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INTEGRANTES (EQUIPO 6):

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA, FACULTAD DE CIENCIAS OTHÓN HIGUERA EMMANUEL


REYES TÉLLEZ JOSÉ CARLOS
QUÍMICAS, LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I

PRÁCTICA 5: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

¿El Pb y 𝐶𝑁 − inhiben la actividad de la enzima Catalasa?

2.La pérdida de actividad de una enzima se puede lograr por desnaturalización, ya que se trata de una Tejido Manzana

INTRODUCCIÓN
¿Qué son las enzimas? Son proteínas globulares responsables de la mayor parte de la actividad química de los
organismos vivos. Actúan como catalizadores, que son sustancias que aceleran las reacciones químicas sin ser
destruidas o alteradas durante el proceso (a menos que estén contacto con un inhibidor). Las enzimas son
proteína y por lo tanto le afectan pH, temperatura, agitación vigorosa, por citar algunos agentes. Otra
forma de hacer que la actividad de una enzima se pierda o disminuya es a través del uso de
INHIBIDORES.
No. De Tubo
Burbujeo
1
++
2
+
3
+++
4
++++
extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente. Una enzima puede catalizar miles
de.reacciones.en.cada.segundo.
¿Cuáles son sus características distintivas? Tejido Papa
La adición de plomo. La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhídrico-libres de las No. De Tubo 1 2 3 4
cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es
 Son proteínas. irreversible.
Burbujeo +++++ + +++ ++++
 Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones El ion cianuro se coordina muy fuertemente con el ion Fe (III). Esto hace que el ion Fe (III) no tenga la
celulares ocurren a una velocidad alrededor de un millón de veces más alta de lo que capacidad de reaccionar con el oxígeno extra del peróxido de hidrógeno, y entonces no cumpla su
serían en ausencia de enzimas. función. El cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición es
 La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada irreversible. El cianuro, Es una sustancia química de uso industrial, minero como agente acomplejante de Tejido Hígado pollo
conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un producto es catalizada por una iones metálicos, en la galvanoplastia de electrodeposición de zinc, oro, cobre y especialmente plata, y de No. De Tubo 1 2 3 4
enzima determinada. uso en la producción de plásticos de base acrílica. Burbujeo +++++ + +++ ++++
 Las acciones de muchas enzimas están reguladas de modo que pueden cambiar de un Temperatura: si suministramos energía en forma de calos en una reacción enzimática, al ser captada por
estado de baja actividad a uno de alta actividad, dependiendo de las condiciones las moléculas es transformada en energía cinética. De este modo aumenta el movimiento de las moléculas
celulares en las que se encuentren. y el número de encuentros intermoleculares. Así, el incremento de la temperatura aumenta la velocidad
de las reacciones químicas. Si la temperatura aumenta, la enzima pierde su estructura terciaria , se
desnaturaliza y deja de ser funcional . Existe una temperatura óptima para la cual la actividad enzimática
En 1960 se creó la Comisión Internacional de Enzimas quien propuso: es máxima. Si disminuye la temperatura, también disminuye la actividad, pero la enzima no se destruye,
➢ El uso de un nombre propio. y el proceso es reversible.
➢ El uso de un nombre descriptivo.
➢ El uso de un nombre sistemático.
➢ El uso de un número de clasificación.

NÚMERO DE CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS.


El número de clasificación de las enzimas consta de 4 dígitos separados por puntos. A . B . C . D.
FICHAS DE SEGURIDAD
El primer dígito es la CLASE. Indica el tipo de reacción. M -Manzana -Papa -Hígado de pollo
El segundo dígito es la SUBCLASE. Indica el sustrato.
El tercer dígito es la SUB SUB CLASE. Indica el cosustrato. Cianuro de Sodio
El cuarto dígito es el NÚMERO DE ORDEN. COMPOSICIÓN NaCN
PELIGROS No combustible, pero produce gas inflamable en contacto con agua o aire
húmedo. En caso de incendio se desprenden humos ( o gases ) tóxicos e
La comisión internacional de las enzimas ha clasificado a las enzimas en 6 clases que son: irritantes
MEDIDAS
PREVENTIVAS
No utilizar agua, no utilizar dióxido de carbono. En caso de incendio en el
entorno, espuma y polvo DISCUSIÓN
Como vemos en los resultados, los tejidos de manzana, papa e hígado, sin hervir ni agregar
Nitrato de Plomo soluciones solamente el puro peróxido mostró mayor liberación de O2, esto demuestra que
COMPOSICIÓN Pb(NO3)2 la catalasa cumple su función o su actividad enzimática ya que las enzimas no habían sufrido
PELIGROS No combustible pero facilita la combustión de otras sustancias. Tos, dolor de desnaturalización debido a que no hubo un cambio de temperatura no sus condiciones de
garganta, enrojecimiento y dolor en los ojos piel y dolo abdominal
PH,
MEDIDAS
PREVENTIVAS No poner en contacto con otras sustancias inflamables, en caso de incendio En los tejidos con de las 3 muestras con las soluciones de NaCN al 5% disminuyeron su
en el entorno: agua pulverizada. Ventilación o protección respiratoria actividad enzimática por la acción del CN- formando quelatos con el cofactor de catalasa,
ya que es un inhibidor.
Factores que afectan la actividad enzimática: La pérdida de actividad de una enzima se puede lograr por
Los tejidos con las 3 muestras con las soluciones de PbNO3 al 5% mostraron poca liberación
desnaturalización, ya que se trata de una proteína y por lo tanto le afectan pH, temperatura, agitación vigorosa, Peróxido de Hidrogeno de O2 por el Pb- que actúa sobre los grupos SH de las enzimas.
por citar algunos agentes. Las enzimas presentan un comportamiento diferente frente a los cambios de pH COMPOSICIÓN H2o2 Por último, en los tejidos hervidos sin soluciones no tuvieron liberación de O2 ya que la
dependiendo del comportamiento ácido-base de la enzima y el sustrato. Estos comportamientos pueden PELIGROS Ardor en la garganta, tos. posible paro respiratorio y edema pulmonar. Muy enzima sufrió una desnaturalización por el cambio de la temperatura elevada al momento
explicarse por: …………………………………………………..’’9999999999999999999999999999999999999999999999999 corrosivo, ardor en la garganta, dolor de pecho, vomito, hemorragias ,
1. Una alteración de la carga neta de la proteína que repercute en la solubilidad.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
de ponerlo en ebullición por lo que ya no existe una reacción al adicionar el peróxido.
blancamiento de piel , picazón . efectos crónicos: dermatitis, efectos
2. Alteración de la conformación de la proteína al afectar los niveles 3º y/o 4º lo cual repercute en una mayor o mutágenos
En el tejido uno de la manzana en el tubo uno se observo zx
menor actividad.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿ MEDIDAS Trasladar al aire fresco, si no respira administrar respiración artificial. lavar la
3. Un efecto del pH sobre el sustrato.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿ PREVENTIVAS boca con abundante agua, no inducir al vomito, en caso de piel y ojos lavar
4. Una combinación de los efectos anteriores.’’’’’’¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿ con abundante agua durante 15 minutos . Buscar atención medica
Efecto de la concentración. La velocidad maxima se presenta debido a la ocupación del sitio activo de todas las
enzimas presentes es decir se han saturado los sitios activos. Otra forma de hacer que la actividad de una enzima
se pierda o disminuya es a través del uso de inhibidores.
Agua destilada
Inhibidores: Una forma de hacer que la actividad de una enzima se pierda o disminuya es a través del uso de COMPOSICIÓN H2O
inhibidores. Los inhibidores producen disminución en la actividad enzimática, a través de interacciones con el PELIGROS Reducción del nivel de electrolitos, irritación en individuos alérgicos, mareos,
centro..activo. vómito
Reversible:.Los.inhibidores.se.unen.en.forma.no.covalente. MEDIDAS Lavar con agua
Irreversible:.Los.inhibidores.se.unen.en.forma.covalente. PREVENTIVAS
Dependendiendo.de.la.cantidad.de.enzima.o.inhibidor.la.inhibición.puede.ser.
Total:.La.concentración.de.inhibidor.es.igual.o.mayor.que.la.enzima.
Parcial: La concentración es menor que la enzima. CONCLUSIÓN
Tipos de inhibición reversibles:
Competitiva: Las sustancias que se comportan como inhibidores competitivos, suelen tener una estructura
OBJETIVOS
semejante a la del sustrato.
Acompetitiva: El inhibidor solo se une al complejo enzima-sustrato, y no a la enzima libre.  El estudiante observará la actividad de la enzima Catalasa utilizando diferentes Se concluye que el cianuro y el plomo si inhiben la activad enzimática de la catalasa. En el
No competitiva: La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento de la velocidad de reacción, caso del plomo se relaciona con los grupos SH y en el caso del cianuro con los grupos HEM.
pero no hasta el grado notado en las reacciones sin inhibir.
fuentes biológicas.
Esto se debe al proceso de desnaturalización que se da por el aumento de la temperatura
 El alumno comparará el efecto de la temperatura en algunos inhibidores como
perdiendo su actividad enzimática y por lo tanto ya no cumple su función.
Catalasa: La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios. Cataliza el Pb y el 𝐶𝑁 − sobre la actividad enzimática de la Catalasa.
la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría de estas enzimas son
homotetrámeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la estructura de nueve catalasas.
Algunas catalasas tienen subunidades pequeñas (masa molecular ≈ 60 kDa) y otras grandes (masa molecular >
80 kDa). Se han identificado tres grupos de catalasas: i) las catalasas monofuncionales, que contienen hemo y
están presentes tanto en los organismos procariotos como en los eucariotos, ii) las Mn-catalasas, que son
MATERIALES Y REACTIVOS
enzimas hexaméricas que no tienen hemo, tienen Mn en el sitio activo y sólo están presentes en algunos
MATERIALES:

CUESTIONARIO
organismos procariotos anaerobios y iii) las catalasas-peroxidasas, que tienen actividad de catalasa y de
peroxidasa, contienen hemo y sólo están presentes en las bacterias y los hongos. REACTIVOS:
- Papa, hígado de pollo, manzana -Pinzas
-Papel adsorbente -14 tubos ensaye
-1 gradilla -Baño María -H2O destilada -H2O2
-Pipeta -Cuchillo
-2 goteros 1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
-NaCN 5% -Pb(NO3)2 5% Las enzimas sufrirán un proceso de desnaturalización ya que como lo vimos en la práctica
Catalasa a nivel estructural: Es un tetrámero de cuatro cadenas polipeptidicas, cada una larga cadena con 500
aminoácidos. contiene cuatro grupos hemo porfirinicos (hierro) que llevan a la enzima a reaccionar con el
anterior, estas son proteínas y debido al cambio de temperatura, en este caso muy elevada,
peroxido de hidrógeno. El pH óptimo para la catalasa es aproximadamente de 7, la temperatura varia por la enzima perderá su estructura terciaria , desnaturalizando a su vez su sitio activo y así
especie. El centro activo de la catalasa es una proteína hemo denominada citrocromos. El hemo de la catalasa
es un complejo de hierro y porfirina de alto giro de protoporfirina lX. La protoporfirina es una nomenclatura
alternativa para el grupo hemo de la catalasa; define sus propiedades químicas.
DIAGRAMA DE DESARROLLO perder su función. Esto se demuestra agregando en el hígado de pollo hervido, debido a
que se aumentó su temperatura no se observó burbujeo cuando el peróxido se agregó.
2. ¿Qué es el factor Q-10?
Es un parámetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura.
Es la medida de la tasa de variación de sistemas químicos o biológicos como consecuencia
del incremento de 10 °C de la temperatura. Asimismo es la relación entre la velocidad de
Corte en trozos delgados,
Prepare una serie de tubos Tubo 3: tejido sin hervir
la reacción enzimática a una temperatura dada y la velocidad de la misma reacción ante
cada tejido disponible y un cambio el temperatura.
para cada tejido como se más 5 gotas de NaCN más
póngalo sobre el papel
adsorbente.
indica. 2 mL de H2O2 3. Escribe el complejo que se forma con el Fe y el 𝑪𝑵− .
Tanto el ion ferroso como el férrico forman un complejo con seis iones de 𝐶𝑁 − y estos son
denominados ferrocianuro, es un complejo octaédrico. La diferencia radica en el complejo
de hierro II (ferroso) debido a su capacidad de tener un electro más que el hierro III (férrico).
De cada tejido separe una
porción y póngala en tubo Tubo 4: tejido sin hervir
FUNDAMENTO y cúbrala con H2O
destilada, introdúzcala en
Tubo 1: tejido sin hervir
más 2 mL de H2O2.
más 5 gotas de Pb(NO3)2
más 2 mL de H2O2.
agua hirviendo por 5 min.
1.- La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del
peróxido del hidrogeno(H2O2) en oxígeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.
El peróxido de hidrogeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene, entre otras, una
función protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe Mezcle bien, mrque con
Coloque estas porciones
cruces de 1 a 5 según
transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos La catalasa entra dentro de las enzimas oxido-reductasas, sobre papel adsorbente Tubo 2: tejido hervido más
aprecie la intensidad de
que cataliza la transferencia de electrones. La reacción que lleva a cabo con el H 2O2 es la siguiente. Donde Fe-E indicando que están 2mL de H2O2.
burbujeo en cada serie de
representa el núcleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actúan como cofactores. hervidas.
tubos.

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