MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

MOMENTO DE LA EVALUACION: INTERMEDIA

UNIDAD 3: TAREA 4 - MEDIOS DE CULTIVO Y TECNOLOGÍAS DE

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y de Medio Ambiente

NOVIEMBRE 2017

INTRODUCCIÓN

Todos los medios de cultivos son parte esencial para dar crecimiento a
microorganismos. Cada especie depende de lo que necesite cultivar. Algunos
microorganismos crecen en condiciones normales pero otros exigen medios
específicos para ello. Los medios de cultivo pueden ser de distintos tipos
teniendo en cuenta su consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos.
Para nuestro caso tuvimos microorganismos indígenas (hongos y bacterias) que
metabolizan los contaminantes orgánicos que se encuentran en suelos
convirtiéndolos en productos finales inocuos. En nuestro proceso, los
contaminantes orgánicos son biotransformados porque generalmente los
microorganismos pueden utilizarlos para su propio crecimiento como fuente de
carbono y energía y, en el caso de que no sean capaces de crecer a partir de
ellos.
Se aplicaran pruebas de laboratorio Con la fosfotriesterasa de Flavobacterium sp.
ATCC 27551, teniendo en cuenta un experimento en medio mineral utilizando a
los plaguicidas (por separado), como única fuente de carbono utilizadas para la
biodegradación asistida.

6. Solución de preguntas.
¿Cuáles son las comunidades microbianas asociadas al ecosistema
afectado?
Para determinar los microorganismos presentes se tomaran muestras de suelo,
las cuales se diluirán en Na Cl, un medio líquido MSG, glucosa y el pesticida a
eliminar como fuente nitrógeno, posteriormente se deberán incubar de forma
aerobia (TAFOYA 2008),(Citado por Oviedo et al 2017). Posteriormente se
realizaran diluciones de estría y agotamiento, sembradas en agar para determinar
las colonias más promisorias, las cuales se inocularan en medio liquido MSG por
72 horas, y así poder realizar su conteo.(Oviedo et al 2017).
La identificación de los microorganismos se hace mediante técnicas, como la
tinción de Gram, pruebas de oxidación, fermentación, Agar cetrimide, para
pseudomona y mcKonkey para enterobacterias, entre otras. .(Oviedo et al 2017).
En suelos contaminados con pesticidas de uso agrícola, se han encontrado
microorganismos nativos con capacidad para degradar estos contaminantes, como
son: Pseudomonas sp, Streptomices, Artrhobacter sp, y Streptomices sp. .(Oviedo
et al 2017).
¿Cuál es el fundamento de las alternativas planteadas para esta
problemática?
Para el caso de la contaminación de suelos por plaguicidas en Colombia utilizando
técnicas de biorremediacion, aplicaremos la Bioaumentación, la cual es empleada
en suelos cuya capacidad natural de degradación no es suficiente, en esta técnica
se utilizan organismos capaces de biodegradar o transformar pesticidas.Esta
técnica se ha sido utilizada para tratar herbicidas como el clorofam, insecticidas
como el para tión, nitro y cloro fenoles entre otros (Alexander 1994) (Citado por J.
Rodríguez y F. Ruiz, 2016). Para la utilización de esta técnica es necesario
realizar cultivos de bacterias, posteriormente aislar microorganismos
degradadores, y que puedan utilizar los contaminantes como dadores de carbono,
para así poder formular y reproducirlos hasta obtener el volumen de
microorganismos necesarios para el tratamiento del área afectada por el
plaguicida.
En este caso el pesticida a tratar es la atrazina, 2 cloro-4etil amino-6-
isopropilamino-s- triazina, el cual es un herbicida de uso frecuente en cultivos de
caña, maíz, y pastos entre otros, que elimina monocotiledóneas y otras malezas.
(HANG y NASSETTA, 2003). ) (Citado por J. Rodríguez y F. Ruiz, 2016).
Así que las bacterias agregadas al medio mineralizan la atrazina hasta convertirla
en dióxido de carbono o amonio, o también pueden degradarla a compuestos
persistentes como el cianuro, desetilhidroxiatrazina y hidroxiatrazina. (DA CUNHA
et al., 2012). (Citado por J. Rodríguez y F. Ruiz, 2016).
En numerosos estudios se han empleado microorganismos como Arthrobacter,
Pseudomonas sp y Streptomices sp, las cuales mostraron resultados positivos en
la degradación de atrazina, ejemplo de ello fue el trabajo realizado por (STRONG
2012), (Citado por J. Rodríguez y F. Ruiz, 2016). Donde separaron una colonia de
Arthrobacter aurescens, en un medio líquido y cuya única fuente de carbono y
energía fue la atrazina. Otros microorganismos como pseudomas sp y
Streptomyces sp se ha utilizado para degradar terbutilazina, simazina, Atrazina,
utilizando diferentes medios y tiempos de incubación para su proliferación con
resultados satisfactorios, a diferencia de los organismos nativos de la misma
especie.(BANG et al 2002) ), (Citado por J. Rodríguez y F. Ruiz, 2016).
¿Cuál sería la(s) formulación(es) (estado, composición y función) que podría(n)
utilizarse para el cultivo de los microorganismos tratados en cuestión? a
biorremediación involucra el uso de microorganismos para degradar y desintoxicar
contaminantes presentes en el ambiente, transformando compuestos orgánicos
tóxicos a intermediarios estables más simples y de menor peligrosidad. La
efectividad de esta tecnología se evalúa desde la desaparición del químico de
interés, aunque este enfoque no considera que los productos finales o
intermediarios producidos durante la reacción de degradación puedan resultar
tóxicos
La velocidad de dispersión de los compuestos orgánicos en el suelo depende de
diferentes procesos tales como:
 degradación química y biológica
 escorrentía
 volatilización y lixiviación
Los cuales a su vez dependen de la región climática, propiedades del suelo y
propiedades fisicoquímicas de las moléculas.
La función de este proceso de cultivos de microorganismos puede verse afectado
y movilizarse también por cambios en parámetros geoquímicos (materia orgánica),
por difusión en cuerpos de agua a causa de gradientes de concentración, por
oxidación de sedimentos anóxicos a través de resuspensión causada por el flujo,
al igual que por procesos de degradación que conduzcan a una forma más móvil
de los compuestos.
¿Las propuestas planteadas son ecológicamente sostenibles?
Todos evolucionamos en armonía con la naturaleza, lo importante es que cada
técnica aplicada no sea nociva para el medio ambiente y sea para protegerlo. La
aplicación de la biodegradación en la descontaminación de diversos medios
afectados por las crecientes actividades productivas, abre nuevos espacios de
intercambio público-privado a nivel científico, tecnológico y productivo. Se debe
tener en cuenta que la investigación aplicada a la tecnología ambiental se enfrenta
a problemas de falta de inversión (debido a que los precios de mercado no
compensan de manera suficiente un adecuado cuidado del ambiente), lenta
difusión, falta de capital de riesgo, aversión al mismo o burocracia. Deben estar
bien definidas, las herramientas y metodologías para la incorporación de
consideraciones de sostenibilidad en el diseño de las operaciones de tratamiento y
disposición final tanto de los contaminantes primarios, como de los residuos
generados por los procesos biológicos.
¿Cuáles serían las pruebas que debería realizar para determinar la
efectividad de las alternativas de solución planteadas
Para evaluar la biodegradación de diez POs
Con la fosfotriesterasa de Flavobacterium sp. ATCC 27551, se llevó a cabo un
experimento en medio mineral utilizando a los plaguicidas (por separado), como
única fuente de carbono. Los resultados mostraron que el Tetraclorvinfos (TCV)
no fue removido del medio de, por lo que se aislaron bacterias de suelos
agrícolas utilizándolo como única fuente de carbono. Se les caracterizó
bioquímicamente, llevándose a cabo cinéticas de crecimiento y degradación del
TCV en medio mineral (MM). El plaguicida se cuantificó por cromatografía de
gases. Los productos de la hidrólisis de este compuesto fueron identificados
mediante cromatografía de gases acoplado a un espectrómetro de masas (GC-
MS).
Se obtuvieron seis diferentes especies de bacterias, de las cuales Serratia
ficaria mostró la mayor eficiencia en la remoción del TCV del medio de cultivo
(Cuadro 1). Sin embargo, todas las especies aisladas fueron muy eficientes
en presencia de otra fuente de carbono, removiendo hasta un 98% del
plaguicida, lo cual sugiere un proceso de cometabolismo.
Con base en lo anterior, ¿Cuál sería la alternativa de solución más
recomendada para solucionar el problema?

Para el tratamiento de suelos contaminados con pesticidas en regiones

agrícolas de Colombia, afectadas por contaminantes como la atrazina,
clorofam, para tión, pesticidas organofosforados y metales pesados entre
otros, se recomendaría la técnica de Biorremediación asistida, o
bioaumetación, la cual parte de un análisis detallado del terreno, sus
condiciones, tipos de contaminantes presentes y concentraciones, para luego
determinar los microorganismos nativos capaces de degradar dichos
contaminantes, pero no que se encuentran en la cantidad suficiente para
realizar esta función.
Con la realización de pruebas, ensayos y análisis de laboratorio de identifican
las cepas que mostraron mayor crecimiento y capacidad para transformar los
contaminantes.
Con las colonias aisladas e identificadas, se procede a formular el medio en el
cual se desarrolla la biomasa de microorganismos que sea suficiente para
tarar el área o terreno que se quiera descontaminar.
De tal forma que la bioaumetación con organismos propios o extranjeros del
suelo, es un tratamiento adecuado y recomendado para recuperar suelos
contaminados con pesticidas, ya que se obtienen resultados en tiempos
inferiores a otros tratamientos, además no es necesario el uso de químicos u
otros elementos para recuperar el suelo, los elementos para el tratamiento son
orgánicos, en ocasiones los resultados obtenidos en el laboratorio suelen ser
mayores a los rendimientos obtenidos cuando se hacen las aplicaciones en el
campo, pero sin dejar de ser altamente efectivo.
 TRATAMIENTO DE SUELOS CONTAMINADOS POR HERBICIDAS

LOCALIZACIÓN DEL TERRENO, Uso del suelo, tipo de

contaminación, vegetación, topografía

Horizonte del suelo donde se encuentra, toma de Recolectar y analizar datos

muestras en diferentes partes a 15 cm de para determinar las
profundidad colonias de Pseudomonas
sp, estreptomices sp,
antrhobacter entre otras
que muestren buenos
resultados
Pruebas para determinar
Identificación de trazas Caracterización PH, textura, conductividad,
de los contaminantes y análisis en el carbono orgánico, Ca, Mg,
laboratorio Na e intercambio catiónico Las poblaciones con mayor éxito en la
degradación del pesticida, serán
multiplicadas utilizando formulaciones
a base de sub productos agrícolas como
la melaza de café, y otros residuos de
Se realiza pruebas a las cosecha, además se debe controlar PH y
Uso de medios selectivos, aislamiento e colonias, con temperatura.
identificación de microorganismos concentraciones
degradadores indígenas diferentes de pesticidas y
tiempos de exposición de
20, 30, 40 y 50 días.

La biomasa de microorganismos
Preparación de las degradadores se aplicara ala
Incubación anaerobia,
muestras utilizando Na terreno, por medio de inoculación
dilución con técnica de Reconocimiento de los
CL, agar líquido MS+ directa en el suelo, o diluyendo la
agotamiento sembradas microorganismos utilizando pruebas
glucosa, y el biomasa para ser aplicada por
en agar MSG. como Mckonkey, oxidasa, catalasa,
contaminante como aspersión.
Identificando las colonias tinción de Gram y oxidación
dador de nitrógeno de mayor crecimiento fermentación
 CONCLUSIONES

En este trabajo se pudo utilizar los conocimientos adquiridos anteriormente,

como fueron las técnicas de biorremediación, aplicadas a problemáticas de
contaminación reales en las diferentes regiones del país, poniendo a prueba lo
aprendido para poder elegir el tratamiento de descontaminación más
adecuado.

Se evidencio la importancia del trabajo en el laboratorio de microbiología, en

cuanto al cultivo de microorganismos, medios de cultivo, técnicas de siembra,
identificación, conteo y análisis, los cuales son vitales para la posterior
aplicación en campo.

De suma importancia la utilización de microorganismos como controladores y

recuperadores de sitios contaminados por acciones antrópicas y que su
limpieza o mejoramiento solo son posibles utilizando organismos que provee
el mismo suelo.

Se logró reconocer varios tipos de microorganismos según pruebas aplicadas

teóricamente.

Esta práctica escogida para utilizar microorganismos fue de vital importancia

Para controlar la contaminación de suelo. Además es reconocida a nivel mundial
ya que el aumento de la industria provoca cada vez más contaminación a
los ecosistemas naturales y muchas sustancias toxicas que la actividad industrial
desecha amenazando a la vida a animales y plantas.

Según literaturas consultadas resulta más sencillo, más económico y se usan

microorganismos que pueden favorecen al suelo, ya es una práctica habitual en
países desarrollados.
 REFERENCIAS

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contaminación. Recuperado de:
http://www.scielo.org.co/pdf/reus/v19n2/0124-7107-reus-19-02-00309.pdf
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http://repository.lasalle.edu.co/bitstream/handle/10185/20466/41102008_2016.pdf?
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https://www.researchgate.net/publication/267196228_EVALUACION_DE_LA_DEG
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Cortés Lombana, A. 2004. Suelos Colombianos una mirada desde la academia
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Facultad de Recursos Naturales. Bogotá - Colombia.
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