A medida que la industria petrolera crece continuamente y las tasas de consumo de combustibles

aumentan, los contaminantes derivados del petróleo bloquean el medio ambiente. Los
hidrocarburos, que son los componentes principales del petróleo (hasta 98%), consisten en
carbono e hidrógeno. Los hidrocarburos del petróleo difieren en su estructura y masa molecular.
Según su estructura, los hidrocarburos se dividen en varias clases: alcanos, cicloalcanos,
hidrocarburos aromáticos y alquenos. Una clase diferente de hidrocarburos polares son los
asfaltenos.

Si se produce un derrame de petróleo, las fracciones ligeras volátiles se evaporan, mientras que los
hidrocarburos de mayor masa molecular pueden permanecer en el medio ambiente durante un
largo período de tiempo. Como los hidrocarburos pesados tienen estructuras complejas, su
degradación puede ser prolongada e ineficaz. Los más problemáticos son hidrocarburos oleosos
poliaromáticos y ramificados (que tienen más de 28 átomos de carbono), alquitrán y asfaltenos.
Estos hidrocarburos en condiciones normales son

gruesas o duras, por lo tanto, casi no están disponibles para que los microorganismos que oxidan el
aceite se degraden. De hecho, los microbios oxidantes del petróleo, que pueden degradar los
hidrocarburos pesados, han sido poco investigados.

La degradación biológica de hidrocarburos es un complejo proceso complicado influenciado por la

naturaleza de los hidrocarburos, las condiciones ambientales y por los propios microorganismos
Claude E. ZoBell fue una de las primeras investigaciones, que en 1946 informó que la mayoría de
los microorganismos encontrados en la naturaleza podían usar hidrocarburos como la única fuente
de carbono y energía para su reproducción y crecimiento [9]. La mayoría de los microorganismos
que degradan los hidrocarburos son bacterias [7]. Por ejemplo, se sabe que las bacterias que
pertenecen a Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococus, Nacardia, Vibrio,
Acinetobacter, Bacillus, Corynebacterium, Flovabacterium genus degradan los hidrocarburos. Otros
investigadores han informado que la cantidad de microbios que oxidan el petróleo aumenta
cuando su ambiente está contaminado con hidrocarburos. El crecimiento de microorganismos
oxidantes del petróleo y la duración de la degradación biológica dependen de muchos factores
ambientales. Los principales factores que determinan la efectividad de la degradación son:
composición de la mezcla de hidrocarburos, propiedades físicas, temperatura, disponibilidad de
nutrientes, pH, microorganismos.

El proceso de degradación de la fracción de petróleo pesado, cuando se crean hidrocarburos de

cadena corta, se denomina craqueo. En los últimos años se introdujo una alternativa al craqueo
químico y térmico, que utiliza procesos biológicos, llamados bio-cracking. Algunos laboratorios han
comenzado
experimentos en 2009 con bacterias Achromobacter, Leptospirillum, Pseudomonas, Sulfolobus y
Thiobacillus sp para utilizarlas en el bio-cracking [18]. Si las investigaciones tuvieran éxito y se
creara tecnología de biocraqueo, sería ecológica y eficaz para extraer fracciones más ligeras de
hidrocarburos del inútil petróleo crudo pesado. El objetivo de este trabajo fue seleccionar
microbios y evaluar las condiciones que inducen el bio-cracking del hidrocarbono ramificado -
escualano.

Materiales y métodos
Hidrocarburos ramificados pesados. El escualano de hidrocarburo ramificado pesado (C30H62) se
seleccionó como sustrato.

Microorganismos. Las siguientes cepas de bacterias degradantes de hidrocarburos que a Se utilizó

el género Arthrobacter: sp

Medios de comunicación. Se usó agar nutriente (Oxoid, Basingstoke, RU) para sembrar cepas
microbianas, y caldo nutriente (Oxoid, Basingstoke, Reino Unido) se utilizó para la subcultura y el
precultivo de la son. Para investigar la capacidad de las cepas para degradar el escualano, se utilizó
un medio mineral usado. El medio mineral tenía la siguiente composición

Biodegradación de escualano. La capacidad de las cepas para degradar el escualano se investigó en

una medio mineral. El cultivo se llevó a cabo en condiciones estériles en matraces Escualeno de
hidrocarburo ramificado pesado (C30H62) se usó como sustrato, cuya concentración fue de 0.2 g /
l. Después de la inoculación con 10% de volumen, los matraces blancos fueron 33incubados en un
agitador rotatorio a 30 ºC y 200 rpm. Las mismas condiciones de cultivo fueron

aplicado para la prueba de la correlación entre la intensidad de la degradación del escualano, la

temperatura, pH medio y concentración de escualano. La dependencia de la degradación de
escualano sobre el pH medio se investigó a valores de pH de: 4; 5; 6; 7; 8; 9.

La dependencia de la degradación de escualano sobre la temperatura se estimó en 5; 20; 30; 40;

45 ° C; y la dependencia de la concentración se investigó con 0.025; 0.2; 1; 2; 3.5; 5 mg / ml de
escualano. Después de 48 h de incubación, los cultivos se extrajeron con el mismo volumen de
tetraclorometano para Espectroscopía IR o hexano para GC

Espectroscopia infrarroja de escualano. Las muestras se cuantificaron por el analizador de petróleo

AN-1 en 1 / λ = 2930 cm-1 longitud de onda. La absorción IR es directamente proporcional a la
concentración de hidrocarburos.

Análisis GC de escualano. Las muestras se cuantificaron por GC (GC-2010 Plus, Shimadzu, Japón)
equipado con un detector de ionización de llama y columna capilar MXT-1 (tratado con Siltek acero
inoxidable). Las condiciones de operación fueron las siguientes: se usó nitrógeno como gas
portador; la temperatura del inyector y la temperatura del detector fueron de 330 y 350 ° C,
respectivamente; en la temperatura del horno de columna se mantuvo a 40 ° C durante 1 minuto y
luego se elevó a 320 ° C a una velocidad de 10 ° C min-1` Medición de biomasa El crecimiento
bacteriano se midió como densidad óptica (DO) a 600 nm (con spertrophotometer (UV 1601
Shimadzu).

Resultados

El hidrocarburo ramificado pesado usado para experimentos - escualano, es un poco degradable

sustrato. Se sabe desde nuestra investigación previa que la especie Arthrobacter degrada el
petróleo hidrocarburos, por lo tanto, hemos elegido las siguientes cepas de Arthrobacter sp

Los resultados de la Fig. 1 muestran que la mayor degradación del escualano se produjo con la
cepa Arthrobacter sp NJ5, que se eligió para los experimentos posteriores. Se sabe que el
crecimiento de la biomasa bacteriana y la efectividad de la degradación del sustrato dependen de
la edad del inóculo Por lo general, los microorganismos se toman para la degradación biológica,
cuando están en su fase de crecimiento exponencial, y cuando sus procesos de reproducción están
en su punto máximo [2]. Por lo tanto, después de la selección de la mejor cepa bacteriana
degradante escualano, la correlación entre se investigó la edad del inóculo y la degradación del
escualano (Fig. 2). Se llevaron a cabo experimentos para determinar la influencia de diferentes
fases celulares (exponencial y estacionario) en los niveles de degradación de escualano.

El nivel de degradación del sustrato depende del tiempo de crecimiento del inóculo. El mejor
escualano la degradación (54.5%) ocurrió cuando el sustrato fue inoculado con inóculo de 18 horas
de edad, que estaba en su fase estacionaria. Después de eso, el efecto del pH del medio inicial, la
temperatura y la concentración de sustrato de degradación de escualano con Arthrobacter sp Se
investigaron 10 cepas de Arthrobacter, y una de ellas - SP NJ5 mostró los mejores resultados en la
actividad de degradación de escualano de hidrocarburo ramificado pesado. El sustrato más alto
nivel de degradación (54.5%) fue alcanzado usando un cultivo de inoculación de 18 horas de edad,
que estaba en fase de crecimiento estacionario. La mejor degradación de escualeno (58.3%) se
produjo utilizando Cepa Atrhrobacter sp NJ5 cuando el pH del medio inicial fue 7.0. Lo que es más,
cuando el la concentración inicial de escualano fue de 2.0 mg / ml, el nivel más alto de degradación
del sustrato (67.7%)fue alcanzado. También se determinó que la temperatura óptima de
degradación del escualano es 35ºC. Por lo tanto, la cepa Arthrobacter sp NJ5 seleccionada se
puede utilizar para el entorno biológico remediación de fracciones de hidrocarburos de petróleo
pesado. Como la cepa Arthrobacter sp NJ5 seleccionada es eficaz para degradar los hidrocarburos
ramificados pesados en compuestos más pequeños (67%), y puede ser usado en bio craqueo. Sin
embargo, para el futuro empleo en la industria, más se necesita una investigación detallada.

Proceso de Bio cracking

El uso del consorcio microbiano para digerir borras de destilación primaria, es esencialmente un
proceso de bio cracking, donde los hidrocarburos pesados son sujeto de la acción del consorcio,
que se encarga de reclamar su carga energética residual mediante acción enzimática compleja.

La explicación cualitativa de la ocurrencia probable de lo arriba descrito viene a ser la prueba de

combustión del fluido obtenido, hecho que explica la digestión del material sólido por parte de los
micro organismos, dicho de otro modo, ocurre el biocracking en frío

Introducción

tratamiento de residuos de destilación primaria de hidrocarburos, mediante el estudio a escala real

y de laboratorio de tratamientos enfocados a mejorar la degradación de borras de destilados de
petróleo, para lo cual se utilizó un consorcio de microorganismo, donde destacan los géneros de
Pseudomonas y Desulfovibrio, además de Achromobacter, Micrococcus, Acinetobacter,
Brevibacterium, Corynebacterium, Bacillus, en menor porcentaje. El uso de estos agentes
asociados en el caldo de cultivo constituido por el residual de la destilación primaria, es muy
promisorio y sienta sólidas bases para su utilización en procesos de biorremediación en suelos y
aguas contaminadas con petróleo.