PROCESAMIENTO

SILANIZACIÓN DE PORTAOBJETOS

LAVAR PORTAOBJETOS CON MEZCLA ALCOHOL 70°: ÁCIDO CLORHÍDRICO 1%

SECAR CON SECADOR DE PELO

PASAR POR ACETONA 5 MINUTOS

PASAR POR SOLUCIÓN DE SILANO 2% EN ACETONA POR 2 MINUTOS

PASAR 1 MINUTO POR ACETONA

SECAR CON SECADOR DE PELO

SECADO EN ESTUFA A 60° 2 HRS

SECADO A TEMPERATURA AMBIENTE EN CAJAS PORTAMUESTRAS POR 24 HRS

FIJACIÓN: FORMALDEHÍDO P.A. 37% EN SOLUCIÓN FORMALINA*

*FORMALINA 10% TAMPONADA** EN PBS 0.1 M PH 7.2-7.4; **TAMPON FOSFATO SALINO

HISTOPROCESAMIENTO I:

FIJACIÓN: FORMALINA TAMPONADA 10-14 DÍAS

LAVADO 1-4 HRS EN AGUA CORRIENTE

DESCALCIFICACIÓN EN EDTA: 1-2 MESES VARIOS CAMBIOS

LAVADO AGUA CORRIENTE 1-2 HRS

LAVADO AGUA DESTILADA 5 CAMBIOS

HISTOPROCESAMIENTO II:

DESHIDRATACIÓN EN BATERÍA CRECIENTE DEL ALCOHOLES

ETANOL 50° 1 HR

ETANOL 60° 1 HR

ETANOL 70° 1 HR

ETANOL 80° 1 HR
ETANOL 90° 1 HR

ETANOL 100° I 1 HR

ETANOL 100° II 1 HR

ACLARAMIENTO EN LÍQUIDO INTERMEDIARIO

XILOL I 45’

XILOL II 45’

IMPREGNACIÓN EN PARAFINA

PARAFINA I 45’

PARAFINA II 45’

PARAFINA III 45’

INCLUSIÓN EN PARAFINA

ENFRIAR TACOS DE INCLUSIÓN HISTOLÓGICA

OBTENCIÓN DE CORTES:

CORTAR A 4 m EN MICRÓTOMO TIPO MINOT

ESTIRAR CORTE EN BAÑODE FLOTACION

ADHERIR Y ORIENTAR CORTE EN PORTAOBJETOS

SECAR EN ESTUFA

FASE TINCIÓN:

DESPARAFINACIÓN Y REHIDRATACIÓN:

XILOL I 5’-10’ (CON AGITACIÓN OPCIONAL)

XILOL II 5-10’

XILOL II 10’

BATERÍA DECRECIENTE DE ALCOHOLES

ETANOL 100° I 5’

ETANOL 100° II 5’

ETANOL 95° I 5’
ETANOL 95° I 5’

ETANOL 70° I 5’

AGUA DESTILADA 5 MINUTOS

APLICAR TÉCNICA DE TINCIÓN A UTILIZAR

TERMINADA LA TINCIÓN, SE REALIZA DESHIDRATACIÓN Y MONTAJE

AGUA DESTILADA 1 MINUTO

ETANOL 70° 2 MINUTOS

ETANOL 95° I 2-4 MINUTOS

ETANOL 95° II 2-4 MINUTOS

ETANOL 100° I 5’

ETANOL 100° II 5’

XILOL I 5’-10’ (CON AGITACIÓN OPCIONAL)

XILOL II 5-10’

XILOL II 10’

MONTAJE EN RESINA HIDRÓFOBA

COLOCACIÓN DE CUBREOBJETOS

SECADO EN ESTUFA 1 NOCHE

ETIQUETADO

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

TINCIONES:

HEMATOXILINA Y EOSINA: PROTOCOLO YA ENVIADO

TINCIÓN DE GRAM POR GOTEO:

CUBRIR CON CRISTAL VIOLETA 1 MINUTO

LAVA CON AGUA CORRIENTE O AGUA DESTILADA

CUBRIR CON LUGOL 30 SEGUNDOS A 1 MINUTO

DECOLORAR CON ACETONA 10-30 SEGUNDOS

LAVAR CON AGUA DESTILADA

CONTRASTAR CON SAFRANINA 30 SEGUNDOS

DIFERENCIAR 15 SEGUNDOS CON ACETONA POR GOTEO

CUBRIR CON MEZCLA XILOL-ACETONA

SUMERGIR EN 2 CAMBIOS DE XILOL

MONTAJE CON MEDIO HIDRÓFOBO

BROWN-BRENN

A: SOLUCIÓN DE CRISTAL VIOLETA 1%

B: BICARBONATO DE SODIO 5%

C: SOLUCIÓN DE TRABAJO; MEZCLAR AMBAS EN PROPORCION 4 A +1 B

DLUGOL

E: ACETONA EN ÉTER A PARTES IGUALES

F: ACETONA FUCSINA BÁSICA 0.1%

G: ÁCIDO PÍCRICO EN ACETONA 0.1%

CUBRIR CON SOLUCIÓN C

LAVAR EN AGUA CORRIENTE

SECAR

DECOLORAR CON SOLUCIÓN E

TEÑIR CON SOLUCIÓN F

LAVAR Y SECAR

COLOCAR EN ACETONA
DIFERENCIAR EN SOLUCIÓN G

TRATAR EN ACETONA

TRATAR EN MEZCLA ACETONA-XILOL

PASAR POR XILOL

MONTAJE EN MEDIO HIDRÓFOBO

HEMATOXILINA DE VERHOEFF PARA FIBRAS ELÁSTICAS

A: HEMATOXILINA DE VERHOEFF 5% EN ETANOL ABSOLUTO

B: CLORURO FÉRRICO 2%

C: TIOSULFATO DE SODIO 5%

TEÑIR CON HEMATOXILINA DE VERHOEFF 15 MINUTOS

LAVAR EN AGUA DESTILADA

DIFERENCIAR EN CLORURO FÉRRICO 2-3 MINUTOS

LAVADO EN AGUA CORRIENTE

PASO POR TIOSULFATYO DE SODIO 5% 1 MINUTO

CONTRASTAR SI ES NECESARIO

DESHIDRATAR, ACLARAR Y MONTAR CON MEDIO HIDRÓFOBO

MÉTODO RÁPIDO MALLORY-HEIDENHAIN

SOLUCIÓN A:

AGUA DESTILADA 200 ML

ÁCIDO FOSFOTÚNGSTICO 1 G

ORGANGE G 2 G

AZUL DE ANILINA HIDROSOLUBLE 1 G

FUCSINA ÁCIDA 3 G
TEÑIR EN SOLUCIÓN A 5 MINUTOS

LAVAR EN AGUA CORRIENTE 3-5 MINUTOS

DESHIDRATACION, ACLARAMIENTO Y MONTAJE EN MEDIO HIDRÓFOBO