Identificación histoquímica de calcio

En ocasiones la identificación de calcio es útil, pero en otras no, esto ya que en la HE se puede
apreciar muy bien el calcio en el tejado.

Localización de calcio en el organismo

• Huesos y tejidos calcificados

• Tumores osteogénico: osteosarcomas, osteomas, osteocondromas
• Tumores no osteogénico calcificados: pilomatrixoma es un tumor de la piel benigno que se
necrosa y se calcifica este tejido es auto limitante se forma unas masas considerables y
duras que frecuentemente hay que sacarlas son células constituidos por la matriz de pelo
por ello el nombre.

tumores papilares benigno y malignos como el carcinoma papilomatoide, cistoadenoma,

carcinoma seroso cortical, básicamente en cualquier estructura donde se formen papilas
revestidas por epitelio se pueden formar cuerpos de psamoma que son microcalcificaciones
compuestas en capaz.
Psamo: arenas
• Otras calcificaciones: calcificaciones placentarias este producto de placentas de mucho
tiempo, microcalcificaciones mamarias tiene más importancias en la mamografía si son
microcalcificaciones grandes e irregulares tiende a ser benignas pero las pequeñas y
regulares son malignas, también sirve para hacer una localización de algún tumor mamario
que se extirpara.

En general nosotros sacamos el calcio de los tejidos para poder cortarlos más que para tratar de
identificarlos, tratamos este tema ya que alguna vez tendremos un caso para detectar calcio en lo
tejidos como por ejemplo en investigación.

En los huesos si quieren estudiar el

grado de calcificación y la osteogénesis
a partir del cartílago es cuando se
requieren técnicas para detectar calcio.

→ con HE nosotros vemos el calcio

preferentemente basófilo, en esta
imagen el hueso esta descalcificado, en
estas zonas rosadas si tuvieran un poco
de calcio se verían basófilas teñidas con
la hematoxilina.
 → en un tejido sin descalcificar en esta
imagen, podemos ver que a nivel de vasos
sanguíneos tenemos calcificación de la túnica
media, perteneciente a la arterioesclerosis,
llamada también esclerosis calcificada de la
túnica media de monckeberg, que se produce
muy comúnmente en las arterias del útero de
personas mayores.

además, también se pueden ver

calcificaciones alrededor de las glándulas por
tanto tenemos un proceso inflamatorio,
reparativo y que finalmente se calcifico.

Se pueden encontrar calcificaciones en todos los procesos reparativo como por ejemplo en la
tuberculosis curada, dejan una cicatriz que luego se calcifica y se ven clínicamente en la radiográfica
y si ustedes ven un pulmón en una autopsia se encontraran con focos calcificados, y se vería muy
basófilo, no hace falta hacer ninguna tinción ya que con HE se hace el diagnostico, los patólogos en
general no requieren.

→ Este en un caso muy raro de 1987, fíjense

que se tuvo que amputar un dedo de la mano
por que tenía una condrocalcinosis, la
articulación la tenía completamente
calificada, por lo que no podía flexionar el
dedo.
 →aquí tenemos tumores que pueden ser
osteogénico y eventualmente calcificados.

Mientras mas malignos los tumores y menos

diferenciados son, menos osteogénesis realiza por
tanto menos calcificados son.

Y el osteosarcoma, es un tumor maligno

caracterizada por una proliferación de células
neoplásicas atípicas que tienden a secretan matriz
osteoide que eventualmente pueden presentar
calcificaciones.

→En esta imagen el material mas oscuro debe

corresponder a material calcificado.

El calcio demostrable histoquímica mente se encuentra unido a los tejidos combinado con fosfatos,
carbonatos y otros aniones, en general formando sales.

METODOS HISTOQUIMICOS PARA DEMOSTRACION DE CALCIO

• VON KOSSA: es una técnica de plata que identifica las sales de carbonato y fosfato.

• ROJO ALIZARINA S: esta técnica identifica directamente el calcio

• GBHA (GLIOXAL BIS-(2-HIDROXIANIL)): esta técnica es una curiosidad (profesor) esta

técnica es bastante sensible y el protocolo es casi inexistente pero muy específica.

1) REACCION DE VO KOSSA
 ✓ Técnica basada en la reducción de sales de plata y este tejido se dispone en luz solar o en
lampara durante 1 hora a 30 min aprox.

✓ Demuestra carbonatos y fosfatos

Esta técnica consiste en el depósito de plata metálica en donde existe carbonato y fosfato formando
entonces carbonato de plata y fosfato de plata, la plata se reduce en plata metálica.

complementario: se produce una reacción en que las preparaciones que contengan fosfato cálcico,
como son las que presentan mineral óseo, con el nitrato de plata conducen a la formación de un
fosfato de plata, en presencia de luz la plata se reduce a plata metálica, de color marrón/negro y es
fijada con un fijador como el tiosulfato sódico como ocurriría con un revelado fotográfico de los
tradicionales.

esta imagen corresponde a la detección de calcio en un

embrión donde se está produciendo una calcificación
endocondrala y que tiene contraste con color rojo
neutro a 0,1%
 2) ALIZIANINA ROJA S

✓ Antraquinona sintética
✓ Forma quelatos con el calcio originando moléculas con 6
anillos (lo más aceptado)
✓ También podría quelar grupos fenol y sulfónicos por tanto
también puede teñir el fondo, pero más fuertemente tiñe el calcio
✓ La alizarina puede teñir otras estructuras ya que es por sí
misma un colorante aniónico

REACCION DE LA ALIZIANINA ROJA S CON EL CALCIO

Tiene auxocromo que se une formando quelatos dobles con el calcio.

Complementario: EXPLICACION ANEXO DEL TIPEO

Esta tinción es mucho más intensa, estas imágenes corresponden a riñón y segmentos calcificados.
CONSIDERACIONES DE INTERÉS EN TINCIÓN DEL CALCIO CON ALIZARINA ROJA S

El calcio debe ser liberado de los depósitos insolubles para reaccionar con la alizarina y formar
compuestos insolubles, A pH acido el calcio se disocia por ello se usa en soluciones de etanol, de
otro modo no hay reacción, por ello es posible que en el tejido donde hay calcio también allá falta
de nitidez de la estructura.

• Por ello, se puede producir algún grado de difusión

• Efecto del pH:

– A pH más ácido, mayor solubilización del calcio, tinción más intensa y mayor
difusión.

– A pH más básico ocurre lo contrario

• se utiliza pH desde 4 a 8

El pH dependerá de la cantidad de calcio que suponemos tiene el tejido, si el calcio es abundante

no nos conviene hacer una reacción muy acida, pero si el calcio el mínimo nos conviene para tener
una mayor sensibilidad, por tanto, a mayor acidez de la solución de mayor será la sensibilidad, pero
también puede tener mayor difusión.

• Fijación: no se debe utilizar fijadores ácidos. Se prefiere fijadores alcohólicos o neutros

• Formalina neutra es adecuada, formalina tamponada 10%

• Si se quisiera preservar el máximo de calcio, se podría fijar en etanol de 80%, se usa en

investigación en órganos que tienen muy poco calcio, la estructura no se conservara en
excelentes condiciones, pero si el calcio.

recuerden: ¡que la solución de alizianina va en una solución acida por tanto no es aparte!

3) METODO DE GBHA PARA CALCIO

Es el mas sensible para calcio

✓ No es un colorante
✓ Forma quelatos con varios metales (Sr, Ba, Cd, Co, Ni) y con el calcio
✓ Es más sensible que otros métodos, es extremadamente rigurosa ya que no pueden usar
ninguna solución que tenga calcio ni siquiera con agua de la llave.

El procesamiento de la muestra tiene que ser por sustitución y/o congelación, se puede
hacer un procesamiento sin tener que fijar el tejido liquido, la muestra se congela a menos
80°c en nitrógeno líquido en espantan, luego se pasa a una cámara de vacío y se sublima el
agua y después se remplaza por acetona; esto se hace para microscopia electrónica se
llama esta técnica congelación y sustitución.
REACCION DE GBHA PARA CALCIO

CONSIDERACIONES DE INTERÉS EN TINCIÓN DEL CALCIO CON REACCIÓN DEL GBHA

• Técnica muy sensible pero algo complicada

• Se debe evitar cualquier reactivo que contenga calcio

• El procesamiento previo de las muestras es por congelación-sustitución e inclusión en

parafina

• Se realizan los cortes, se montan sin adhesivo y no se desparafinan.

¡¡Ojo se tienen que aprender alizianina y von kossa!!

EXTRA DETECCION DE COBRE:

▪ la detección de cobre tiene importancia clina en la enfermedad de Wilson, puede procurar

un daño hepático que se llama hepatitis lenticular, los hepatocitos tienen forma de
lenteja, por ello el nombre, y se produce por acumulación de cobre en grandes cantidades
en todo el cuerpo, pero se da principalmente en el hígado.

▪ identificación de cobre por enfermedad de Wilson se hace con TECNICA de ácido rubanico
nunca funciono
▪ el diagnostico no se hace por biopsia hepático se hace de forma clínica.