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FACULTAD DE QUÍMICA
PROGRAMA EDUCATIVO
QUÌMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO
MANUAL DE LABORATORIO
ELABORARON:
Dr. en C. JONNATHAN GUADALUPE SANTILLÁN BENÍTEZ
Dr. En C. ENRIQUE MORALES AVILA
Dra. en C. SARA VEGA GARCÍA
Septiembre 2014
1
Contenido
Introducción....................................................................................................................................... 3
Congruencias con el contenido programático de la unidad de aprendizaje ................................ 4
Formato de la práctica y simbología ............................................................................................... 5
Evaluación del curso ......................................................................................................................... 6
Reglamento del laboratorio de Virología ........................................................................................ 7
Manejo de residuos peligrosos ......................................................................................................... 8
Práctica 1. Constitución de un laboratorio de virología de investigación o diagnóstico. ............ 9
Práctica 2. Inoculación de huevo embrionado en saco vitelino y cavidad alantoidea ............... 13
Práctica 3. Hemaglutinación .................................................................................................... 19
Práctica 4. Inoculación intracerebral de ratón lactante .............................................................. 22
Práctica 5. Diagnóstico rápido de virus rábico (tinción de Sellers) ............................................ 26
Práctica 6. Cultivo Celular ............................................................................................................. 30
Práctica 7. Conteo Celular.............................................................................................................. 34
Práctica 8. Titulación Viral ............................................................................................................ 37
Práctica 9. Inhibición de la Hemaglutinación ............................................................................... 41
Práctica 10. Determinación de anticuerpos IgM anti-Rubéola ................................................... 44
Práctica 11. Determinación de anticuerpos IgG Anti-Citomegalovirus ..................................... 47
2
Introducción
El término virus viene del latín veneno, se utilizó a finales del siglo XIX para describir a los
agentes más pequeños que las bacterias causantes de enfermedades. En 1940 el desarrollo
del microscopio electrónico posibilitó por primera vez, la visualización de los virus, años
después la centrifuga de alta velocidad permitió concentrarlos y purificarlos.
En la década de los 50’s con el desarrollo del cultivo celular, actual soporte de la replicación
viral, junto con la inoculación de huevos embrionado y el uso de algunos animales de
laboratorio, se descubren nuevos virus, la mayoría de los cuales fueron analizados en la
década de los 60’s y 70’s con el fin de determinar sus características físicas, químicas y
antigénicas para poder establecer las metodologías apropiadas para diagnosticarlos por el
laboratorio.
Este manual está dirigido a los estudiantes del noveno semestre de la licenciatura de Químico
Farmacéutico Biólogo de la facultad de química de la UAEM y pretende proporcionar a los
alumnos los conocimientos y habilidades básicas para el manejo de las principales técnicas
diagnósticas de laboratorio relacionadas con las infecciones virales humanas.
3
Congruencias con el contenido programático de la unidad de aprendizaje
Nota: el manual de laboratorio se realizó tomando en cuenta los conocimientos que se generan en una
práctica y son necesarios en la mayor parte de los casos para el desarrollo de prácticas posteriores,
además los materiales obtenidos en algunas prácticas se reutilizan en las practicas consecutivas, tal
es el caso de la práctica 2, de donde se obtienen productos útiles en la prácticas 3, 6 y 9.
4
Formato de la práctica y simbología
Introducción
Objetivo
Fundamento teórico
Observaciones
Bibliografía
Actividades de comprobación o evaluación
Observaciones
Bibliografía
5
Evaluación del curso
El discente tendrá derecho a presentar las evaluaciones correspondientes, con base a los
lineamientos establecidos en el Reglamento Interno de la Facultad de Química. Así mismo
debe ser puntual a cada actividad académica, mostrar un comportamiento adecuado en cada
sesión y cumplir con el 80% de asistencia. La unidad de aprendizaje se va a evaluar con base
en la construcción de conocimientos y habilidades adquiridos durante el proceso de
aprendizaje; se tomarán en cuenta los valores y la actitud mostrados por los estudiantes en
las actividades académicas, en la participación con exposiciones y la entrega de trabajos
escritos como evidencia, propios de cada una de las unidades de competencia.
Evaluación Ponderación
Si el alumno en esta ponderación alcanza una evaluación igual o mayor a 8.0 (ocho puntos),
estará exento de presentar el Examen Final; si la evaluación obtenida en esta ponderación es
menor de 8.0 (ocho puntos), el alumno tendrá que presentar el Examen Final
Laboratorio
Reportes 20%
Bitácora 10%
Total 100%
6
Reglamento del laboratorio de Virología
1. Uso obligatorio de bata blanca de manga larga y abotonada, sin bolsas y en cada área
usar batas desechables sobre la blanca.
2. Uso obligatorio de guantes en el manejo de animales y muestras clínicas.
3. Usar cubre bocas o careta en el caso de prácticas de mayor riesgo.
4. Limpiar las mesas de trabajo con solución antiséptica (benzal o hipoclorito de sodio
al 1 % al inicio y al finalizar la práctica.
5. No abandonar el laboratorio una vez que ha iniciado la práctica, salvo emergencia
justificada.
6. No correr en el laboratorio.
7. Contar con gasas o papel adsorbente en cada mesa de trabajo.
8. Prohibido tomar alimentos dentro del laboratorio.
9. Evitar corrientes de aire en el laboratorio.
10. Disponer de recipiente con agua clorada para inactivar las puntas de las micropipetas,
material contaminado con reactivos y/o muestras biológicas.
11. Utilizar jabón líquido para aseo de las manos antes de abandonar el laboratorio al
término de la sesión.
12. Esterilizar en autoclave el material que así lo requiera.
13. En caso de algún accidente o percance avisar al profesor de la práctica.
14. Respetar las normas internacionales de bioseguridad en los laboratorios para trabajar
virus.
LA REGLA DE ORO
Toda muestra: sangre, suero, cultivos bacterianos, cultivos celulares, virus y
productos radiactivos deben manipularse con extremo cuidado, como si fuesen
muestras potencialmente patógenas.
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Manejo de residuos peligrosos
Los residuos peligrosos son aquellos residuos producidos por el generador con algunas de las
siguientes características: infecciosas, combustibles, inflamables, explosivas, reactivas, radioactivas,
volátiles, corrosivas y/o tóxicas, que pueden causar daño a la salud humana y/o al medio ambiente.
Así mismo se consideran peligrosos los envases, empaques y embalajes que hayan estado en contacto
con ellos.
Al final de cada práctica se presentará una propuesta de clasificación, registro y recolección de los
residuos químicos, para su posterior almacenamiento y confinamiento.
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (R.P.B.I.) deben clasificarse y recolectarse de acuerdo
a la norma NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, que considera como R.P.B.I. los siguientes:
Los cultivos generados en los procedimientos diagnósticos y de investigación, asi como los generados
en la producción de agentes biológicos.
Su activación y tratamiento se lleva a cabo entre otros, por métodos químicos o térmicos, es el caso
de la desinfección con hipoclorito de sodio y esterilización por calor seco o calór húmedo
frecuentemente utilizados en las áreas de microbiología.
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FACULTAD DE QUÍMICA
PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción
Un laboratorio de virología debe tener las paredes pintadas con pintura epóxica, las esquinas
redondeadas y tener un flujo de aire positivo en las puertas para evitar que el aire externo
entre, además debe cumplir con la normatividad vigente así como tener un control de calidad
externo.
Objetivo
Fundamento teórico
9
A continuación se describen los instrumentos de un laboratorio de cultivo celular.
1. Durante la visita al Laboratorio de Biología Molecular del CICMED será necesario el uso
de equipo de protección básico como la bata blanca de manga larga y abotonada.
2. Conducirse con compostura dentro del laboratorio y seguir las indicaciones del
coordinador.
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Procedimiento
1. ¿Cuáles son los usos del tanque de nitrógeno líquido y que temperatura alcanzan?
4. Describe las diferencias elementales entre una centrifuga ordinaria y una centrifuga
refrigerada.
Observaciones
Bibliografía
11
1. Fenner-Whitte (1998). Virología Médica. Ed. Prensa Medica
2. InDRE (1995). Manual de técnicas de laboratorio de virología y bacteriología médica Vol.
1
3. Carballa IG., Oubiña J. (1998). Virología Médica. Ed. El ateneo, Argentina
4. Díaz R., Gamazo C. y López Goñi (1999). Manual práctico de virología. 2da Edición.
Editorial Masson. S.A. Barcelona.
5. http://www.virology.net/
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PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción
Objetivo
Que el alumno conozca la importancia diagnóstica y usos de los huevos embrionados así
como su anatomía, técnicas de inoculación y la susceptibilidad viral al cultivarse en las
diferentes cavidades y observando los efectos citopáticos que producen ciertos virus
humanos.
Fundamento teórico
Los virus pueden inocularse en las diferentes estructuras de los huevos embrionados de pollo
o pato, los huevos se inoculan entre los 5 a los 14 días post-fertilización, dependiendo del
estado de desarrollo de la membrana o cavidad que se desee infectar, el sitio de inoculación
se elige según el tropismo viral y puede ser:
13
Para la inoculación del embrión (7-14 días) se practica un pequeño orificio en el cascarón del
huevo, previa asepsia y se inyecta el inoculo, se incuba a 37 ° C, la replicación viral puede
producir la muerte del embrión, lesiones características o la manifestación de antígenos
virales por ejemplo las hemaglutininas.
Materiales y reactivos
14
Procedimiento
A. Metodología de inoculación
3. Con el ovoscopio marcar con un lápiz sobre 4. Encontrar y marcar el saco o cámara
el cascarón la membrana que separa al de aire en la parte superior del
embrión de la cámara de aire. huevo.
6. Los testigos no reciben ningún tratamiento, 5. Sellar el orificio del cascarón con
y se incuban en las mismas condiciones que parafina, pegamento blanco o
los inoculados. esmalte de uñas e incubar a 34 ° C
por 72 h.
15
2. Observar al ovoscopio y marcar el límite de la cámara de aire, marcando la posición del
embrión. La cámara de aire debe estar en el polo.
3. Realizar un pequeño agujero en el límite de las ¾ partes del huevo.
4. Tomar el inoculo con aguja de inoculación No. 22 con una jeringa de insulina.
5. Inocular en el agujeto hecho en posición directa al embrión con ángulo de 90°.
1. Colocar el huevo con posición vertical y con un taladro hacer un orificio en posición
directa del embrión.
2. Con aguja N° 22 pinchar en forma oblicua formando un ángulo de 45° en el borde (en
relación al polo de la cámara de aire); introducir las 1½ pulgadas.
3 . Otra forma es marcar la cámara de aire, a 0.5 cm de la marca hacer un agujero e inocular
0.3 mL del inoculo con un aguja número 26 ó 27 de insulina.
4 . Hacer un agujero por encima de la cámara de aire y en posición contraria al embrión e
inocular.
1. Cortar con las tijeras la cáscara a nivel 2. Cortar con las tijeras la cáscara a nivel
del límite de la cámara de aire. del límite de la cámara de aire.
4. Extraer con pipeta Pasteur el líquido 3. Con ayuda de una jeringa retirar el líquido
amniótico. alantoideo.
1. Esquematiza un huevo embrionado, señalando cada una de las cavidades que los
caracterizan.
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3. Los poxvirus ¿en qué cavidad se inoculan?
Observaciones
Bibliografía.
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UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Práctica 3. Hemaglutinación
Introducción:
Objetivo
Se realizará el reconocimiento del virus de New Castle mediante la Hemoaglutinación
Directa, por su acción sobre los glóbulos rojos de pollo.
Fundamento teórico
El título de una hemoaglutinación está determinado por la última dilución de una serie, en
donde se observa, macroscópicamente, una malla formada por la unión del virus y/o antígeno
libre a receptores en la membrana de los glóbulos rojos y en la siguiente dilución un
sedimento o “botón” de glóbulos rojos.
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Aspectos de seguridad e higiene
Materiales y reactivos
Procedimiento:
1. Colocamos 8 tubos en un gradilla, 2. Con una pipeta tomar 0.2 ml. de cepa de
colocándole al primero 0.8 ml. de SSF Newcastle y depositarla en el tubo No.
y del tubo 2 al 8 añadir 0.5 ml. de 1 (dilución 1/5).
Suero Fisiológico.
4. Repetir hasta obtener las diluciones 3. Tomamos 0.5 ml. del tubo 01 y lo
1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640 (el depositarnos en el tubo Nº 02, (dilución
tubo N° 08 es el control se le añadirá 0.5 1/10).
ml. de la cepa New Castle).
5. A cada tubo colocamos 0.5 ml. de los 6. Dejamos reposar al medio ambiente por
glóbulos rojos lavados al 0.7 % 15 a 20 minutos.
(incluyendo el tubo control).
Observaciones
Bibliografía.
Introducción
Objetivo
Que el alumno aprenda a realizar la correcta inoculación de ratones por las vías
intracerebral, intraperitoneal, subcutánea y oral.
Fundamento teórico
22
cocksakievirus y rabdovirus, pueden ser inoculados por vía intracerebral o intraperitoneal, en
cambio los ratones adultos son susceptibles a la rabia, la fiebre amarilla y linfogranuloma, la
inoculación se hace por vía intracerebral y los síntomas principales son la falta de
coordinación y ataxia.
1. Purgar las jeringas usando un tubo que contenga material absorbente para evitar aerosoles.
2. Asegurar que el animal este completamente sedado antes de inocularlo.
3. Aplicar correctamente las técnicas de inoculación y sujetar firmemente al animal para
evitar autoinoculaciones.
4. Las jeringas usadas, jamás se re-encapuchan, desechar en el recipiente rígido para RPBI
o en el contenedor de punzocortantes.
5. Los animales que quedan vivos al final de la práctica los animales muertos se colocan en
una bolsa amarilla para RPBI, la cual será refrigerada antes de su destino final.
Material y equipo
23
Procedimiento
Inoculación oral
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3. Que precauciones debes tomar en cuenta al realizar una inoculación.
Observaciones
Bibliografía
25
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UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Los métodos para el diagnóstico de la rabia deben ofrecer condiciones óptimas de precisión,
rapidez y economía. Dentro de estas técnicas está la investigación microscópica de los
corpúsculos de Negri, que se realizan en un frótis de tejido encefálico infectado con el virus
rábico y es teñido por la técnica de Sellers.
Objetivo.
Aprender a efectuar el diagnóstico rápido del virus rábico usando la técnica de Seller
(simulando que el ratón está inoculado o infectado con este virus).
Fundamento teórico
El virus rábico pertenece a la familia Rhabdoviridae, es un RNA virus de una sola cadena,
tiene forma de bala. La rabia se transmite por mordedura o contacto directo de las mucosas
o heridas con la saliva del animal infectado, es la zoonosis más antigua, cuya importancia
radica en su letalidad cercana al 100 %.
La rabia se caracteriza por un cuadro encefálico cuyo diagnóstico diferencial con otras
encefalitis es difícil y solo el examen del laboratorio permitió establecer un diagnostico
seguro.
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Rapidez con la que se obtiene resultado
Notificación inmediata de los resultados
La tinción de Sellers es una técnica sencilla, rápida y de bajo costo para el diagnóstico de la
rabia, que es una de las infecciones virales de notificación obligatoria para el sector salud.
Esta tinción pone de manifiesto los corpúsculos de Negri en el cerebro del animal infectado
o que se sospecha tenia rabia. Se ha observado que los corpúsculos de Negri son
especialmente visibles en el asta de Ammon, en las células piramidales de la corteza cerebral
y en las células de Purkinje en el cerebro.
El colorante de Sellers tiñe los corpúsculos de Negri de color rojo violaceo o rojo ladrillo,
con inclusiones basófilas de color azul oscuro a negro. Dejándolos claramente diferenciados
de las células nerviosas y del tejido intersticial que se tiñe de azul claro y rosa
respectivamente. Los corpúsculos de Negri están constituidos por partículas virales y
constituyentes celulares rodeados de una matriz citoplasmática, contienen DNA (sustrato
eosinófilo) y RNA (granulaciones basófilas).
Materiales y reactivos
Estuche de disección
Abate lenguas
Papel filtro
Colorante de Sellers
Puente y charola de tinción
Solución amortiguadora de fosfatos pH 7.5
Cronómetro
Microscopio
Ratones de 3 -5 semanas de nacidos
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Procedimiento
1. Con ayuda del equipo de disección y de las 2. Se levanta la piel y músculos de la
tijeras de punta fina se realizará un corte cara y cabeza para exponer el cráneo.
entre ambas fosas orbitales del ratón.
4. Se inserta la punta de una tijera para cortar el 3. Se dobla el cuello del ratón para
hueso y se corta la bóveda hasta exponer el exponer el agujero magno.
cerebro.
6. Se saca integro el cerebro
5. Se saca integro el cerebro desprendiéndolo desprendiéndolo de la base del cráneo
de la base del cráneo (incluyendo cerebelo (incluyendo cerebelo y parte de la
y parte de la medula). medula).
Preparación de la impronta
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Figura 1. Corpúsculos de Negri en tejido neuronal
Observaciones
Bibliografía
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UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
1. Cultivos primarios los cuales derivan de tejidos, se mantienen vivos por tiempo
limitado y resistente a dos subcultivos
2. Cultivo de células diploides resisten entre 50 y 70 subcultivos
3. Líneas continuas provienen de células diploides transformadas o de tejidos
neoplásicos como VERO, HeLa, Hep- 2 y KB que pueden ser cultivadas sin límite
aparente.
Objetivo.
Fundamento teórico
Enders descubrió que los virus podrían desarrollarse en cultivo de células “in vitro” y esto
constituyó un hito fundamental en el desarrollo de la Virología. Los cultivos celulares
constituyen el método de elección para la replicación de la mayoría de los virus. El cultivo
celular consiste en mantener vivas en botellas o tubos con medios nutritivos enriquecidos con
sueros y antibióticos.
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Cultivos primarios se obtienen por tratamiento con tripsina de pequeños fragmentos de
tejido humano o animal. Las células disgregadas se lavan, se cuentan en cámaras de Neubauer
o cuenta de eritrocitos y se siembran en tubos cónicos o botellas de Roux, adicionando
medios nutritivos y antibióticos. Se incuban a 37°C, luego de pocas horas las células se
adhieren a la superficie del recipiente y se multiplican formando islotes, que van cubriendo
toda la superficie plástica hasta formar una monocapa.
Estas células pueden usarse para replicar virus e identificarlos, o bien para replicarse las
células y obtener nuevos cultivos. Esto se denomina pasaje o subcultivo. Los cultivos
primarios son altamente sensibles a la replicación viral, su mayor inconveniente es que las
células mueren después de pocos pases.
Materiales y reactivos
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Amortiguador de bicarbonato al 4.4%
Matraces de Erlenmeyer y pipetas estériles
Solución de antibióticos (penicilina/estreptomicina)
Solución de fosfatos
Microscopio invertido o invertoscopio
Incubadora de CO2
Procedimiento
1. Prepara el medio de Eagle de 2. Descongelar y resuspender las
crecimiento y el de mantenimiento células RD o Hep 2c en 5 mL de
Medio
3. ¿Cada cuánto debe cambiarse el medio nutritivo a un cultivo celular y por qué?
32
Observaciones
Bibliografía
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UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Para obtener monoesteratos reproducibles, los tubos o frascos deberán ser sembrados con un
número regulado de células o de una concetración celular determinada. Las células se deben
contar con el hemocitómetro y usando un colorante vital se pueden diferenciar las células
viables de las no viables.
Objetivo.
Fundamento teórico
El monoesterato celular es dispersado con EDTA y tripsina, ya sea por agitación manual de
la suspensión celular durante 10 minutos o usando un agitador magnético, procediendo al
conteo celular.
El cultivo celular permite realizar subcultivos para obtener nuevas generaciones de células
disponibles para su uso inmediato o como reserva conservándolas en criogenia.
De acuerdo al nivel y equipamiento con que cuenta el laboratorio, el conteo celular puede
realizarse ya sea mediante un contador electrónico o de manera manual. El contador
electrónico de células es un instrumento capaz de medir y contar partículas en suspensión,
consta de dos electrodos que transmiten al equipo de amplificación y análisis, los cambios de
resistencia que detectan, cada vez que una de las células en suspensión los cruza. La otra
manera de realizarlo consiste en el uso de un hemocitómetro, usando un colorante que
permite diferenciar las células viables de las no viables.
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Aspectos de seguridad e higiene
Materiales y reactivos
Procedimiento
1. Observar en el invertoscopio la botella
2. En campana de flujo laminar y
con el monoestrato celular para
con mechero, abrir la botella y
verificar viabilidad y confluencia
decantar el medio de cultivo.
celular.
35
7. En un tubo estéril colocar 0.8 mL de
suspensión celular y añadir 0.2 mL de
8. Dejar reposar 3 minutos y llenar
azul de Tripán disuelto en soln. salina
la cámara de recuento.
al 0.85% se Teñirán las células no
viables
Observaciones
Bibliografía
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PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Objetivo.
Que el alumno utilice el cultivo celular como medio de multiplicación del virus de la
poliomielitis y determine el título viral a través del efecto citopático generado.
Fundamento teórico
Algunos virus se replican en los cultivos celulares sin producir efecto citopático visible al
microscopio, sin embargo como producto de la replicación liberan al medio proteínas virales
como las hemaglutininas, que pueden ser detectadas por otros procedimientos. El recuento
37
de placas en agarosa (plaqueo) también se puede emplear como técnica de identificación
viral, ya que se pueden cuantificar los viriones presentes en el inóculo, por medio de unidades
formadoras de placa. Para los virus replicables en cultivo celular, que no producen placas, se
utilizan las pruebas de punto final o dilución, que permiten determinar en forma aproximada
la cantidad de virus presentes en una muestra.
Materiales y reactivos
Equipo de microtitulación
Microplacas de 96 pozos de fondo en U
Microdilutores de 25 L
Pipeta automática multicanal con rango de 25 a 100 L
Puntas para pipeta automática estériles
Antígeno (virus polio vacunal)
Medio Eagle
Botellas de Roux con monocapa confluente entre el 80 – 100%
Solución de antibióticos (penicilina-estreptimicina)
Invertoscopio
Incubadora de CO2
Mechero
Marcador de tinta indeleble
38
Procedimiento
1. Con el cultivo de células RD o Hep 2c
con el 100% de Confluencia 2. Desprender las células con
tripsina-EDTA
4. Menciona tres líneas celulares usadas para el aislamiento viral diferentes a las que
se mencionan en este manual.
Observaciones
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Bibliografía
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PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Objetivo.
Fundamento teórico
Los anticuerpos presentes en el suero pueden inhibir la hemaglutinación originada por ciertos
virus. Si se hace reaccionar a un virus con capacidad de hemaglutinación con su anticuerpo
específico, este anulará su capacidad de hemaglutinación por bloqueo de las hemaglutininas
presentes en la envoltura del virión. La inhibición de la hemaglutinación es un método
diagnóstico utilizado con frecuencia, tanto para identificar virus, como para determinar la
presencia de anticuerpos específicos. Es necesario tratar los sueros para eliminar inhibidores
específicos de la hemaglutinación.
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Aspectos de seguridad e higiene
Materiales y reactivos
Equipo de microtitulación
Microplacas de 96 pozos de fondo en U
Microdilutores de 25 L
Pipeta automática multicanal con rango de 25 a 100 L
Puntas para pipeta automática estériles
Suero Humano tratado
Eritrocitos en solución de PBS al 85% (pollo, cobayo o de pato)
Antígeno (virus de la rubéola inactivado)
Solución salina de fosfatos pH 7.2 (PBS)
Procedimiento
1. Estandarizacíón de los eritrocitos 2. Tratamiento de los sueros
42
8. Reposar de 30 a 45 minutos a temperatura 9. Agregar 25 L de eritrocitos de
ambiente. pollo al 5% en cada uno de los
pozos.
1. Cita 3 virus con capacidad hemaglutinante diferentes a los que se mencionan en esta
práctica
Observaciones
Bibliografía
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PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Objetivo.
Determinar anticuerpos del tipo IgG o IgM contra Rubéola mediante la aplicación de un
inmunoensayo.
Fundamento teórico
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anticuerpos anti- Rubéola tipo IgM o IgG aparecen poco después del comienzo de los
síntomas. En neonatos los anticuerpos IgM pueden persistir durante más de un año y son
indicativos de infección congénita.
Materiales y reactivos
Procedimiento
1. El procedimiento dependerá del kit 2. Cada integrante del equipo deberá
comercial que se disponga y la marca. anotar en su bitácora el procedimiento
previo a la práctica.
4. Preparar los reactivos necesarios y solicitar 3. Solicitar el inserto del kit al técnico del
las micropipetas adcuadas laboratorio.
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Actividades de comprobación o evaluación
Observaciones
Bibliografía
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PROGRAMA EDUCATIVO: Químico Farmacéutico Biólogo
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Virología
Introducción.
Los citomegalovirus (CMV) es un virus con ADN de la familia de los herpesvirus, son
agentes infecciosos muy comunes en el humano ya que infecta a la mayoría de las personas
en alguna fase de la vida, el 80% de la población adulta en todo el mundo cuenta con
anticuerpos contra CMV, presentando una infección subclínica persistente, la infección es
asintomática, pero puede causar serias complicaciones; infección en el primer trimestre del
embarazo conduciendo a anormalidades en el feto y en pacientes inmunodeficientes.
Objetivo.
Determinar anticuerpos del tipo IgG anti -CMV Rubéola mediante la aplicación de un
inmunoensayo.
Fundamento teórico
El diagnóstico para detectar CMV puede realizarse por aislamiento del virus a partir de orina
y secreciones orales o genitales en cultivos de células diploides, el efecto citopático llega a
retardarse entre una a tres semanas. La detección de antígenos virales mediante anticuerpos
posibilita un diagnóstico rápido. El hallazgo de conversión serológica de los títulos de
anticuerpos detectados por el método de ELISA indica infección reciente. La determinación
de anticuerpos IgG anti CMV, es utilizada para establecer el contacto previo con CMV.
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Aspectos de seguridad e higiene
Materiales y reactivos
10. Incube el peine por 1 minuto en la línea E, y 9. Perforar la línea F, insertar el peine,
seque al aire. mezclar e incubar por 10 minutos, retirar
Actividades de comprobación o evaluación
Observaciones
Bibliografía
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