DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA

CUANTITATIVA
DE
ALBÚMINA EN SUERO

INTRODUCCIÓN:
La albúmina es una proteína globular, formado por 584 aminoácidos y el peso
molecular calculado para ésta secuencia es de 66.248 daltons.
La albúmina es el mayor componente proteínico del suero humano. Siendo sintetizada
en el hígado y con una gran capacidad de cambios en su configuración. Entre sus
funciones se distinguen la regulación de la distribución del líquido extracelular, como
fuente de aminoácidos, como proteína de transporte de una variedad de sustancias
tales como hormonas, lípidos, vitaminas, calcio, y otros metales.
Su disminución está asociada a procesos de sobrehidratación, pérdida de proteínas,
disminución en la síntesis, o aumento en el catabolismo o degradación. Su aumento
está relacionado con procesos de hemoconcentración, entre otros.
En la desnutrición, los niveles plasmáticos de albúmina disminuyen mucho más que los
de la gammaglobulina. Otras de las funciones importantes de la albúmina es el
mantenimiento del 75% de la presión osmótica coloide del plasma. Las alteraciones de
los niveles séricos de albúmina pueden tener origen en un gran número de secuelas
patólogicas y en consecuencia no son específicas, aunque sí resultan útiles para evaluar
el estado del paciente.
La hiperalbuminemia usualmente es atribuible a deshidratación o hemoconcentración.
La hipoalbuminemia en general se debe a 1) hemodilución, 2) síntesis inferior a la
pérdida y 3) enfermedades que causan una gran pérdida de albúmina. La hemodilución
puede ser causada por el desequilibrio de electrólitos. La menor síntesis puede ser
atribuida a la incapacidad para obtener nutrientes debido a una desnutrición,
malabsorción o a una incapacidad del hígado para la síntesis de albúmina ocasionadas
por enfermedades como hepatitis crónica o aguda. Con frecuencia los niveles bajos de
albúmina son debidos a grandes pérdidas como en el caso de síndrome nefrótico,
enteropatía con pérdida proteica o lesiones cutáneas exudativas.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Prueba colorimétrica en la que la albúmina se combina con el verde de bromocresol a
determinado pH produciéndose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso
a verde azulado.

REACTIVOS

Verde de bromocresol, la absorbancia del reactivo

contra blanco de agua a 620 nm., debe ser del orden
de 0.150 D.O.
Reactivo Solución de Verde Bromocresol a pH 4.2
Estándar Albúmina 4.0 g/Dl
Blanco: Agua destilada.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DE LOS

REACTIVOS.

Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y
se evita la contaminación durante su uso. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. -
Absorbancia (A) del blanco a 630 nm  0,40.

EQUIPO REQUERIDO

Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros capaz de medir absorbancias a 620 nm.

(Rango 570 - 640 nm.), cronómetro y pipetas.
MUESTRA
Suero
a) Recolección: debe obtenerse suero
libre de hemólisis.
b) Aditivos: no se requieren.
c) Sustancias interferentes conocidas:
no se observan interferencias por
bilirrubina hasta 200 mg/l, triglicéridos
hasta 9 g/l y hemoglobina hasta 700
mg/dl. Referirse a la bibliografía de
Young para los efectos de las drogas en el
presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de
almacenamiento: si no se procesa
inmediatamente el suero puede
conservarse 3 días en refrigerador (2-10o C) o una semana en congelador (-4o C)

PROCEDIMIENTO

Blanco Estándar Desconocido

Muestra (mL) -- -- 0.01

Estandar (mL) -- 0.01 --

Reactivo (mL) 1.0 1.0 1.0

Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente, y leer las absorbancias a 620 nm.
Ajustar el aparato a cero con el blanco y efectuar las lecturas de las densidades ópticas
del estándar y muestra a 620 nm. El color resultante es estable por a lo menos treinta
minutos.
Componentes del reactivo:

Verde de bromocresol 0.20 mM en buffer de succinato de sodio 100 mM a pH 3.8

Solución estándar: Albúmina bovina, 10 mg/dL (Conservar entre 2° y 8°C. dura un mes,
o menor aun a -20°C dura varios meses)

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL

El color es estable 20 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese
lapso.

TÉCNICA

Llevar el reactivo a temperatura de reacción (18° - 25° C) antes de realizar el ensayo.

CALCULOS

Verificar la concentración del estándar en la etiqueta del frasco.

(A)Patrón / (A)Muestra x 5 (Conc Patrón) = g/dL de albúmina en la muestra

OBSERVACIONES:

- La reacción es lineal hasta 8.0 g/dL.

- Para valores superiores, diluir la muestra con solución fisiológica y el resultado
obtenido se multiplica por el factor de dilución.
- En el caso de sueros hiperlipémicos, deberá hacerse un blanco muestra con solución
fisiológica para eliminar la posible interferencia por la turbidez del suero.

RANGO DE REFERENCIA:

3.5 a 5.0 g/Dl

(*) Se observan valores más bajos durante el embarazo, en los recién nacidos, y en los
ancianos.
CARACTERISTICAS DEL METODO

Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,04 g/dL hasta el limite de

linealidad de 6 g/dL. Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la
muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r): 0,99. Ecuación de la recta de regresión: y= 0,98x + 0,09.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
Recuperación: Agregando cantidades conocidas de albúmina a distintas muestras se
obtuvo una recuperación entre 98 y 100 %.
Correlación: se determinó el valor de albúmina en 123 muestras con Albúmina
patróon y un kit comercial basado en el mismo principio, obteniéndose el siguiente
coeficiente de correlación: r = 0.9942, pendiente b = 0,9933, intersección a = 0,0999

INTERFERENCIAS: Bilirrubina hasta 110 mg/L, hemoglobina hasta 1 g/L y lipemia

hasta 10 g/L, interfieren.
Se han descrito varias drogas y y otras substancias que interfieren en la determinación
de la albumina.
Proteger el Reactivo A de la luz.
El material empleado debe estar libre de tensioactivos, caso contrario se obtendrán
valores discordantes.

RESUMEN

La albúmina sérica constituye más de la mitad de las proteínas sanguíneas

(aproximadamente un 60 % Ó 4.2 gr/100 mI), y en una forma muy general representa
aproximadamente el 50 %de la actividad sintética del hígado. La albúmina humana es
una pequeña proteína relativamente simétrica con un peso molecular
aproximadamente de 66.000 a 69.000 dalton, y que siendo la principal proteína del
plasma, es una molécula altamente soluble.

La albúmina es la proteína más abundante del plasma y es producida exclusivamente

por el hígado. La producción diaria es de 12 a 15 g, que puede aumentar al doble si el
hígado funciona normalmente, La vida media de la albúmina es de 20 días. El contenido
total de albúmina del organismo está sobre los 300 gramos, de los cuales 120 g (40%)
están en el plasma.
La Concentración de Albúmina en Sangre, Es útil medir la albúmina sérica como índice
del grado de enfermedad hepática crónica o del avance de una enfermedad aguda. Los
niveles de albúmina en sangre son bajos en pacientes con enfermedad crónica del
hígado

CUANTIFICACION DE LA ALBUMINA

La albúmina es sintetizada en las células hepáticas y se ha calculado que existe entre

200 y 500 microgramos de albúmina por cada gramo de tejido hepático. Hay una serie
de factores que influyen sustancialmente en las síntesis hepáticas de albúmina y entre
los más importantes se incluyen la nutrición, el ambiente, algunas hormonas y la
presencia o no de enfermedad . Entre las hormonas que se han demostrado que tienen
efecto sobre la síntesis hepática de la albúmina, están la hormona tiroidea, la insulina,
la hormona de crecimiento, la testosterona, la ACTH y los corticoides adrenales. Se
acepta que el principal regulador de la síntesis de albúmina es aparentemente la
presión oncótica de los sitios de síntesis . Una vez sintetizada la molécula de albúmina,
tiene dos rutas para pasar a la circulación: puede pasar directamente a través de la
pared de las células hepáticas a los sinusoides, o alternativamente puede pasar al
espacio conocido como espacio de Disse, que está situado entre la célula hepática y la
pared sinusoidal, pasando desde ahí a los linfáticos hepáticos, al conducto torácico y
finalmente al compartimento intravascular . Por cada 500 ml de sangre perdida,
solamente se pierden 12 g de albúmina (4% de la albúmina corporal total) y es
reemplazada por síntesis normal en 3 días.

REACTIVO PARA ALBUMINA USO: Para la determinación cuantitativa de albumina

en suero.
HISTORIA DEL METODO: La determinación de Albumina se hace usualmente
utilizando métodos de centrifugación, fraccionamiento de la sal, electroforéticos o
formación de color son las mas simples de practicar y presentan ellos mismos un
volumen alto de automatización. Son también procedimientos utilizados en la
determinación de proteína total para obtener la relación de A/G. En 1953 se describió
el uso del Naranjo de Metileno para determinación directa. Este método carece de
especificidad. El uso de la reacción color HABA se inició en 1954. Este método era
específico para albumina, pero tenía muy poca sensibilidad, muy poca correlación con
los métodos de electroforesis y una interferencia significativa con bilirrubinas, lípidos,
salicilatos, penicilina y sulfonamidas. En 1964 se propuso un método con Verde de
Bromocresol (BCG). Este procedimiento mostró mayor sensibilidad y menor
susceptibilidad a sustancias de interferencia. El método original ha sido optimizado
para mejorar la correlación con métodos electroforéticos. El procedimiento presente
sigue una modificación del original (BCG) formación del color. Algunas publicaciones
de los 70's reportan que algunas proteínas anormales se unen al BCG después del
primer minuto.
PRINCIPIO DEL METODO
La albúmina se une con el colorante BCG para producir un aumento color verde-azul
medido a 630 nm. El aumento de color es proporcional a la concentración de Albumina
presente.
Método: colorimétrico
SIGNIFICADO CLINICO
La albúmina es una de las más importantes proteínas plasmáticas producidas en el
hígado. Entre sus múltiples funciones se incluye nutrición, mantenimiento de la presión
oncótica y transporte de sustancias como Ca++, bilirrubina, ácidos grasos, drogas y
esteroides. Alteraciones en los valores de albúmina indican enfermedades del hígado,
desnutrición, lesiones de la piel como dermatitis, quemaduras severas o
deshidratación. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clínicos y de laboratorio
REACTIVOS: Verde de Bromocresol (BCG) 0.15g/l Buffer, pH 4.66+0.1 Surfactante,
ingredientes no reactivos y estabilizadores.
VALORES DE REFERENCIA: 3,5 a 5,0 g/dL. Estos valores son orientativos. Es
recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CONCLUSIONES

En la practica de cuantificación de albumina con el reactivo Verde de

Bromocresol (BCG) se observa que es un Método colorimétrico porque cambia
de color a verde azulado

La albúmina es una de las más importantes proteínas plasmáticas producidas en

el hígado. Una alteración en los valores normales nos puede indicar
enfermedades al hígado, desnutrición lesiones quemaduras severas,
deshidratación.

Los valores normales son de 3.5 a 5. g/dL, pero también puede influir los valores
en la edades ya se niño o anciano.
 El reactivo es para diagnostico in vitro solamente, El reactivo Verde de
Bromocresol (BCG) debe de ser una solución amarrilla verdosa, se debe
descartar cuando hay presencia de turbidez o precipitación

BIBLIOGRAFÍA

1. Doumas, B.T., Biggs, H.G., Standard Methods of Clinical Chemistry,Academic

press,N.Y. 7(175), 1976.

2. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Technics.Harper and Row Publishers.
New York,1964.

3. Young D.S., et al., Clin Chem. 21(10), 1975.