Espectroscopia Raman:

Carbohidratos
Hernández Juárez Brandon Adrián
López de la Cruz Mario Alberto
Universidad Nacional Autónoma de México
Laboratorio Universitario de Caracterización Espectroscópica
Instituto de Ciencias Aplicadas y Tecnologı́a
(Dated: May 23, 2018)

I. OBJETIVOS de fı́sica en 1930. Inspirado en trabajo realizados ante-

• Adquirir conocimientos básicos de la espectroscopia
Raman ası́ como conocer las diferentes variables ex-
perimentales y su efecto sobre una muestra.
• Caracterizar e identificar modos vibracionales de
5 carbohidratos diferentes mediante espectroscopia
Raman.
riormente por Rayleigh demostró, mediante un sencillo
experimento, que el color azul del mar procedı́a de un
fenómeno propio, posteriormente explicado como la dis-
persión de la luz debido a su interacción con las moléculas
del agua.
A. Descripción

II. RESUMEN El análisis mediante espectroscopia Raman se basa en

En el presente trabajo se analizan los espectros de 5
carbohidratos distintos obtenidos mediante los equipos:
Raman dispersivo AlmegaXR, Thermo-Nicolet y Raman
Dispersivo TriVista 557 usando un laser con longitudes
de onda de 532, 633 y 785 nm con aumentos de x10 y
x100 con el fin de especificar los modos vibracionales que
contribuyen a cada pico de absorción.
III. INTRODUCCIÓN
La espectroscopia Raman es una técnica fotónica de
alta resolución que proporciona información quı́mica y es-
tructural de cualquier material o compuesto orgánico y/o
inorgánico permitiendo ası́ su identificación. El análisis
mediante espectroscopia Raman se basa en el examen de
luz dispersada por un material al incidir sobre él un haz
de luz monocromático. Una pequeña porción de la luz
es dispersada inelástica experimentando ligeros cambios
de frecuencia que son caracterı́sticos del material anal-
izado e independientes de la frecuencia de la luz inci-
dente. Se trata de una técnica de análisis que se realiza
directamente sobre el material a analizar sin necesitar
éste ningún tipo de preparación especial y que no con-
lleva ninguna alteración de la superficie sobre la que se
realiza el análisis, es decir, es no destructiva.
IV. MARCO TEÓRICO
El fenómeno conocido como efecto Raman fue descrito
por el fı́sico indio Chandrasekhara Raman en el año de
1928, lo que le supuso la obtención del premio Nobel
hacer incidir un haz de luz monocromática de frecuencia
ν0 sobre una muestra cuyas caracterı́sticas moleculares
se desean determinar, y examinar la luz dispersada por
dicha muestra. La mayor parte de la luz dispersada
presenta la misma frecuencia que la luz incidente
pero una fracción muy pequeña presenta un cambio
frecuencial, resultado de la interacción de la luz con la
materia. La luz que mantiene la misma frecuencia ν0
que la luz incidente se conoce como dispersión Rayleigh
y no aporta ninguna información sobre la composición
de la muestra analizada. La luz dispersada que presenta
frecuencias distintas a la de la radiación incidente, es
la que proporciona información sobre la composición
molecular de la muestra y es la que se conoce como
dispersión Raman. Las nuevas frecuencias, +νr y
-νr , son las frecuencias Raman, caracterı́sticas de la
naturaleza quı́mica y el estado fı́sico de la muestra e
independientes de la radiación incidente.
Las variaciones de frecuencia observadas en el
fenómeno de dispersión Raman, son equivalentes a
variaciones de energı́a. Los iones y átomos enlazados
quı́micamente para formar moléculas y redes cristalinas,
están sometidos a constantes movimientos vibracionales
y rotacionales; estas oscilaciones se realizan a fre-
cuencias bien determinadas en función de la masa de
las partı́culas que intervienen y del comportamiento
dinámico de los enlaces existentes. A cada uno de los
movimientos vibracionales y rotacionales de la molécula
le corresponderá un valor determinado de la energı́a
molecular. Un diagrama energético en el que cada
estado de energı́a se representa por una lı́nea horizontal
se muestra en la figura 1.
Cuando los fotones del haz de luz incidente, con

FIG. 1. Diagrama energético para diferentes interacciones
luz-materia
energı́a hν0 (donde h es la constante de Plank) mucho
mayor a la diferencia de energı́a entre dos niveles
vibracionales (o rotacionales) de la molécula, chocan
con ella, la mayor parte la atraviesan pero una pequeña
fracción son dispersados (del orden de 1 fotón dispersado
por cada 1011 incidentes). Esta dispersión puede ser
interpretada como el proceso siguiente: el fotón incidente
lleva a la molécula transitoriamente a un nivel de energı́a
vibracional (o rotacional) superior no permitido, el cual
abandona rápidamente para pasar a uno de los niveles
de energı́a permitidos emitiendo un fotón; la frecuencia
a la cual es liberado este fotón dependerá del salto
energético realizado por la molécula.
Pueden distinguirse los siguientes casos:
• Si el resultado de la interacción fotón-molécula es
un fotón dispersado a la misma frecuencia que el
fotón incidente, se dice que el choque es elástico ya
que ni el fotón ni la molécula sufren variaciones en
su estado energético; la molécula vuelve al mismo
nivel de energı́a que tenı́a antes del choque y el
fotón dispersado tiene la misma frecuencia ν0 que
el incidente, dando lugar a la dispersión Rayleigh.
• Si el resultado de la interacción fotón-molécula es
un fotón dispersado a una frecuencia distinta de la
incidente, se dice que el choque es inelástico (ex-
iste transferencia de energı́a entre la molécula y el
fotón); en este caso pueden darse dos fenómenos:
– Si el fotón dispersado tiene una frecuencia
menor a la del incidente, se produce una trans-
ferencia de energı́a del fotón a la molécula que,
después de saltar al estado de energı́a no per-
mitido, vuelve a uno permitido mayor al que
tenı́a inicialmente; el fotón es dispersado con
frecuencia ν0 − νr y se produce la dispersión
Raman Stokes.
– Si el fotón dispersado tiene una frecuencia
mayor a la del incidente, se produce una trans-
ferencia de energı́a de la molécula al fotón;
esto significa que la molécula, inicialmente
antes del choque no se encontraba en su es-
tado vibracional fundamental sino en uno de
mayor energı́a y después del choque pasa a
2
este estado; el fotón es dispersado con frecuen-
cia ν0 + νr y se produce la dispersión Raman
anti-Stokes.
Cada material tendrá un conjunto de valores νr carac-
terı́sticos de su estructura poliatómica y de la naturaleza
de los enlaces quı́micos que la forman. El espectro Ra-
man recoge estos fenómenos representando la intensidad
óptica dispersada en función del número de onda normal-
izado al que se produce.
B. Ruidos en espectroscopia Raman
Uno de los problemas inherentes a la adquisición de
cualquier señal es el ruido presente en la medida. En el
caso de la obtención de espectros Raman los ruidos más
habituales pueden ser clasificados en cinco grupos difer-
entes: ruido shot, ruido generado por la muestra, ruido
generado por la instrumentación, ruido computacional y
ruido generado por fuentes externas.
• Ruido shot: el ruido shot es el resultado de la nat-
uraleza aleatoria de la luz. Su intensidad es igual a
la raı́z cuadrada del número de fotones detectados.
Es una fuente de ruido inevitable en la medida de
espectros Raman.
• Ruido generado por la muestra: el ruido gener-
ado por la muestra incluye emisiones ópticas no de-
seadas y generadas por la propia muestra como es
el caso de la fluorescencia, fenómeno que se produce
si, al incidir un fotón sobre una molécula, éste es ab-
sorbido y la molécula pasa a un estado electrónico
excitado donde permanece unas decenas de nanose-
gundos, para saltar a o tro estado excitado pero
de menor energı́a, liberando un fotón de frecuencia
más baja que el incidente.
• Ruido generado por la instrumentación: depende
del diseño especı́fico de la instrumentación em-
pleada en el análisis. Este tipo de ruido incluye los
ruidos introducidos por el detector como el ruido
térmico, el ruido de lectura o la dependencia de la
eficiencia cuántica del detector con la longitud de
onda.
• Ruido computacional: este ruido se refiere al intro-
ducido en el proceso de digitalización de la señal de
salida del detector.
• Ruido generado por fuentes externas: este ruido
es el generado externamente al equipo Raman o
la muestra que se está analizando. Generalmente
está causado por alguna fuente de luz externa que
contamina la señal en algún punto del equipo de
medida aunque, si el equipo y el contenedor de la
muestra a medir están cuidadosamente diseñados,
deberı́an de ser inmunes a las radiaciones externas.
 3

C. Carbohidratos

Los carbohidratos son biomoléculas compuestas por

carbono, hidrógeno y oxı́geno, cuyas principales funciones
en los seres vivos son el brindar energı́a inmediata y es-
tructural [3]. En particular son de nuestro interés los
siguientes: FIG. 5. Molécula de α-Lactosa

• Fructosa, C6 H12 O6
• Galactosa C6 H12 O6
• Glucosa C6 H12 O6
• α-Lactosa C12 H22 O11
• Ribosa C5 H10 O5
FIG. 6. Molécula de Ribosa

láser (longitud de onda, 532 nm) y microscopio Olympus

FIG. 2. Molécula de Fructosa
BX51 mediante una muestra de Silicio. Posteriormente
se procedió a colocar las muestras de los carbohidratos
en el microscopio y tratar de focalizar el laser a fin de
obtener un espectro con menos ruido y picos de emisión
mas definidos. Esto se realizo 6 veces para cada muestra,
3 con un aumento de x10 y 3 con un aumento de x100.
En las figuras 8-12 se muestran los espectros de los
espectros mejor definidos.

El siguiente paso fue obtener de nueva cuenta los es-

FIG. 3. Molécula de Galactosa
pectros de los carbohidratos pero esta vez con el Equipo
Raman Dispersivo TriVista 557. Nuevamente se utilizó
una placa de Silicio para su calibración y posteriormente
se procedió a colocar las muestras en el microscopio para
obtener sus espectros. Cabe destacar que solo se obtuvo
una corrida completa por cada carbohidrato debido a
que este equipo al tener una resolución mayor requerı́a
de varios intervalos de longitudes de onda a fin de cubrir
el intervalo completo. Esto se realizó también con un
laser con longitud de onda de 785 nm y en el caso de la
Ribosa también con uno de 633 nm. En las figuras 14-18
se muestran los espectros del a un aumento de x10.

FIG. 4. Molécula de Glucosa

V. MÉTODO EXTERIMENTAL

Para empezar la adquisición de señales Raman se FIG. 7. Equipo Raman dispersivo AlmegaXR, Thermo-
calibró el Equipo Raman dispersivo Almega-XR con Nicolet
 4

FIG. 8. Espectro de la Fructosa

FIG. 13. Raman Dispersivo TriVista 557

FIG. 9. Espectro de la Galactosa

FIG. 14. Espectro de la Fructosa

FIG. 10. Espectro de la Glucosa

FIG. 11. Espectro de la α-Lactosa

FIG. 15. Espectro de la Galactosa

VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Para analizar los modos vibracionales correspondientes

a cada pico de absorción en el espectro se usó el libro de
la referencia [1], en el cual se utiliza la nomenclatura (en
ingles) de la tabla 1.
FIG. 12. Espectro de la Ribosa
 5

FIG. 19. Modos vibracionales

FIG. 16. Espectro de la Glucosa

Los resultados de este análisis se adjuntan en un docu-

mento anexo a este en un formato de tabla, que adjunta
la formula quı́mica de cada carbohidrato con el área de
interés del espectro y su correspondiente contribución en-
ergética dada por el modo vibracional.

VII. CONCLUSIONES
FIG. 17. Espectro de la α-Lactosa

Como hemos visto, los carbohidratos son moléculas

compuestas por solo 3 elementos: Carbono, Hidrogeno y
Oxigeno. En todas las gráficas es posible ver un pico de
absorción muy marcado entre los 2800-3000 nm con el
cual podemos caracterizar a los carbohidratos a través
de su espectro Raman.

Lo anterior se ve especialmente reflejado en las

primeras 3 gráficas correspondientes a la Fructosa,
Galactosa y Glucosa, pues podemos observar una
clara similitud entre ellas, hecho que es de esperarse
considerando que sus sı́mbolos quı́micos son iguales y
sus moléculas muy parecidas.
FIG. 18. Espectro de la Ribosa

Cabe destacar que en la mayorı́a de los espectros, la

TABLE I. Nomenclatura región comprendida entre 0-1500 nm presentaba bastante
Simbolo Significado
picos, según el libro [1] antes de los 900 nm no hay con-
asym asimetrica
br broad
tribuciones de alguno de nuestros elementos por lo segu-
def deformation ramente se trate de ruido. Esto se puede verificar con el
m medium espectro de la Glucosa que no lo presenta. Sin embargo,
p polarised encontramos una gran variedad de contribuciones en la
s strong región 1100-1500 nm a pesar de lo pequeños que son es-
sh sharp tos picos en comparación con el que ya se menciono, lo
str stretching cual nos hace pensar que los modos vibracionales CH,
sym symmetric CH2 y C-H stretching son los mas energéticos o los mas
w weak probables en los carbohidratos.
 6

[1] George Socrates, “Infrared and Raman Characteristic [2] Equipos utilizados Raman Luce:
Group Frequencies: Tables and Charts”, John Wiley and http://www.luce.ccadet.unam.mx/secciones/infcap/sub1/infra.html
Son, New York, 2001. [3] Alberts, Bruce (1992). Biologı́a molecular de la célula.
Omega. p. 46.