los procesos de plegado y
promover la agregación de proteínas [ 12e14] . Algunos metales también pueden
inhiben la actividad celular porque presentan un patrón estructural la mología con
sustratos enzimáticos. Esto ocurre, por ejemplo, con arsénico pentavalente
(arseniato), que sustituye a fosfato utilizado en muchos procesos celulares,
incluyendo oxidativo fosforilación. Por último, en los microorganismos, algunos
metales tales como Ag y aluminio (Al) deterioran la función de la membrana por
interfiere con los procesos de absorción de nutrientes y la interrupción de la
cadena de transporte de electrones y / o la fuerza del gradiente de protones Fig. 1.
Descripción general de la formación de biofilm y factores que contribuyen a la
resistencia o tolerancia tóxica a los metales. La sensibilidad reducida a los metales
tóxicos en las biopelículas se debe a múltiples factores, incluidos los cambios en la
eficiencia de la formación de biopelículas, la estructura de la matriz, el
metabolismo y la expresión génica, así como la aparición de mutaciones. (Yo:
metal; H: hemaglutinina) [12,13] . A pesar de tales efectos tóxicos, muchos
microorganismos son capaz de colonizar ecosistemas contaminados porque
desarrollar mecanismos de resistencia, que pueden afectar el metal especiación,
causa la extrusión de metal fuera de la celda, de manera eficiente reparar
macromoléculas, eludir las vías metabólicas o secuestrar el metal dentro de la
estructura de una biopelícula [10,15] . En esta revisión, proponemos informar
sobre las últimas conclusiones sobre cómo las biopelículas contribuyen a los
mecanismos bacterianos adaptativos permitiendo que las células sobrevivan en
ambientes extremos que contienen metales tóxicos. Datos sobre el enlace entre la
formación de biopelículas o la dispersión y los procesos de resistencia a metales
tóxicos microbianos ser presentado. Las biopelículas generalmente están
formadas por comunidades que contiene varias especies [16] , y hallazgos
recientes sobre cómo Las biopelículas multiespecíficas promueven la resistencia a
los metales tóxicos. también se presentará.
2. Efecto de los metales en la formación y desarrollo de biofilms

La mayoría de los estudios sobre el papel de las biopelículas bacterianas en la

resistencia a metales tóxicos se realizaron en biopelículas preformadas con
metales ya que, en la mayoría de los casos, el biofilm bacteriano la formación no
fue posible en las concentraciones de metales tóxicos anteriores la concentración
inhibitoria mínima planctónica (MIC) [17,18] . En dichos estudios, se demostró que
una vez iniciado, La biopelícula proporciona una ligera ventaja en presencia de
tóxicos metales, ya que la aparición de la muerte celular generalmente se
pospone. Sin embargo, y al contrario de lo que se observa en presencia de las
células antiobióticas, planctónicas y de biofilm son en la mayoría de los casos casi
igualmente susceptible a la muerte por oxianiones metálicos y cationes [17, 19e21]
, es decir, su eliminación mínima de la biopelícula concentración (MBEC) en la
biopelícula no es mayor que el concentración bactericida inmaculada (MBC)
observada en condiciones de crecimiento planctónico. Crecimiento en una
biopelícula bacteriana por lo tanto, no necesariamente aumenta la resistencia del
células a los metales tóxicos, sino que los dota de mayor tolerancia dependiente
del tiempo [19,20,22,23] . En algunas bacterias, las células en biofilm son incluso
más susceptibles a los oxianiones que células planctónicas, como se observó para
tellurite en el caso de Staphylococcus aureus ATCC 29213, donde el MBC es más
alto que el MBEC [24] . Sin embargo, en pocos estudios, fue posible probar la
formación de biopelículas bacterianas en inhibidores concentraciones de tory. Por
ejemplo, la formación de biopelícula era encontrado para ser promovido en
Rhizobium alamii YAS34 por Cd exposición a concentraciones inhibitorias [25] , y
en la marina Methanogen archaeon Methanosarcina acetivorans C2A cuando las
células pre-adaptadas se expusieron a Cd en concentraciones que son muy
tóxicos para las células de control [26] . Candida tropicalis 99916 Los biofilms de
levadura fueron más tolerantes a los metales tóxicos que los tablones. células
tónicas, y la muerte de las células en las biopelículas no era dependiente del
tiempo [27] . Por lo tanto, los efectos de los metales en la biopelícula Depende de
la cepa bacteriana, el metal y el crecimiento medio ambiente (la composición de
los medios, la fuente de carbono y condiciones de amortiguamiento) [18,21,22] .
Estudios recientes que más revelan de manera científica cómo los metales pueden
afectar los diversos pasos en el se describirá la formación y desarrollo de biofilms
abajo.

2.1. Adjunto y adherencia

Una estrategia de protección adoptada por varias bacterias cuando están

expuestos a metales tóxicos consiste en promover el formación de una biopelícula.
La unión bacteriana es el primer paso en el desarrollo de una biopelícula, así
como desempeñar un papel clave en este proceso. Los metales a menudo tienen
un impacto en la adhesión de células a la superficie y / o procesos de agregación
de célula a célula, que probablemente promuevan la formación de biofilms y
mejorar su resistencia. Sin embargo, la eficiencia de la pro- El proceso de unión y /
o agregación de las células parece Depende del metal involucrado y su
concentración. por ejemplo, aumentar las concentraciones de Cd, incluso en
inhibidores concentraciones, inducen la unión de las células y, por lo tanto, bio-
formación de película en R. alamii YAS34 [25] . Varios estudios tienen También se
han realizado en estos procesos en el caso de Xylella fastidiosa. Aumentando la
concentración de Cu (de 0 a 200 μM, <MIC) mejoró la formación del biofilm del X.
fas- Tidiosa cepa Temecula, como se muestra por la detección de cristal violeta
ensayos en placas de microtitulación, aunque concentraciones más altas (> 200
μM) redujo la cantidad de biopelícula formada. Sobre el Por otro lado, en estudios
que usan cámaras de microfluidos, la adición de Cu (50 μM) promovió la unión de
esta bacteria y aceleración de la agregación celular, mientras que concentraciones
más altas (400 μM, <MIC) inhibió la agregación y evitó formación de biofilm [28] .
Manganeso subinhibitorio (Mn) y Zn las concentraciones afectan la unión de célula
a célula en X. fastidiosa cepa Temecula, pero Mn aumenta el proceso de
biopelícula formación en esta bacteria, mientras que el zinc afecta este proceso,
probablemente al disminuir el proceso de unión de superficie-célula [28,29] . En
otra bacteria, X. fastidiosa 9a5c, la se compararon las esponjas de la biopelícula
con Cu y tetraciclina. En este caso, se encontró que la biopelícula era menos
susceptible que células planctónicas a Cu. Las biopelículas incubadas en
presencia de concentraciones inhibitorias de tetraciclina parecía ser más delgados
que los formados en presencia de con- centraciones de Cu. De acuerdo con estos
resultados, se demostró que las expresiones genéticas y proteicas de las
hemaglutininas, que son se sabe que está involucrado en los procesos de
adhesión de célula a célula en X. fastidiosa, fueron mayores en respuesta al Cu
que a la tetraciclina [30] . Por lo tanto, Cu puede acelerar la tasa de sedimentación
y proceso de formación de biofilm en el caso de ambos X. fastidiosa Cepas 9a5c y
Temecula. Algunos Escherichia coli K-12 las cepas formaron una biopelícula en
respuesta al níquel subinhibitorio (Ni) concentraciones. En esta biopelícula, se
encontró que el crecimiento celular ser menos afectado por la exposición al metal
que bajo planctónico condiciones [31] . Además, las propiedades de adherencia y
el proceso de formación de biofilm se incrementaron y la transcripción de los
genes que codifican curli adhesivos se indujo en respuesta a Ni [31] . Con todo,
estos hallazgos sugieren que las células bacterianas expuestos a los metales
generalmente responden promoviendo la adhesión procesos, y por lo tanto,
formación y mantenimiento de biopelículas ( Fig. 1 ). Sin embargo, algunas
excepciones a esta estrategia han sido observado, y en otros casos, elcambio
entre el tablón formas de vida tónica y biofilm se previno en la presencia de
metales tóxicos. De hecho, la formación de biopelículas puede competir con
motilidad flagelar en bacterias, y en algunos casos, la motilidad se favorece la
estrategia en lugar de la formación de biopelículas la presencia de metales tóxicos
( Fig. 1 ) En Herminiimonas arsenicox- ydans ULPAs1 y Rhizobium sp. NT26, por
ejemplo, As (III) induce la motilidad de natación, retrasa el inicio de la biopelícula
[32] y reduce la cantidad de biopelícula formada [33] . Las bacterias pueden por lo
tanto, debe elegir entre sésiles y planctónicos estilos de vida con el fin de incrustar
las células en un protector matriz o escape duras condiciones y llegar a más
favorable nichos ( Figura 1 )

2.2. Cambios en la estructura y maduración de la biopelícula

Además de afectar la adhesión celular, metal pesado la exposición puede conducir

a cambios estructurales en la matriz de biofilm ( Fig. 1 ) La formación de una
biopelícula más rígida o más compacta que es más resistente a la erosión por
fuerzas de corte ha sido observado, por ejemplo, en concentraciones más altas
que el MIC para Fe 2þ y superior a la MBC para Al 3þ , Cu 2þ , Fe 3þ , Zn 2þ en
Bacillus subtilis B1, y en concentraciones subinhibitorias ción de Zn 2þ en X.
fastidiosa cepa Temecula [ 29, 34 ] . la cantidad de matriz extracelular aumenta
considerablemente en Thiomonas sp. CB2 a concentraciones subinhibitorias de
Como (III), lo que probablemente mejore la integridad de la biopelícula [35] . Se ha
establecido que el complejo desarrollo en 3-D de la Tm. sp. La biopelícula CB2
contribuye a su fisio- heterogeneidad lógica y al desarrollo de una subpoblación de
células que se removilizan en un proceso rápido de dispersión [35] ( Fig. 1 ) En
este caso, los exopolisacáridos contribuir a mejorar la compleja arquitectura 3-D
de la matriz de biofilm en respuesta a la exposición a As (III). En el caso de R.
alamii YAS34, el biofilm está más condensado en presencia de concentraciones
subinhibitorias de Cd que en ausencia de este metal [25] . Cambios específicos
del metal en la estructura propiedades hidrodinámicas y también se han
observado en Shewanella oneidensis MR-1 biofilm expuesto a cualquiera cromato
Cr (VI) o uranil U (VI), lo que resulta en espacial específica estratificaciones [36] .
En las cepas de levadura, los metales afectan la biopelícula estructura e influye en
la estructura 3-D de una manera similar a través de el proceso de diferenciación
celular de la levadura a las células hifas en C. tropicalis 99916 y Candida albicans
3153A. Subin- concentraciones hibitorias de Zn 2þ , Co 2þ , Cu 2þ , Ag þ , Cd 2þ ,
Hg 2þ , AsO UN 2 y SeO 2À 3 abolir la formación de hifas en ambos cepas,
mientras que CrO 2À 4 induce una estructura micelial en C. tropicalis 99916 [37] .
Todos estos hallazgos sugieren que la exposición seguro para los metales resulta
en una reestructuración espacial de la biopelícula, que puede ayudar a los
microorganismos a adquirir mayor tolerancia a los metales tóxicos. Se ha
formulado la hipótesis de que estos los cambios estructurales pueden afectar la
biodisponibilidad de los metales, los procesos de adquisición de nutrientes
celulares y la administración metabólica actividades descritas en la siguiente
sección.

3. Papel de las biopelículas en la resistencia a los metales tóxicos

Una vez que se ha establecido un biofilm, tendrá un impacto en las células ya sea
a través de un proceso pasivo y / o influyendo en el patrón de expresión génica, lo
que resulta en la resistencia específica o tolerancia mecanismos descritos a
continuación.

3.1. Secuestro e inmovilización dentro de la biopelícula

matriz Se ha establecido claramente que el polipéptido extracelular meric matrix

actúa como una barrera para los metales tóxicos, en la cual puede ser
secuestrado, inmovilizado, mineralizado y / o precipitado tated [1,10,38] ( Figura 1
) Algunos metales tóxicos se unen a funcional grupos de componentes de la matriz
EPS (como el carboxilo, grupos fosforilo, hidroxilo y amino) [38] . La combinación
de cargas positivas y negativas en la matriz restringe difusión de iones metálicos
debido a la cantidad de electrostática sitios de unión disponibles para la biosorción
de metales es de 20 a 30- veces mayor en polímeros extracelulares que en
plancton células [39] . Esta biosorción de metales tóxicos resulta en su secuestro
en la matriz extracelular y por lo tanto puede disminuir su biodisponibilidad,
retardar su difusión y por lo tanto reducir la exposición celular y aumentar la
resistencia bacteriana [22,34,40] . Este proceso puede proteger a las bacterias
hasta que la matriz se satura De hecho, de acuerdo con esta idea, se ha
observado un gradiente en la distribución de células vivas en Pseudomonas
aeruginosa PAO1 biofilm expuesta a subin- concentraciones hibitorias de Cu. En
este caso, la muerte de las células ocurrido preferentemente en la superficie
exterior y la periferia de la biopelícula, que está más expuesta al Cu, mientras que
el número de células vivas fue mayor en las capas inferiores de la biopelícula
donde las células probablemente no se ven afectadas por el metal [41] . Aumentar
las cantidades de EPS o cambiar los carbohidratos composición de biofilms
expuestos a iones metálicos en comparación con células no expuestas
probablemente mejoraría el metal proceso de atrapamiento [29,42,43] . Este
proceso ha sido principalmente descrito en el caso de cationes, ya que los EPS
son a menudo aniónicos [22,27] . Se ha informado que en matrices de biofilm de
bacterium E. coli JM109 y levadura C. tropicalis 99916, metal Los oxianiones
tienen una afinidad de unión menor que los cationes y pueden por lo tanto, se
difunde más eficientemente [17,27] . En Pseudomonas putida ATCC 33015, los
azúcares están presentes en grandes cantidades en el matriz de biofilm expuesta
al cromo, que probablemente tates procesos de enlace de cationes. Además,
grandes cantidades de ADN extracelular (eADN) se unen a Cr (III) contribuir a la
bioestabilización del metal [43] . En X. fastidiosa 9a5c, la cantidad de
exopolisacáridos capaces de formar un complejo con Cu cambia según el medio
de crecimiento [44] . Igualmente, Pseudomonas pseudoalcaligenes KF707 biofilms
cultivadas en medio mínimo fueron capaces de contrarrestar los metales mejor
que aquellos adquirido en Rico medio (MBEC mínimo medios > medios ricos de
MBEC) [21] ; mientras que E. coli JM109 fue menos susceptible a metales en
medio rico que en medio mínimo (MBEC rich media > MBEC minimum media ) [22]
. Estos hallazgos muestran que tanto las condiciones ambientales como la
cantidad de EPS influyen en el comportamiento de biosorción y el secuestro
eficiencia de biopelículas. Mecanismos que involucran biofilms que influyen en el
metal los procesos de especiación o precipitación han sido descritos. Los cambios
en el estado oxidativo pueden favorecer la precipitación de metales y hacer que
los metales sean menos tóxicos, lo que permite que las células toleren mayores
concentraciones de metal que las células planctónicas ( Fig. 1 ). Varios estudios
han establecido que los compuestos inorgánicos como sulfuros y fosfatos
promueven el agotamiento del metal de una solución al concentrarlos, lo que da
como resultado el formación de precipitados insolubles en la matriz [10,38,45] .
Estos precipitados se pueden ver para formar minerales finamente granulados
cuando se observa microscópicamente, como en el caso de electro-denso granos
de cadmio y azufre atrapados en toda la biopelícula matriz de M. acetivorans C2A
[26] . Seleniumesulfur similar se observaron gránulos en la matriz de biofilm de un
Desulfo- cepa similar al microbio norvegicum (Dundee aislado 1). En este caso, se
estableció que la bacteria producía sulfuro, que promovió la reducción abiótica de
selenito en subinhibitorio concentraciones [46] . Por otro lado, la inmovilización y la
modificación del metal en la matriz de la biopelícula puede estar vinculada a un
proceso de reducción enzimática extracelular activa posiblemente que ocurre en
presencia de un donador de electrones adecuado. por ejemplo, la biopelícula de
Geobacter sulfurreducens PCA mostró una mayor capacidad para inmovilizar y
reducir U (VI) a la forma menos móvil U (IV) en comparación con planctónica
Células. Esta biopelícula contiene proteínas involucradas en el electrón
transferencia, es decir, citocromos de tipo c de membrana externa y electrodos Pili
tridimensionalmente conductivo, que inmoviliza y reduce el uranio en el estrato
superior de la biopelícula. Este proceso es en gran parte dependiendo del tamaño
de la superficie expuesta de metaloides del biopelícula [47] . Otro proceso de
biomineralización ha sido descrito en Cupriavidus metallidurans CH34, que es
capaz para formar nanopartículas de oro (Au) en biofilms a través de un activo
mecanismo de reducción y precipitación de Au (III) tóxico - complejos [48] . Todos
estos procesos están estrechamente regulados y requieren un cambio en el patrón
de expresión génica, así como cambios en el metabolismo general de las células,
como se describe en la siguiente sección.
3.2. Inducción génica específica del biofilm y metabólica

cambios en respuesta a metales tóxicos Los cambios en la expresión génica y en

el metabolismo son pensamiento estar involucrado en la tolerancia a metales
mediada por biopelículas. Tres los principales cambios han sido descritos hasta la
fecha. Primero, ha sido informó en dos estudios que las células con exposición a
metales favorecían la síntesis de EPS, lo que significaba que serían en la
biopelícula de la exposición a metales tóxicos durante su crecimiento ( Figura 1 ,
ver también la parte 3.1). Un cambio en el el metabolismo relacionado con el
exopolisacárido se observó en Pseu- domonas fluorescens ATCC 13525 biofilm
metabolome expuestos a una concentración subinhibitoria de iones Cu utilizando
ambos GC-MS y H_NMR enfoques, lo que resultó en un aumento en la producción
de la matriz, mientras que la correlación del metabolismo se favoreció a una
respuesta al estrés oxidativo en células planctónicas expuestas al Cu [49] . Del
mismo modo, la expresión de genes implicados en la síntesis de exopolisacáridos
aumentó en X. células de Temecula de la cepa fastidiosa expuestas a subinhibitor
concentraciones de Zn en la biopelícula en comparación con células expuestas
[29] . En segundo lugar, una vía metabólica puede a veces ser favorecido frente a
otro durante forma biofilm- ción. En la cepa ND132 de Desulfovibrio desulfuricans,
por ejemplo, el proceso de metilación de Hg fue más rápido en biopelícula que en
bacterias no adheridas. Además, el proceso de la metilación en cultivos
planctónicos resultó ser independiente dent de la vía acetil-CoA, mientras que esta
vía parece desempeñar un papel importante en los procesos de metilación anillo
dentro de la biopelícula [50] . Además, P. pseudoalcaligenes La biofilm KF707 y
las células planctónicas adoptan diferentes estrategias para contrarrestar los
metales tóxicos: las células presentes en las biopelículas son resistente a selenita
y telurita, pero al contrario de lo que es observado con células planctónicas, esta
resistencia no está vinculada a la reducción de estos metales [21] . En tercer lugar,
un microarray enfoque se utilizó para investigar la respuesta a Cu de la planta-
patógeno X. fastidiosa 9a5c biofilm y compararlo con la respuesta a la tetraciclina.
En estos experimentos realizados con concentraciones subinhibitorias e
inhibitorias de Cu, una dosis mecanismo de respuesta dependiente específico
para este metal fue observado. El número de genes regulados implicados en
similares los procesos biológicos aumentan al aumentar la concentración de Cu
ciones. Los genes inducidos de esta manera incluyen fagos relacionados genes,
genes patogénicos, virulencia y adaptación, mientras que los genes reprimidos
incluyen genes implicados en el ARN y la síntesis de proteínas [30] . Por lo tanto,
la actividad relacionada con los fagos y el biofilm la formación parece representar
una respuesta específica al Cu en esta X. cepa fastidiosa, mientras que el cierre
de la replicación del ADN y la traducción de proteínas, así como la represión del
movimiento y la inducción de los sistemas toxina-antitoxina, parecen comprender
una respuesta común a Cu y tetraciclinas en X. fas- tidiosa biofilm ( Fig. 1 ). Estos
hallazgos sugieren que bacteriana las células pueden reducir su metabolismo e
ingresar a un estado fisiológico cuando están expuestos a compuestos tóxicos [30]
. Un estado latente fue descrito previamente en estudios sobre las respuestas de
otras bacterias a los antibióticos, y estas células se denominaron células de
persistencia.

3.3. Formación de células Persister

Un mecanismo comúnmente asociado con la resistencia a los antibióticos

es la formación de células persister, una subpoblación de células que

ni crece ni muere y sobrevive a la exposición prolongada a tóxicos

compuestos [ 51e53] . Solo unos pocos ejemplos de células persistentes capaces

para sobrevivir a la exposición a los metales en las biopelículas se han descrito,

incluyendoP. aeruginosaATCC 27853 expuesto a cationes metálicos en

concentraciones más altas que el MBC [20] y la cepa de E. coli

JM109 expuesto a oxianiones en concentraciones ligeramente superiores

que el MIC [17] . Este estado latente difiere de la adquisición

ción de resistencia, ya que el MBC de estas células no aumenta,

y se sugirió que estas células persistentes pueden contribuir a

la tolerancia dependiente del tiempo descrita en la sección 2 [17,20] . En

estos estudios, se observó que estas células fueron capaces de crecer

de nuevo después de la eliminación del metal y muestra una susceptibilidad

normal

[17,20] . Del mismo modo, X. fastidiosa cepa Temecula puede ser capaz de

entrar en un estado viable pero no cultivable en concentraciones subinhibitorias

tración de Zn, en la que el crecimiento es lento [29] . En X. fastidiosa 9a5c,

la presencia de células persistentes (que representan el 0,05% de

población) en respuesta a concentraciones inhibitorias

ciones de tetraciclina y Cu [30] y el número de estos

las células persistentes aumentaron cuando la población fue pretratada con

una concentración subinhibitoria de Cu. La expresión de tox

genes relacionados con la ineantitoxina, que se sabe están asociados con la tasa

768

S. Koechler et al. / Research in Microbiology 166 (2015) 764e773

Página 6

de aparición de células persistentes en respuesta a antibióticos en E.

coli [52,53] , fue inducido en X fastidiosa9a5c biofilm expuesta a

Cu. En general, estos hallazgos muestran que, como en el caso de los antibióticos

oticas, algunas bacterias pueden entrar en un estado latente en el

presencia de metales tóxicos, a la espera de mejores condiciones de crecimiento.

4. Biofilms de metales y multiespecie

La existencia de la biodiversidad es crucial para cualquier ecosistema, y

esto es aún más bajo condiciones fluctuantes del entorno,

donde puede servir para mantener la integridad funcional de

sistemas. Varios estudios demuestran que la presencia de tóxicos

los metales pueden tener efectos negativos [54] o positivos en

relaciones funcionales en el trabajo en microbiología multiespecífica

películas [55] . Por otro lado, la presencia de varias especies en

las biopelículas pueden favorecer el funcionamiento de las comunidades y sus

resistencia a los metales tóxicos. Por ejemplo, se demostró que

en presencia de Cd [56] , una biopelícula de una sola especie acumulada

solo el 25e30% de la cantidad de Cd acumulada por un multi-

especie biofilm. Se sugirió que las bajas cantidades de Cd

acumulado por la biopelícula de una sola especie puede estar vinculado a su

baja capacidad de crecer y producir unión extracelular de Cd

componentes, ya que una mayor cantidad de proteínas y EPS

acumulado en el biofilm multiespecie que en el

especie biofilm [57] . En otro estudio, una comunidad microbiana

mostró una capacidad de captación de iones de Cu de dos a tres veces mayor que

el de las culturas de una sola especie [58] . Del mismo modo, la cya mixta

las biopelículas bacterianas y no bacterianas eliminan el Cr (VI) del

fase acuosa más eficazmente que cada cepa por separado [59] .

En un tercer estudio, biorreactores experimentales inoculados con un

cepa resistente individual y alimentada con cloro / álcali estéril

las aguas residuales colapsaron cuando las concentraciones de Hg afluente

aumentado, mientras que los rendimientos estables se lograron utilizando un

mezcla de cepas [60] . Este estudio revela que estable, eficiente

Los rendimientos del biorreactor se facilitan incluso en variables

condiciones de influente por la presencia de una mezcla de Hg-resistente

comunidad.

La biomineralización parece ser un proceso importante para

Desintoxicación de metales en biofilms naturales. Un papel central tiene

de hecho se ha demostrado para C. metallidurans CH34, una bac

terium que domina las comunidades de biofilms en Au

granos en minas australianas, en la desintoxicación de Au-

plexes [48,61] (Véase también la parte 3.1 ) Recientemente, multiespecie

biofilms cultivados a partir de un estanque de relaves de arena de petróleo en el
norte

Se descubrió que Alberta, Canadá era extremadamente resistente a

varios metales (hasta 20 mg L

À1

de Pb, 16 mg L

À1

de Zn,

1000 mg L

À1

de Sr y 3,2 mg L

À1

de Ni). En esta comunidad,

se observó un proceso de mineralización de Cu, Ag, Pb y Sr en

la superficie de las biopelículas donde un alto nivel de bacterias

la complejidad de la especie se mantuvo. Curiosamente, poco cambio

en las comunidades microbianas expuestas a plata, plomo o

el estroncio se observó en comparación con la multitensión libre de estrés

especie biofilm [62] . Pseudomonas, Ensifer, Azospirillum y

especies pertenecientes a la familia Rhizobiaceae fueron los principales

miembros de esta comunidad. Una especie, Rhodococcus

erythropolis, se aisló de esta comunidad y se encontró que

ser menos tolerante al plomo y al estroncio que los otros aislamientos,

y no biomineralizó estos metales. En contraste con lo que es

observado en presencia de Pb y Sr, la viabilidad de R.

la biopelícula de eritropolis no disminuyó en presencia de Cu como

lo hizo en una biopelícula de múltiples especies, lo que sugiere que esta espe-

cies es bastante resistente al Cu [62] . Estas observaciones indican

que su resistencia dependía de los metales, sino también de la

presencia de las otras especies. Cabe señalar que el

estructura y diversidad de comunidades bacterianas de este tipo hacen

no depender solo de las concentraciones de metales tóxicos, sino también, como

mencionado anteriormente en el caso de las biopelículas de una sola especie, en

el

temperatura [63] , el pH [64] , el contenido orgánico [65] y

interacciones entre estos factores.

El desarrollo y la persistencia de biofilms también

afectados no solo por su entorno, sino también por la variedad

de especies presentes. Algunos estudios recientes se han realizado

con el objetivo de comprender cómo pueden influir los metales tóxicos

la diversidad de la comunidad de biofilm. Chodak et al. [66] re-

portó que un alto contenido de metales pesados en el suelo forestal tenía una

influencia negativa sobre la actividad bacteriana y la diversidad, sugiriendo

que los miembros de la comunidad no necesariamente se benefician por igual

de pertenecer a una biopelícula de múltiples especies. Aunque una pérdida de

la biodiversidad dentro de la biopelícula se ha observado en algunos

estudios, efectos positivos de la exposición a metales pesados en la biodiversidad

han sido reportados con frecuencia. Altos niveles de biodiversidad fueron

detectado en rocas y minas, donde el número típico de OTU

ascendió a casi 100 [ 67e70] . En un estudio sobre una roca bio-

película de una antigua mina de oro y arsénico en Zloty Stok

(Polonia), un alto nivel de diversidad microbiana (más de 190

OTU) dominado

por

Rhizobiales (a-Proteobacteria)

(60 mg kg

À1

de la masa seca) se observó [71] . Varios organismos

potencialmente involucrado en la transformación de arsénico, hierro

microorganismos oxidantes / reductores, metanótrofos y muchos

microorganismos involucrados en el ciclo del nitrógeno se detectaron en

la biopelícula que se origina en esta mina Los autores presentaron un

Modelo de "arsenium commensalism", en el cual especularon

que la mayoría de las bacterias en la comunidad de biopelícula puede

obtener energía de fuentes distintas a los compuestos de arsénico, pero

oxidar el arsénico y producir la forma oxidada menos tóxica,

arseniato La reducción del arseniato es luego catalizada por She-

wanella y utilizado para promover su propio crecimiento [71] .

De manera más general, la diversidad microbiana produce un reservorio de

cepas con nichos ecológicos complementarios que resultan en alta

niveles de resistencia a las condiciones tóxicas del metal. Parece que el

las fuerzas impulsoras responsables del desarrollo de la comunidad bacteriana

en entornos de metales tóxicos son la autoorganización y

cooperación en lugar de competencia entre individuos

croorganismos. Las biopelículas multiespecíficas probablemente constituyen una

hábitat bacteriano favorable en condiciones de estrés por metales tóxicos,

proporcionando protección y la posibilidad de participar en

interacciones cooperativas mutuamente beneficiosas. Finalmente, especie

la diversidad dentro de una biopelícula constituye un medio importante de

lidiar con el estrés y las condiciones variables produciendo un

"Efecto seguro" [72] . La hipótesis del "seguro" se basa

en el supuesto de que diferentes especies o cepas responderán

de manera diferente a las condiciones ambientales: algunas bacterias pueden

tolerar varios tipos de perturbaciones abióticas más que otros

y sus tasas de crecimiento pueden verse menos severamente afectadas [ 73e75] .

769

S. Koechler et al. / Research in Microbiology 166 (2015) 764e773

En conjunto, los cambios muy pequeños en la comunidad microbiana

observadas en respuesta a As, Hg, Zn, Pb, Cr o Cd

desafío en todos los estudios descritos anteriormente indican que el

la abundancia de especies más resistentes no se ve reforzada por la

presencia de estos compuestos Tienden, más bien, a indirectamente

promover el crecimiento de biopelículas multiespecie porque estos metales

inducir resistencia y / o tolerancia a sus miembros cuando

están expuestos a estrés por metales tóxicos. Este hallazgo puede ser

en parte atribuible a las diferencias en el potencial genético de este

conjunto de microorganismos, que permiten a los miembros coexistentes de

la comunidad para resistir y, a veces, aprovechar

aumentar las tensiones ambientales, como los metales tóxicos.

Desde hace más de una década, se han realizado varios estudios

formado en las comunidades de biopelícula encontradas en la mina de ácido

drenajes (AMD) en la Mina Richmond (California), que

contiene concentraciones extremadamente altas de As, Cd, Cu y Zn

[76] . Se demostró que una biopelícula formada por varios

microorganismos (bacterias, arqueas, protistas y hongos) en el

La interfaz aire-solución estimula la disolución de la pirita para formar un

solución ácida y rica en metales. En varias etapas de esta biopelícula

desarrollo, los roles metabólicos han sido asignados a diferentes

microorganismos o incluso poblaciones de bacterias estrechamente relacionadas

ria o arqueas [76] . En particular, se demostró que

varios Leptospirillum estrechamente relacionados coexisten y juegan un papel

crucial

roles, expresando diferentes proteínas y por lo tanto teniendo

roles ecológicos distintos. En términos más generales, heteroge-

neidad se observó en estas biopelículas y alto inesperado

la diversidad se demostró recientemente en estos ecosistemas

[ 77e79] . La genómica ambiental realizada en estos bio-

películas han llevado a estudios de evolución microbiana en el

nivel comunitario y demostrar que tales bacterias y arqueas

han evolucionado en una escala de tiempo relativamente corta (unos años)

mutación, migración y reordenamiento del genoma, pero también

transferencia horizontal de genes (HGT) con plásmidos o fagos

[76, 78e80] . Tales mecanismos probablemente permitan mantener

la alta diversidad y heterogeneidad observada. Una comparativa

estudio sobre varios datos metagenómicos sugieren que la microor-

ganismos que se encuentran en ambientes extremos evolucionan más rápido, y el

frecuencia de HGT es más alta que en aquellos encontrados en

ambiente extremo [81] . Curiosamente, un enriquecimiento en

genes implicados en la recombinación, replicación y reparación del ADN

se observó en los genomas de microorganismos encontrados en

AMD, y en particular en las biopelículas de la mina Richmond

[81] e islas genómicas portadoras de genes de resistencia de metales

se han detectado en varias bacterias capaces de formar

biofilms que pueden haber sido adquiridos por procesos de HGT

[33, 82e84] . Todos estos datos sugieren que los metales tóxicos pueden
favorecer

ocurrencia de mutaciones, HGT y así acelerar la evolución de

tales microorganismos. Hasta la fecha, solo se realizó un estudio

en Tm. sp. CB2 biofilm para probar tal hipótesis. En esto

bacteria, en presencia de As (III), células muertas y lisis celular

se observaron eventos, así como una rápida dispersión de parte del

población [35] . Después de la dispersión, el 20% de las células se

más resistente, es decir, el MIC fue más alto que el del

células "madre" planctónicas. Estas celdas se definieron como

hormigas, ya que esta resistencia se conserva después de varias generaciones

de crecimiento en ausencia de As (III) (Farasin, inédito)

datos). Tal mecanismo de adquisición de resistencia puede aumentar

capacidad bacteriana para colonizar nuevos nichos después de la dispersión

celular
( Fig. 1 ) La aparición de variantes en la resistencia del metal a la biopelícula

y los mecanismos involucrados deberían estudiarse en el futuro para

entender cómo los metales pueden aumentar la diversidad de biopelículas y

acelerar los procesos de evolución

5. Conclusión

El hecho de que las biopelículas bacterianas a menudo son más tolerantes o

resistente a los metales tóxicos que sus homólogos planctónicos se debe

a procesos complejos que involucran muchos factores ( Fig. 1 ). Esta

la resistencia hace que las biopelículas sean una herramienta biotecnológica

atractiva,

ya que pueden aumentar la eficiencia del metal tóxico actual

procesos de remediación Por ejemplo, desde el secuestro de metales tóxicos

Los procesos de extracción o inmovilización por EPS son

independientes, EPS y biofilms podrían ser utilizados para metales pesados

eliminación o inmovilización in situ de metales pesados

[45,85,86] . Como se establece en la literatura, las bioespecies multiespecíficas

las películas son probablemente más eficientes y más estables que las películas

biofilms de especies, y prometen tener aplicaciones útiles

en el futuro. Hablando en general, entender cómo multi-

especies biofilms forman, resisten contaminantes como metales tóxicos y

eliminarlos es de vital importancia no solo desde el biore-

punto de vista de mediación, sino también en procesos médicos y agua

sistemas de distribución, donde las biopelículas no son deseables porque

son susceptibles de interferir con los procesos de descontaminación.

Finalmente, solo se han realizado algunos trabajos para estudiar cómo

los metales influyen en la evolución bacteriana en las biopelículas. Varios
programas

Se sabe que los procesos como HGT afectan la evolución de las especies en

biopelículas multiespecíficas. Menos información está disponible hasta ahora en

la capacidad de plásmidos, transposones, bacteriófagos y eDNA

para mediar HGT en células bacterianas que crecen en biopelículas bajo

estrés de metales tóxicos. Sin embargo, HGT puede tener un fuerte impacto

en la difusión de los genes de resistencia y por lo tanto puede ser fuertemente

contribuir a la resistencia general a los metales tóxicos en la naturaleza. En el

futuro, será importante estudiar los mecanismos involucrados en

HGT en biofilms expuestos a metales tóxicos.

Conflicto de intereses

Los autores declararon no tener conflicto de intereses.

Expresiones de gratitud

Esta investigación fue apoyada por la Université de Strass

bourg (UdS) y el Centre National de la Recherche Scien-

tifique (CNRS). Este estudio fue financiado por el THIOFILM

proyecto. JF y JCA fueron apoyados por la Agence Nationale

de la Recherche (ANR-12-ADAP-0013) y la Región

Alsacia y la Universidad de Estrasburgo, respectivamente.