Ingeniería ambiental

Microbiología
Profesor: M.I. Jesús Miguel Castro Montoya
Practica no. 2: “Clasificación, diseño,
preparación y esterilización de medios de
cultivo”.
Entrega: 17/02/2017
Alumnos:
 Alvarado Chávez Miriam Mabel,
 Alvidrez Flores María Fernanda,
 Gaxiola Landeros Dariel Adrián,
 Pacheco Plata José Andrés,
 Regueira Llanes Jesús Humberto.

Procedimiento

Preparación de medios de cultivos líquidos

 desinfecte el área de trabajo con fenol al 5% o benzal al 10%.
 realice cálculos para preparar 3 tubos con caldo nutritivo, pese la cantidad
exacta del medio deshidratado considerado un volumen de 5 ml en cada
tubo.
 cierre inmediatamente el envase del medio.
 utilice una probeta de 10 ml y mida el volumen de agua destilada requerida
para la preparación del medio y viértala en un matraz erlen Meyer.
 el medio líquido no requiere de calentamiento para disolver sus
componentes, solo el agar-agar.
 distribuya 5 ml de medio de cultivo en cada uno de los 3 tubos.
 coloque los tubos en un vaso de precipitado cubra en papel metálico y
esterilice por calor húmedo en autoclave a 121 oc por 15 min.
Preparación de cultivos semisólidos

 Calcular para preparar 3 tubos de medio sim tomando en cuenta 5 ml

por cada tubo.
 cierre inmediatamente el envase del medio.
 utilice una probeta de 10 ml y mida el volumen de agua destilada
requerida para la preparación del medio y viértala en un matraz erlen
Meyer.
 esterilice e inocule el medio de cultivo (medio sim).
 incube el cultivo a medio de la temperatura adecuada y tiempo
necesario para su desarrollo.

Preparación de medios de cultivo sólido y semisólido en tubo inclinado

 realice cálculos para preparar 3 tubos con agar nutritivo considerando un

volumen de 5 ml por tubo y 3 cajas Petri de 15 ml cada una.
 utilice una probeta de 10 ml y mida el volumen de agua destilada requerida
para la preparación del medio y viértalo en un matraz erlen Meyer.
 caliente el medio de cultivo hasta ebullición utilizando un soporte y un
mechero.
 después de la ebullición verter 5 ml de agar en cada tubo y 15 ml en las
cajas Petri.
 esterilice a calor húmedo en autoclave a 1210c por 15 min.
Observaciones:

 Para preparar las muestras de semisólido y medios de cultivo líquidos, los

medios semisólidos necesitan estar al contacto con el calor para que estos
gelatinicen y se puedan realizar las muestras, mientras que los líquidos
pueden gelatinizar sin medio de calor. Cuando se termina de calentar las
muestras solidad y semisólidas se esterilizan en autoclave por 15 min a
121oc para utilizar en las siguientes prácticas.

Medio sim (semisólido):

30 gr---------1000ml
x---- 15ml = .45gr

Caldo
8 gr-------1000ML
x----------15ml = .12gr

Agar
23gr-----1000ml
X----------60ml=1.38gr
Conclusiones:
Evaluación

1.- ¿Cuándo se dice que un microorganismo requiere de un medio selectivo?

Cuando se requiere estudiar un tipo de microorganismo en específico.

2.- ¿Cuáles serían las implicaciones al verte el medio de cultivo muy caliente
en las placas de Petri?

Si se vierte el agar muy caliente se puede ocasionar una alta consideración lo que
podría matar muchos microorganismos

3.- ¿Qué es la utilidad de preparar medios de cultivo en forma de pico de

flauta?

Estos pueden usarse para cultivar e identificar células bacterianas. Es difícil

intentar identificas las bacterias desde una muestra grande ya que son pequeñas y
puede ser algo difíciles de encontrar. Sin embargo se coloca en un agar inclinado,
y estas se dividirán rápidamente y en horas abra producto suficiente que pueden
ser estudiadas

4.- ¿la composición del caldo nutritivo es extracto de carne y peptona en el

agua e PH 7 la composición del caldo adopta Mc. Conkey es peptona lactosa,
sales biliares, purpura de bromocresol cloruro de sodio de agua a PH7 ¿Cuál
es la función de cada uno de los componentes en cada medio?

El extracto de carne aporta sustancia nitrogenada como aminoácidos y no

nitrogenada como glucógeno. La peptona es la fuente de nitrógeno. El agua
estandariza su composición y asegura ausencia de iones Ca 2+ y Mg 2+. El
cloruro de sodio contribuye a equilibrar la presión osmótica del medio extracelular

5.- ¿Para un microorganismo quimioorganotrofo que componentes tendría

en cuenta para diseñar un medio de cultivo complejo o químicamente
indefinido que incluye?
-fuente de carbono pentosa

-fuente de nitrógeno peptonas

-fuente de energía proteínas (extracto de carne)

6 ¿Para un microorganismo foto autótrofo mencione que componentes

tendría en cuenta para diseñar un medio de cultivo químicamente definido o
sintético que incluye

-fuente de carbono C02

-fuente de energía

-fuente de nitrógeno

7- agar nutritivo

Extracto de carne ………….. .3g

Peptona de carne………………0.5g

NaCl …………………………….0.5g

Agar…………………………….1.5g

Agua destilada………………….100ml

Ph…………………………………….7

B1 ¿Que aporte realiza cada componente?

El extracto de carne aporta sustancias nitrogenadas como aminoácidos, la

peptona de carne aporta de nitrógeno Nicle contribuye a equilibrar la presión
osmótico del medio extracelular, el agar para detener el crecimiento de gérmenes
muy móviles, agua destilada estandariza su composición y asegura la ausencia de
iones Ca2+ y Mg2+ . El pH 7 es para que exista un medio neutro donde puede
desarrollarse los microorganismos si fuera más alto más bajo moriría

B2 ¿Qué componentes aportan los factores de crecimiento?

Aportan sustancias nitrogenadas como aminoácidos bases puricas y piramiditas,

ácidos orgánicos y sustancias no nitrogenadas como glucógeno. Fosfato de
hexosas, ácido láctico, sales inorgánicas, mezclas de aminoácidos y péptidos y
carbohidratos
¿Cuál es la fuente de energía en el medio de cultivo?

El extracto de carne

Clasifique este medio por su consistencia, origen y composición

Es la composición compleja consistencia sólida y de origen medio común

¿Qué microorganismos- según fuente de Cy energía- crecerán en él?

Una gran clase de microorganismos quimioorganotrofo

8.- ¿características uno de los medios de cultivo que preparo considerando

los siguientes aspectos:

Medio de cultivo utilizado: agar método estándar

-cantidad preparada: 60 ml

- cantidad pesada: 1.38gr

SIM
30 gr---------1000ml
x---- 15ml = .45gr

Caldo
8 gr-------1000ML
x----------15ml = .12gr

agar
23gr-----1000ml

x----------60ml=1.38gr

-pH inicial pH final

-consistencia: solida

-tipo de medio de cultivo según la naturaleza de sus componentes:

Composición compleja
-tipo de medio de cultivo según el propósito de uso:

Medios comunes

-distribución: por medio de las cajas Petri

-condiciones de esterilidad: 121 grados Celsius a una presión menor de

15 libras en el auto clave

Condiciones de almacenamiento: refrigeración.