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INTRODUCCIÓN
•El microscopio (de micro, pequeño, y scopio, observar)
es un instrumento que permite observar objetos que son
muy pequeños para ser vistos a simple vista.
•Unidades de medida
•Al ser tan pequeños los microorganismos se miden en
unidades muy pequeñas, como micrómetros (10-3 mm),
nanómetros (10-6 mm) y angstroms (0,1 nm).
UNIDAD
TIPOS DE MICROSCOPIOS
1
•Clasificación:
– Según la fuente de emisión: óptico, o electrónico.
– Según el número de lentes: simple y compuesto.
•ESTEREOSCÓPICO
•También llamado «lupa binocular», hace
posible la visión tridimensional de objetos.
•Se fundamenta en la visión binocular
convencional, en la que los dos ojos
observan el espécimen con ángulos
levemente distintos.
•Consta de cuatro espejos, ubicados de
modo que permiten desviar las imágenes
correspondientes a cada ojo, puestas una
al lado de la otra de modo que al verse
montadas dan el efecto tridimensional.
•El óptimo de visión estereoscópica se
encuentra entre 2X y 40X. (aumentos)
MICROSCOPIO ÓPTICO
COMPUESTO
•Posee dos grupos de lentes, el objetivo y el ocular.
•Produce una imagen ampliada hasta 1000 veces, y tiene
un límite de resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm).
•El mas conocido es el microscopio de campo claro, o
corriente.
•Además hay otros tipos como:
–De contraste de fases
–De fluorescencia
–De campo oscuro
–Invertido
PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
•Lentes objetivo.
UNIDAD
Protozoos (100 X)
Sistema de iluminación
•Espejo o fuente de luz.
•Condensador. Sistema de lentes convergentes que
concentra la luz sobre un punto, de manera que proporciona
mas o menos contraste.
•Diafragma o iris: esta dentro del condensador. Abriéndose o
cerrándose permite graduar la intensidad de la luz.
SISTEMA DE ILUMINACIÓN
Efecto del diafragma
Objetivo mayor menor campo, menor profundidad de campo o de enfoque
•Mordientes.
•Son sustancias capaces de formar complejos insolubles
con los colorantes y que ayudan al proceso de coloración.
•Ejemplos de mordientes comúnmente usados son el
Lugol, el ácido tánico y algunas sales.
Tipos de Colorantes
•Catiónicos: tienen carga positiva, y se combinan con
estructuras celulares de carga negativa, como ácidos
nucleicos, polisacaridos ácidos. Ejemplos: Azul de metileno,
Cristal violeta, Safranina.
•Aniónicos: tienen carga negativa, y se combinan con
estructuras de carga positiva, como algunas proteínas.
Ejemplos: Eosina, Fucsina acida y Rojo congo.
•Liposolubles: se combinan con las sustancias grasas.
Ejemplos: Sudan negro.
•No tiñe a todas las células por igual. Se utilizan para teñir
aisladamente partes específicas de los microorganismos.
Se suelen utilizar sustancias mordientes para fijar el
colorante.
•La más utilizada es la tinción de Gram.
•Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y
gramnegativas.
•Tinción de Gram. Fue ideada por Christian Gram en
1883, e indica diferencias fundamentales de la pared
celular de las distintas bacterias.
Tinción Gram
2) Fijar el material
_
Gram + Gram
Una vez que el material esta
seco, pasar el portaobjeto sobre
el mechero.
3) Cubrir el portaobjeto con
Cristal violeta
Gram + Gram _
7) Agregar el colorante de
contraste (safranina)
•Desventajas:
•Tienen alto
costo.
•Otra desventaja
es su limitada
magnificación,
pues el objetivo
más potente es
de 60X. placas de Terasaki
Comparación entre tipos de microscopios
Microscopio de Microscopio de Microscopio de
Campo Claro Fluorescencia Contraste de Fases
Alga verde Saccharomyces
(eucariota) Bacteria filamentosa Teñida cerevisiae
con naranja de acridina
OPERACIÓN DEL MICROSCOPIO
OPTICO
•Colocar el objetivo de menor aumento en posición de
empleo, y bajar la platina completamente.
•Colocar la muestra sobre la platina, y sujetar con las
pinzas.
•Realizar el enfoque:
–Acercar al máximo el lente objetivo a la preparación, con
el tornillo micrométrico.
–Mirando a través de los oculares, separar lentamente el
objetivo, con el micrométrico, y cuando se observe la
muestra, girar el micrométrico, hasta enfocar.
– Pasar al siguiente objetivo. La imagen deberá estar ya
casi enfocada, y suele ser suficiente con mover un poco el
micrométrico para lograr el enfoque fino.
Mantenimiento y precuaciones
El (MET) tiene un
limite de resolución
de cerca de 1 nm.
Microscopio electrónico de transmisión
UNIDAD
Imágenes en el MET
1
• Permite estudiar las estructuras internas de los orgánulos
celulares, hasta 1 nm.
•Imagen bidmiensional.
El Microscopio Electrónico de Barrido (MEB),
(SEM),
- El MEB, permite observar células en
tres dimensiones, después de haber
sido fijadas y teñidas con iones de
metales pesados.
- Los electrones son reflectados sobre
la superficie del espécimen, y muestra
su forma real.
•Requiere que la muestra este seca,
luego se cubre con una capa de metal
(oro o platino).
•La SEM es útil en el estudio de
estructuras superficiales de células
intactas y virus.
•El MEB tiene menor resolución que
MET, pero su ventaja es la visión
tridimensional (Bernis, 1978)
MEB. Pueden observarse objetos de 2 nm.
EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB) (SEM)
•En la MEB un cañón de electrones proporciona un haz de
electrones enfocado con precisión, llamado haz primario.
c. Espermio
b. Capilar sanguíneo cortado
a. Ameba, organismo acercándose a un
transversalmente, por el que
formado por una sola óvulo. El óvulo humano
asoma un glóbulo rojo, célula
célula (unicelular), que es una célula que mide
que mide 7 micrones de
mide cerca de 50 poco más de 100
diámetro
micrometros micrones
d. Núcleo de una
célula animal, de e. Corte transversal de una f. Poros de salida de
alrededor de 5 hoja, espesor 1 mm glándulas gástricas.
micrones de Por una de ellas sale
diámetro un chorro de jugo
gástrico. Diametro de
poro, 5 micras
REFERENCIAS
• Arraiza N., Viguria P.M., Navarro J., Ainciburu
A. Manual de Microscopia. Historia,
descripción y uso del microscopio óptico.
• Bernis Mateu, J.: Atlas de microscopia,
Ediciones Jover, S.A., Barcelona, 1978.
• Locquln, M.; Langeron, M.: Manual de
microscopia, Editorial Labor, S.A., Barcelona,
1985.