CAP.

27 CROMATOGRAFIA DE GASES

En la cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución
se produce por el flujo de una fase móvil de un gas inerte. La fase móvil no interacciona con las moléculas del anolito; su
única función es la de transportar el analito a través de la columna.

Existe 2 tipos de cromatografía de gases: cromatografía de gas-sólido (GSC) y cromatografía de gas-liquido (GLC)

En la cromatografía de gas-solido se produce la retención de los anolitos en una fase estacionaria sólida como
consecuencia de la adsorción física.

La cromatografía de gas-líquido se basa en la distribución del analito entre la fase móvil gaseosa y una fase liquida
inmovilizada sobre la superficie de un sólido inerte.

27 A. PRINCIPIOS DE CROMATOGRAFÍA GAS-LIQUDIO

Los mismos que la cromatografía

27 A-1 volúmenes de retención

𝑽𝑹 = 𝒕𝑹 𝑭

27 A-3 efecto del caudal de fase móvil.

La velocidad de difusión es mucho mayor en los gases que en los líquidos 10^4 veces mayor que en los líquidos.

27B INSTRUMENTOS PARA LA CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO.

Componentes básicos de un instrumento para la cromatografía de gases.

El caudal de gas se divide antes de entrar en la columna este tipo de disposición se utiliza cuando el detector es
empleado mide un cambio en la propiedad de la corriente de gas por la presencia de las moléculas de analito.
27 B-1 GAS PORTADOR

Deben ser químicamente inertes se encuentra el helio, el nitrógeno y el hidrógeno. La elección de gases esta
determinado por el detector que se utiliza. Con el suministro de gas se encuentra asociados los reguladores de presión,
manómetros y medidores de caudal.

Los caudales se controlan con medidores de presión de dos niveles colocados en el cilindro del gas.

El intervalo de presión de entrada normalmente oscila entre10 y 50 psi por encima de la presión del entorno que
conduce a caudales de 25 a 50 ml/min con la columnas rellenas, y de 1 a 25 ml/min a la columnas abiertas (columnas
capilares) los caudales pueden determinarse mediante un rotámetro situado en la cabeza de la columna.

27 B-2 SISTEMA DE INYECCIÓN DE LA MUESTRA

La eficacia de la columna requiere que la muestra sea de un tamaño adecuado y que sea introducida como un tapón de
vapor. La inyección lenta de muestra demasiado grande provoca un ensanchamiento de las bandas y una pobre
resolución. El método más común de inyección de muestra implica el uso de una micro jeringa para inyectar una
muestra liquida o gaseosa a través de un diagrama o de goma silicona, en una cámara de vaporización instantánea
situada en la cabeza de la columna.

Para las columnas analíticas ordinarias el tamaño de muestra varía desde unas pocos decimas de microlitro a 20 µL.

Las muestras capilares exigen muestras mucho menores =10^-3 µL en estos casos se emplea un sistema divisor de la
muestra que permite pasar a la cabeza de la columna solamente una pequeña fracción de la muestra, desechándose el
resto.

Se usan válvula rotatorios en los trabajos cuantitativos tanto en el caso de líquidos como en gases se introducen
tamaños de muestra más reproducibles mediante el uso de esta válvula. Con estos dispositivos los errores relativos
debidos al tamaño pueden reducirse hasta ser un 0.5 a un 2 por 100,.

La válvula rotatoria de muestra se llena con un exceso de muestra, girando la válvula 45 grados se introduce un
volumen reproducible ACB en la fase móvil. Las muestras solidas se introducen como disoluciones o alternativamente
en viales de paredes delgadas cerrados herméticamente que pueden colocarse junto a la cabeza de la columna y ser
perforados o aplastados desde el exterior.

27 B-3 CONFIGURACIÓN DE LA COLUMNA Y DEL HORNO DE LA COLUMANA

En cromatografía de gases se usan dos tipos generales de columnas, las rellenas y las abiertas o capilares. La columnas
abiertas son más eficaces y más rápidas que las columnas rellenas.

Las columnas varían desde menos de 2 hasta 50 m de longitud o más. Están construidas con acero inoxidable, vidrio,
sílice fundida o teflón, a fin de poder colocarse en el interior de un horno termostatizado, normalmente se configura
como helicoides con diámetros de 10 a 30 cm. La temperatura de la columna es una variable importantes que para un
trabajo preciso ha de regularse a las decimas de grado por eso la columna normalmente se introduce dentro de un
horno de temperatura controlada.

La temperatura optima de la columna depende del punto de ebullición de la muestra y del grado de separación
requerido, para muestras que presentan un amplio intervalo de temperaturas de ebullición a menudo es conveniente
emplear un programación de temperatura, con lo que se aumenta la temperatura de la columna de forma continua o
por etapas al mismo tiempo que tiene lugar la separación. En general, la resolución óptima se asocia con una
temperatura mínima: en contrapartida la reducción de temperatura produce un aumento en el tiempo de elución y por
tanto del tiempo que necesita para completar el análisis.

27 B-4 SISTEMAS DE DETECIÓN

El dispositivo espectrométrico sirve para detectar la aparición de los picos de los analitos al final de la columna y
también para identificarlos.

Características del detector ideal para cromatografía de gases

 1.- adecuada sensibilidad. Aquello que constituye una adecuada sensibilidad no puede evaluarse de forma cuantitativa.
Poe ejemplo las sensibilidades de los detectores que se van a describir difiere en un factor de 10 7. Aunque todos se utilizan
extensamente y son adecuadas en ciertos casos, sin embargo, los menos sensibles no resultan convenientes para algunas
aplicaciones. En general la sensibilidad de los detectores actuales se encuentran en el intervalo de 10 -15 y 10 -8 g de soluto/s.
 2.-buena estabilidad y reproducibilidad
 3.- respuesta lineal para los solutos que se extienda a varios órdenes de magnitud.
 4.-intervalo de temperatura de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente hasta al menos 400oC.
 5.-tiempo de respuesta corto que sea independiente del caudal.
 6.-alta fiabilidad y manejo sencillo. Hasta el punto que el detector debería estar a prueba de la impericia de
operadores inexpertos.
 7.-respuesta semejante para todos los solutos o por el contrario, una respuesta selectiva y altamente predecible
para uno o más tipos de solutos.
 8.-no destructivo de la muestra.

Detectores de ionización de llama

Es el más utilizado. En un quemador, el efluente de la columna se mezcla con hidrógeno y con aire para luego
encenderse eléctricamente, la mayoría de los compuestos orgánicos cuando se piroliza a la temperatura de una llama de
hidrogeno aire producen iones y electrodos que puede conducir la electricidad a través de la llama.

Cuando se aplica una diferencia de potencial del quemador y un electrodo colector situado por encima de la llama, la
corriente que resulta =10-12 se dirige para su medida hacia un amplificador operacional de alta impedancia.

La ionización en la llama de los componentes que contiene carbono no es un proceso bien establecido, aunque se
observa que el número de iones que se produce es relativamente proporcional al número de átomos de carbono
reducidos en la llama. El detector de ionización de llama responde al número de átomos de carbono que entra en el
detector por unidad de tiempo, por ello es un detector sensible a la masa, que un sistema sensible a la concentración.

Grupos funcionales como carbonilo alcohol, halógenos y amina, originan en la llama pocos iones o prácticamente
ninguno.

El detector es insensible a los gases no combustibles como H2O, CO2, SO2 Y NO2 estas propiedades hacen del detector de
ionización de llama uno de los detectores más utilizados para el análisis de la mayoría de los compuestos orgánicos.

La insensibilidad del detector de ionización de llama hacia al agua le hace útil para la detección de contaminantes en
muestras naturales de agua. El detector de ionización de llama posee una elevada sensibilidad de 10-13 g/s un gran
intervalo de respuesta líneas 107 y un bajo ruido una desventaja es que es destructivo a la muestra.
DETECTORES DE CONDUCTIVIDA TÉRMICA (TDC)

Se basan en los cambios en la conductividad térmica de la corriente de gas ocasionado por la presencia de las moléculas
de analito. Se denomina a veces catarómetro. el sensor de un catarómetro consiste en un elemento calentado
eléctricamente cuya temperatura, a una potencia eléctrica constante, depende de la conductividad térmica del gas
circulante. El elemento calentado es un hilo de platino oro o wolframio, o también un termistor semiconductor, la
resistencia del hilo o del termistor da una medida de la conductividad térmica del gas, a diferencia del detector de hilo,
el termistor tiene un coeficiente de temperatura negativo.

Se debe usarse hidrogeno o helio como gas portador con la finalidad de obtener una buena sensibilidad, y por qué la
conductividad de los otros gases portadores son mas parecidas a las de los constituyentes orgánicos.

Las ventajas del detector de conductividad térmica son su sencillez, su amplio intervalo dinámico lineal (10 5), su
respuesta universal tanto a especies orgánicas como a inorgánicas y su carácter no destructivo lo que permite recoger
los solutos tras la detección. Una limitación del catarómetro es su sensibilidad relativa baja (10-8 g de soluto/ml de gas
portador). Debido a esto los detectores de conductividad térmica hace posible su utilización con columnas capilares,
debido al pequeño tamaño de muestra con el que estas columnas operan.

Detectores de quimioluminiscencia de azufre (SCD)

Se basa en la reacción entre ciertos compuestos azufrados y el ozono. La intensidad del fluorescencia resultante es
proporcional a la concentración de azufre, es útil en la detección de contaminantes como los mercaptanos. En el
detector SCD se mezcla el eluyente con hidrógeno y aire y se produce combustión como en los detectores de ionización
de llama.

Detectores de captura de electrones (ECD)

Para análisis de muestra medioambientales, debido a su sensibilidad de detectora compuestos que contienen
halógenos, tal como es el caso de las pesticidas y de los bifenilos policlorados. Es de respuesta selectiva, siendo muy
sensible a las moléculas que contienen grupos funcionales electronegativas tales como los halógenos, peróxidos,
quinonas y grupos nitro en cambio no es sensible a grupos funcionales aminas, alcoholes e hidrocarburos. Una
aplicación importante del detector de captura de electrones es la detección y determinación de insecticidas clorados.

Son altamente sensibles y tienen la ventaja de no alterar la muestra significativamente a diferencia del detector de
llama, por otra parte, su intervalo de respuesta lineal se limita normalmente a unos dos órdenes de magnitud.

Detectores de emisión atómica (AED)

el efluente se introduce en un plasma de helio obtenido con microondas, que se acopla a un espectrómetro óptico de
emisión de diodos en serie. El plasma es suficientemente energético como para atomizar todos los elementos de una
muestra, excitarles y así obtener un espectro de emisión atómica característico. El detector permite medir la
concentración de 15 elementos.

Detectores termoiónicos (TID)

Es el detector selectivo de los compuestos orgánicos que contiene fosforo y nitrógeno. Su respuesta a un átomo de
fosforo es 10 veces mayor que a un átomo de nitrógeno y 10 4 a 106 veces superior que un átomo de carbono. En
comparación de ionización de llama es 500 veces más sensible para los compuestos que contienen fósforo y unas 50
veces más sensible a la especie nitrogenada. El efluente de la columna se mezcla con hidrogeno, pasa a través de la
llama, y se quema. El gas caliente fluye alrededor de una bola de silicato de rubidio calentada eléctricamente, la cual se
mantiene a unos 180 V con respecto al colector.

Otros tipos de detector

El detector fotométrico de llama (FPD) se ha utilizado para el análisis de contaminantes del aire y del agua como las
pesticidas y los hidrocarburos. Se trata de de un detector selectivo que sobre todo es sensible a los compuestos que
contiene azufre y fósforo, el eluyente se hace pasar a través de una llama hidrogeno aire a baja temperatura lo cual
convierte parte del fosfora a un especie HPO que emite bandas de radiación de 510 y 526 nm. El azufre se convierte en
S2, emite una banda centrada en 394 nm.

Detector de fotoionización el efluente de la columna se irradia con un haz intenso de radiación ultravioleta de energía
variable entre 8.3 y 11.7 eV (=149 a 106 nm) que provoca la ionización de la muestra.

27 C. COLUMNAS Y FASES ESTACIONARIAS PARA CROMATOGRAFÍA DE GASES.

Anteriormente la fase estacionaria era una película delgada de líquido adsorbida en la superficie de un soporte sólido
inerte y finalmente dividido.

En las columnas capilares, la fase estacionaria era una película uniforme de líquido de unas pocas décimas micrómetro
de espesor que recubría uniformemente el interior del tubo capilar. La columna abiertas la utilización de columnas
abiertas con 300.00 platos o mas. Tiene capacidad limitada a muestras pequeñas la frgilidad de las columna, problemas
mecánicos relacionada con la introducción de la muestra y la conección de la columna con el detector, columna mal
preparadas y de corto duración.

27 C.1 columnas abiertas

Las columnas abiertas o columnas capilares son de dos tipos básicos columna abierta de pared recubierta (WCOT) Y
columna abierta con soporte (SCOT). Las columnas abiertas de pared recubierta son simplemente capilares con la pared
interna recubierta de una fina capa de fase estacionaria. La superficie interna del capilar está cubierta por tierras
diatomeas.

La eficacia de una columna SCOT es menor que la de una columna WCOT pero es sensiblemente menor que una
columna rellena.

WCOT (se construye de acero inoxidable o vidrio las columnas de vidrio se trata con ácido clorhídrico gaseoso disolución
de ácido clorhídrico concentrado o fluoruro de ácido de potasio.

Las columnas abiertas de sílice más frecuentemente utilizadas tienen un diámetro interno de 320 y 260 µm.
27 C-2 COLUMNA RELLENAS

Construidas con tubo de vidrio, metal (acero inoxidable, cobre, aluminio), o teflón con una longitud característica de 2 a
4 m y un diámetro interno de 2 a 4 mm. Estos tubos se rellenan densamente con un material de relleno o soporte solido
finalmente dividido y homogéneo que se recubre con una delgada capa (0.05 a 1 µm) de fase estacionaria liquida.

Materiales de soporte sólidos

El soporte solido de una columna rellena sirve para retener y ubicar la fase estacionaria líquida de tal forma que exista la
mayor superficir de contacto posible con la fase móvil.

El soporte ideal consiste en partículas consiste en partículas esféricas, pequeñas uniformes con una buena resistencia
mecánica y una superficie especifica de al menos 1 m2/g el material debe ser inerte a elevadas temperaturas y poder
humectarse homogéneamente con la fase liquida. (no hay sustancia) están hechas con tierras diatomeas de procedencia
natural (plantas de base unicelulares)

Tamaño de partículas de los soportes

La eficacia de una columna de cromatografía de gases aumenta rápidamente cuando disminuye el diámetro de
partículas del relleno. La presión varía inversamente con el cuadrado del diámetro de la partícula. Esto a limitado el
tamaño de las partículas que se utilizan en cromatografía de gases, no es conveniente trabajar con diferencias de
presión superiores los 50 psi. Las partículas del soporte son de 60 a 80 mesh (260 a 170 µm) de 80 a 100 mesh (170 a
149 µm).

27 C-3 adsorción sobre los rellenos de la columna o las paredes del capilar

La adsorción de los analitos polares o polarizador es unos de los problemas que ha afectado a la cromatografía de gases
tales como los alcoholes o hidrocarburos aromáticos sobre las superficies de silicato de los materiales soporte de la
columna o las paredes del capilar.

La adsorción da como resultados picos distorsionados, los cuales se ensanchan y a menudo presentan una cola.

CAUSAS QUE PRODUCEN LA ADSORCIÓN

• Grupos silanol que se forman en la superficie de los silicatos debido a la humedad.

• Los grupos SiOH presentes en la superficie del soporte tienen una gran afinidad por las moléculas orgánicas
polares, y tienden a retenerlas por adsorción.

• Los materiales soporte pueden desactivarse por sililación con dimetilclorosilano (DMCS). La reacción es
 • Mediante el lavado con metanol, el segundo cloruro se sustituye por un grupo metoxilo

• Las superficies silladas de las columnas rellenas todavía pueden mostrar una adsorción residual, producidas
debido a las impurezas de óxidos metálicos presentes en la tierra de diatomeas. Un lavado ácido previo a la
sililación elimina estas impurezas.

27 C-4 fase estacionaria

Las propiedades deseables para una fase líquida inmovilizada e una columna cromatografica gas-líquido comprende:

1. Baja volatilidad (punto de ebullición del líquido al menos 100oC mayor que la T de trabajo máxima de la
columna)
2. Estabilidad térmica
3. Químicamente inerte
4. Características del disolvente tales que los valores de K y alfa estén dentro de intervalos conveniente.

La mejor fase estacionaria se determina en los laboratorios dependiendo para cada caso.

El tiempo de retención de un soluto en una columna depende de su constante de distribución relacionada con la fase
estacionaria. es por esto que el líquido inmovilizado debería originar diferentes coeficientes de distribución para los
distintos solutos estos coeficientes no deben de ser demasiados grandes ni demasiado pequeños ya que produce tiempo
de retenció grande o pequeño).

La polaridad es el efecto del campo eléctrico en la inmediata vecindad de una molécula, y se mide por el momento
dipolar de la especie. La fase estacionaria contiene grupos como –CN, -CO, -OH. Las fases estacionarias del tipo
hidrocarbonados y dialquilsiloxanos son no polares, mientras que la fase poliéster es altamente polares.

Solutos polares: alcoholes, aminas, polaridad intermedia: éteres, cetonas, y aldehídos, no polares: hidrocarburos
saturados la polaridad de la fase estacionaria debe de ser semejante a los componentes iguales. Cuando la igualdad es
buena el orden de elusión viene determinado por el punto de ebullición de los compuestos a eluir

Algunas fases estacionarias de uso extendido.

Fases estacionarias enlazadas y con enlaces entrecruzados

El objetivo del enlace y del entrecruzamiento es la preparación de una fase estacionaria de larga duración que se puede
limpiar con un disolvente cuando la película se haya contaminado. Sangrado: cuando una pequeña cantidad de líquido
inmovilizado es arrastrada fuera de la columna durante el proceso de elución. La unión química y el entrecruzamiento
inhiben el sangrado.

La forma de realizar el entrecruzamiento consite en incorporar un peróxido al liquido original.

Espesor de la película

Espesor varía de 0.1 a 5 µm. el espesor de la película afecta principalmente a las características de retención a la
capacidad de la columna. Las películas gruesas se utilizan con analitos muy volátiles, debido a que retiene más tiempo
los solutos y asi proporciona mayor tiempo para que pueda tener tiempo lugar la separación. Las películas delgadas son
apropiadas para separar especies de baja volatilidad en un tiempo razonable.

Columna de 0.26 o 0.36 mm se recomienda un grosor de pleicula de 0.26 µm con columnas megacapilares se utilizan
generalmente películas de 1 a 1.5 µm

Fases estacionarias quirales

Método para la separación de enantiómeros por cromatografía de gases o de líquidos. 2 procedimientos, uno se basa en
la formación de compuestos derivados del analito con un reactivo ópticamente activo, lo que origina un par de
diastereoisómeros que se pueden separar en un columna quiral. El método alternativo utiliza un líquido quiral como fase
esta estacionaria, por esta razón se han desarrollado varias fases quirales derivados de aminoácidos

27D. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA GAS LIQUIDO (GLC)

Es una herramienta de separación eficaz de mezclas orgánicas complejas organometálicos y a sistemas bioquímicos,
proporciona un medio para llevar a cabo análisis. Una tendencia importante en este campo ha consistido en la
combinación de las notables cualidades para el fraccionamiento que tiene la cromatografía gas líquido con las mejores
propiedades para la identificación que proporciona algunos instrumento como los espectrómetros de masa de infrarrojo
y RMN.

27 D-1 Análisis cualitativo

Los cromatogramas de gases se utilizan a menudo como criterio de pureza de compuestos orgánicos. Los
contaminantes si están presentes se manifiestan por la aparición de picos adicionales los grados de estos picos
proporciona una estimación aproximada del grado de la contaminación.

Útil para evaluar la efectividad de los procedimientos de purificación.

Es un medio excelente para confirmar la presencia o ausencia de un supuesto componente de una mezcla, siempre que
se suponga un patrón. Si se adiciona una muestra conocida el croamtograma no debe presentar ningún pico nuevo.

Factores de selectividad

B es la sustancia patrón alfa proporciona un índice para la identificación de compuestos A

Índice de retención (kovats 1958)

Es un parámetro para identificar solutos a partir de los cromatogramas. El índice de retención por definición para un
alcano normal es = 100 veces el número de carbonos de compuesto sin considerar(es independiente de) el relleno de la
columna, la temperatura u otras condiciones cromatográficas. Y para todos que no so sean alcanos normales varía a
menudo varios cientos de unidades de índices de retención, con la variables de la columna.

27 D-2 ANÁLISIS CUANTITATIVO

La señal de una columna cromatografíca gas-líquido se ha utilizado generalmente para análisis cuantitativo y
semicuantitativos. La exactitud depende de la naturaleza de la muestra, el control de las variables, igual que en el (26 F-
2)

27 D-3 Acoplamiento de la cromatografía de gases con métodos espectroscópicos

Se combinan con otras técnicas selectivas como la espectroscopia y la electroquímica. El método resultante se denomina
métodos acoplados y proporcionan al químico unas potentes herramientas para la identificación de los componentes de
mezclas complejas.

 Primer método Los gases efluentes de una columna comatográfica después de ser detectad por un detector no
destructivo y no selectivo, se recogían como fracciones separadas en una trampa fría.
 Segundo método: consiste en la aplicación de un detector selectivo para controlar continuamente el efluente de
la columna. Requiere el uso de un ordenador (computadoras)

Cromatografía de gases/ espectrometría de masas (GC/MS)

La Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas (GC/MS, por sus siglas en inglés) es una
técnica analítica dedicada a la separación, identificación y cuantificación de mezclas de sustancias volátiles y
semivolátiles. La separación de dichas sustancias depende de la diferente distribución de las sustancias
estudiadas entre las fases móvil y estacionaria que conforman el sistema. Una vez separadas las sustancias son
fragmentadas y analizadas en función de su patrón de fragmentación, el cual puede ser comparado con
información contenida en una base de datos de espectros de masas para su identificación preliminar. La
identificación definitiva, así como la cuantificación de cada sustancia debe hacerse mediante el empleo de
sustancia de referencia.

El detector de masas más simple para cromatografía de gases es el detector de trampas de iones . lo iones se
generan por impacto de electrones o por ionización química .

Cromatografía de gases/ espectroscopia infrarroja de transformada de fourier (GC /FTIR)

Proporciona un potente medio para la separación y la identificación de los componentes de mezclas

complejas.

27 E CROMATOGRAFÍA GAS-SÓLIDO

Se basa en la adsorción de sustancias gaseosas sobre superficies sólidas. Los coeficientes de distribución son
generalmente mucho mayores que en el caso de la cromatografía gas-liquido.
Es útil para la separación de especies que no se retienen en columnas de gas-líquido, tales como los componentes del
aire, sulfuro de hidrógeno, disulfuro de carbono, óxidos de nitrógeno, monóxidos de carbono, dióxidos de carbono y
gases nobles.

Se lleva a cabo en columna rellenas y en columnas abiertas

27 E-1 Tamices moleculares

Son intercambiadores de iones de silicato de aluminio, cuyo tamaño de poro depende del tipo de catión presente.
Tamaño de 40/60 a 100/120 mesh. Se clasifican según el diámetro máximo de las moléculas que pueden penetrar en los
poros. Los tamices moleculares se encuentran con tamaño de poros de 5,10 13 armtrong.

Los tamices moleculares se pueden utilizar para separar moléculas pequeñas y grandes

27 e-2 polímeros porosos.

Fabricadas a partir de estireno polimerizado con divinilbenceno. Se aplican en la separación de especies polares
gaseosas tales como sulfuro de hidrogeno, óxidos de nitrógeno, agua, dióxido de carbono, metanol, y cloruro de vinilo.