UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 2
SEGUNDO PARCIAL
M.SC. CELESTE CARRILLO
ANGELA NARVAEZ ALCIVAR
6TO SEMESTRE “3-B

V.CHOLERAE V. PARAHEMOLITICO V. VULNIFICUS

PRUEBAS BIOQUIMICAS:
 OXIDASA .-
Prueba utilizada para la detección de la enzima
citocromo-c-oxidasa, presente en los géneros
Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio,
Aeromonas, entre otros.
Fundamento:
Los discos contienen oxalato de dimetil-para-fenilendiamina, el cual es el sustrato de la enzima
oxidasa. Los microorganismos que producen la enzima oxidasa se evidencian porque en
presencia de oxígeno atmosférico y citocromo c, se oxida el sustrato presente en los discos a un
compuesto de color rojo-fucsia.
Metodología:
Siembra:
- En tubo: a partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 0.2 ml de agua destilada
estéril, y agregar un disco de OX.
- En portaobjetos: humedecer el disco de OX con una gota de agua y luego colocar sobre él la
colonia en estudio.
(ésta metodología se realiza cuando se tiene escaso número disponible de colonias en estudio).
Incubación:
Generalmente dentro del minuto, y a temperatura ambiente se detectan los resultados positivos.
Una reacción lenta, pasado los 2 minutos, debe considerarse negativa.
Resultados:
Positivo: observación de color rojo-fucsia en el disco y/o solución.
Negativo: el disco permanece sin cambio de color.

V. cholerae, V.parahemolitico y V. vulnificus presenta una reacción positiva

V: metschnikovil y V. gazogenes son oxidasa (-)
Limitaciones:
- La prueba debe realizarse utilizando cultivos frescos (18-24 horas), y que no provengan de
medios con azúcares con pH ácido.
- No usar ansas de nichrome (sólo si son nuevas) por riesgos de obtener resultados falsos
positivos provenientes del metal reducido. Se recomienda utilizar una varilla de vidrio, plástico o
madera (Britanialab, s.f)
 ARGININA DIHIDROLASA, ORNITINA DESCATBOXILASA, LISINA
DESCARBOXILASA. -
Moeller Medio Decarboxilasa Base:
Medio base, que al ser suplementado con lisína, arginina u ornitina, es útil para la diferenciación
de bacilos Gram negativos, basándose en la producción de lisina decarboxilasa, argina
dehidrolasa y ornitina decarboxilasa respectivamente.
Fundamento:
En 1955, Moeller introdujo este medio de cultivo, para evaluar la producción de lisina y ornitina
decarboxilasa y de arginina dehidrolasa. Estas pruebas, junto a otros test bioquímicos, permiten
diferenciar a las Enterobacterias y otros bacilos Gram negativos tales como Aeromonas,
Plesiomonas y Vibrio spp. La producción de ornitina decarboxilasa, es una prueba clave para
diferenciar el grupo Klebsiella-Enterobacter. Klebsiella spp. es inmóvil y no produce ornitina
decarboxilasa, mientras que Enterobacter es móvil, y excepto E. agglomerans, generalmente
produce esta enzima.
En el medio base de Moeller, la peptona y el extracto de carne suministran la fuente de carbono
y nitrógeno necesarias para el crecimiento bacteriano. El piridoxal actúa como coenzima en la
decarboxilación de los aminoácidos. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. El púrpura
de bromocresol y el rojo de cresol son indicadores del pH.
Los aminoácidos lisina, ornitina y arginina, se agregan al medio basal, en concentración final al
1% (L-aminoácidos), o al 2% (DL-aminoácidos) para detectar la producción de enzimas
específicas para estos sustratos.
Cuando el medio se inocula con una bacteria capaz de fermentar glucosa, se produce ácido que
disminuye el pH y cambia el color del medio del púrpura al amarillo. La condición ácida estimula
la actividad decarboxilasa. Si el organismo produce la enzima apropiada, es degradado el
aminoácido a su correspondiente amina. Por decarboxilación de lisina, se produce cadaverina,
mientras que la decarboxilación de ornitina forma putrescina. La arginina es hidrolizada a ornitina
y luego es decarboxilada a putrescina.
La presencia de estas aminas, eleva el pH del medio, cambiando el color del indicador del
amarillo al púrpura o violeta.
Si el organismo en estudio, no produce la enzima decarboxilasa o dehidrolasa, el medio
permanece ácido (amarillo) por fermentación de la glucosa.

Siembra:
A partir de un cultivo puro de 24 horas, inocular el caldo suplementado con uno de los tres
aminoácidos, distribuyendo la siembra a través del medio (Tubo Prueba). Cada cepa aislada,
además debe ser sembrada en paralelo, en un tubo de medio basal que no contiene aminoácidos
(Tubo Control).
Agregar a todos los tubos, 1 ml de aceite mineral.
Incubación:
Incubar los tubos con las tapas flojas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Examinar, para evaluar crecimiento y reacciones de decarboxilación, a las 24-48-72 y 96 horas.
Resultados:
El medio se torna amarillo inicialmente si la glucosa es fermentada, y luego gradualmente se
torna púrpura si la actividad decarboxilasa o dehidrolasa ocurre y se eleva el pH del medio.
Para cada microorganismo en estudio, comparar el color presente en los tubos con medio
conteniendo los respectivos aminoácidos (Tubos Prueba), con el color presente en el tubo
control.
Para cada microorganismo y para cada aminoácido en estudio:
1-Resultado positivo:
-Tubo prueba: color púrpura o violeta.
-Tubo control: color amarillo.
2-Resultado negativo:
-Tubo prueba y tubo control: color amarillo.
3-Resultado inválido:
-Tubo control púrpura o violeta.
V. cholerae, V.parahemolitico y V. vulnificus presenta una reacción positiva
Limitaciones:
-Un color gris puede indicar reducción del indicador más que la formación de productos finales
alcalinos.
-Para obtener las reacciones apropiadas, los tubos inoculados deben protegerse del aire con una
capa de aceite mineral. La exposición al aire puede causar alcalinización en la superficie del
medio, lo que originaría que un organismo decarboxilasa negativo de resultado falso positivo.
Características del medio:
Medio preparado: púrpura (Britanialab, s.f)
BIBLIOGRAFIA:
Britanialab. (s.f). Obtenido de http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b12/oxidasa.htm
Britanialab. (s.f). Obtenido de
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/moellermediodecbase.htm