Flujograma

Bioquímica Practica N°5

DETERMINACIÓN DEL Km Y Vmax
Grupo: Miércoles de 10 am – 2 pm Mesa 4
Alumna: Joselyn Mishel Arellano Quintanilla

I. OBTENCIÓN DEL ENZIMA

Utilizar el extracto crudo preparado en la
práctica anterior almacenado a -80°C

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION

DE LA FOSFATASA ALCALINA
Reactivos B 1 2 3 4 5 6 7 8
Numerar 9 tubos y
Glicerofosfato 0.02 M - 0.1 0.2 0.5 1 2 3 4 5
agregar los reactivos en
pH 8.6 ml.
el orden que se indica:
Agua destilada (ml) 5 4.9 4.8 4.5 4 3 2 1 -

Homogenizar cada
Homogenizar los Agregar a todos los
uno y llevar a baño
tubos y pre-incubar tubos 0.5 ml de
maría a 37°C por
a 37°C por 5 min. enzima diluida.
30 min.

Terminado el
Separar el
Centrifugar cada tiempo agregar a
sobrenadante de
tubo cada tubo 2.5 ml.
todos los tubos
de ATC al 10 %

Reactivos Tubos 1-8 Blanco

Determinar el Sobrenadante (tubos 1-8) (ml) 1 -
contenido de fosfato Solución Molibdato de amonio (ml) 0.5 0.5
liberado como se indica: Ácido amino naftol sulfónico (ml) 0.25 0.25
Agua destilada (ml) 3.25 4.25

Agitar bien y dejar en la oscuridad por

Leer al espectrofotómetro a 660 nm.
10 min.