UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA
MICROBIOLOGÍA GENERAL II

UNIDAD 3. VIROLOGÍA
PRÁCTICA #1. AISLAMIENTO DE
BACTERIÓFAGOS

EQUIPO 12.
CONTRERAS PALACIOS XIMENA
GUERRERO IBARRA RICARDO
MEDINA ROJAS JULIO CÉSAR

ASESOR: QFB JOSÉ OSCAR GONZÁLEZ MORENO

 OBJETIVOS

Conocer e identificar un bacteriófago, un virus y el efecto de parasitismo

intracelular que producen en una célula hospedera.

Llevar a cabo el manejo y aislamiento de bacteriófagos.

Conocer las etapas de la reparación de los bacteriófagos.

 VIRUS

• Son parásitos intracelulares

obligados, de tamaños muy
pequeños (nm).

• Están constituidos por un ácido

nucleico (ADN o ARN, nunca
ambos) al interior de una cubierta
de proteína llamada cápside.
Algunos virus tienen una envoltura
de membrana.

• Contienen información genética

propia: dirigen su proceso de
replicación y su ácido nucleico
codifica para la síntesis de
proteínas.
 VIRUS

• Son capaces de multiplicarse,

pero necesitan de la
maquinaria metabólica de una
célula (hospedero).

• Son parásitos intracelulares

obligados. En su ciclo alternan
una fase extracelular inerte y
una fase intracelular activa.
CLASIFICACIÓN
DE LOS VIRUS
 CLASIFICACIÓN

VIRUS BACTERIÓFAGOS

Parasitan Parasitan

CÉLULAS CÉLULAS
EUCARIOTAS PROCARIOTAS
 DNA VIRUS
• Herpesviridae • Poxviridae
 RNA VIRUS
• Picornavirus • Hepeviridae
 ICOSAEDRICA
• Poliomaviridae • Papillomaviridae
 ICOSAEDRICA ENVUELTA
• Togaviridae • Flaviviridae
 HELICOIDAL ENVUELTA
• Paramyxoviridae • Rhabdoviridae
HELICOIDAL NO ENVUELTA
• VIRUS MOSAICO
DEL TABACO
COMPLEJO
• Poxviridae
 BACTERIÓFAGOS
• Líticos o virulentos: Tras la infección, su ácido nucleico se replica y
transcribe dentro de la célula hospedera y origina nuevos fagos que se
liberan cuando la célula se lisa.
BACTERIÓFAGOS LÍTICOS
 BACTERIÓFAGOS
• Lisogénicos o atenuados: permite que un fago se reproduzca sin matar a su
anfitrión. Una vez que el ADN del fago está dentro de la célula, se recombina
con una región particular del cromosoma bacteriano.
BACTERIÓFAGOS LISOGÉNICOS
 BACTERIÓFAGOS
• La mayoría de los fagos son puramente líticos o bien son capaces de
cambiar entre los ciclos lítico y lisogénico.

• En las condiciones apropiadas, el profago (ciclo lisogénico) puede

volverse activo y salirse del cromosoma bacteriano, lo que acciona el
ciclo lítico.

• ¿Cómo “decide” un fago entrar al ciclo lítico o lisogénico? Una mayor

cantidad de fagos que infectan conjuntamente hace más probable que la
infección utilice el ciclo lisogénico.
Los
COMPOSICIÓN
genomas de fagos pueden constar de ADN o ARN, y pueden
contener tan solo cuatro genes o tantos como cientos.

El genoma de los fagos puede ser RNA de cadena simple, RNA de

doble cadena, DNA de cadena simple o DNA de doble cadena.
La cápside (cabeza que rodea a las cadenas de ácidos nucleicos) de
un bacteriófago puede ser icosaédrica, filamentosa o en forma
cabeza-cola.

La estructura cabeza-cola parece ser exclusiva de los fagos y sus

parientes cercanos (y no se encuentra en los virus de eucariontes)
Las características más
TIPOS DE
BACTERIÓFAGOS
importantes que se consideran
para la clasificación de los fagos
son la MORFOLOGIA y el ÁCIDO
NUCLEICO, aunque el rango de
huésped que infectan también
influye.
 TIPOS DE
Las diferentes familias de fagosBACTERIÓFAGOS
se pueden agrupar en las
siguientes categorías morfológicas:

1) Fagos de simetría binaria, ADN

bicatenario y cola contractil.
Ej: fagos T-par
 Tipos de bacteriófagos

2) Fagos de simetría binaria, DNA

bicatenario y cola no contráctil.
Ej: fago lambda
 Tipos de bacteriófagos

3) Fagos icosaédricos sin cola y

de ADN bicatenario. Ej: ÞX174.
Tipos de bacteriófagos

4) Fagos sin cola, ARN

monocatenario.
 Tipos de bacteriófagos

5) Fagos filamentosos de ADN

monocatenario. Ej: fago fd de
E.coli.
1.- Tamaño - T4 está entre los
fagos mas grandes, tiene
aproximadamente 200 nm de
largo y 80-100 nm de ancho

2.- Cabeza o Cápside: La

cabeza o cápside está
compuesta de muchas copias
de una o más proteínas
diferentes
3.- Cola: La cola es un tubo
hueco a través del cual el
ácido nucleico pasa durante
la infección
 FAGOTERAPIA
HISTORIA

• 1896. Ernest Hankin, En muestras del río Ganges y Junna observó una
actividad antimicrobiana enVibrio cholerae, Sugirió la existencia de una
sustancia no identificada que pasaba a través de poros finos y era lábil al
calor.
 1915. FREDERICK TWORT

• Observó la presencia de
agentes filtrables y propuso
la hipótesis de que podrían
ser virus, no obstante debido
a diversas circunstancias,
algunas de ellas financieras,
Twort no continuó con sus
experimentos.
 FÉLIX D’HÉRELLE

• Tras aislar lisados libres de

bacterias de la materia fecal, las
bacterias eran destruidas por un
agente desconocido, invisible
capaz de destruir cultivos de
bacterias o producir pequeñas
áreas de color más claro cuando
las bacterias eran crecidas en
confluencia en placas de medio
sólido, y publicó sus
observaciones en el artículo
titulado, “Sobre un microbio
invisible antagonista de los
bacilos de la disentería.”
FAGOTERAPIA
• Otros estudios con fagos llevan a la identificación de las chaperoninas, a
la caracterización de transposones, al hallazgo de genes sobrelapados, a
la descripción de la retroalimentación negativa como mecanismo de la
regulación transcripcional y el uso de fagos reporteros para el diagnostico
medico. Por otro lado, el uso de los bacteriófagos como vectores en la
entrega de material genético a bacterias y la producción de proteínas
recombinantes, es una técnica que se sigue usando en nuestros días,
aunque la variedad de vectores que existe en la actualidad sea mucho
muy diversa
 BIOLOGÍA COMBINATORIA O “FAGO-
PANTALLA”
• En 1982, Renato Dulbecco
sugirió que péptidos
inmunogénicos bien
caracterizados de agentes
patógenos podrían ser
fusionados a las proteínas de la
cápside de un fago y la partícula
resultante (fago-pantalla, o
Phage-Display) podría ser usada
como componente principal de
vacunas libres de células.
 DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN BACTERIANA:

• La especificidad de los fagos

permite usarlos para la tipificación
de bacterias patógenas, los fagos
que se unen a las bacterias
pueden ser fácilmente
identificados por anticuerpos
marcados. De igual manera, los
fagos se pueden adicionar sobre
las muestras bacterianas, donde se
produzca una placa lítica, existe la
bacteria que el fago es capaz de
lisar y así es posible conocer la
identidad de la bacteria que esta
ocasionando la enfermedad.
• La situación actual de la fagoterapia:

• A pesar de que ya haya productos en el mercado, la

normatividad no es específica ya que no existe un apartado
para los bacteriófagos en México ni en Estados Unidos, sin
embargo las normas para productos biológicos y vacunas
virales, en ambos casos, dan las pautas que se deben
cumplir para lograr que éstos sean seguros, eficaces, puros
y confiables.
 EN LA PRÁCTICA

• Se busca: demostrar la capacidad

que tienen los virus de replicarse en
una célula hospedero.

• Fago virulento (proveniente de

moscas) + célula hospedadora de un
cultivo (Escherichia coli).

• Se observa un tapiz bacteriano sobre

el que aparecen pequeñas áreas
circulares claras que corresponden a
las placas líticas o “calvas“
(producción de fagos).
METODOLOGÍA
 BIBLIOGRAFÍA
• L. C. Junqueira, José Carneiro. Biología Celular y Molecular. Santiago, Chile: EDICIONES
McGraw – Hill Interamericana de Chile Ltda., 2007. 488 p.

• Gerald Karp. Biología Celular y Molecular conceptos y experimentos.México, D.F.:

Ediciones: McGraw-Hill Companies, 2009. 832 p.

• http://www.genomasur.com/lecturas/Guia01.htm

• http://www.duiops.net/seresvivos/virus.html

• http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/blog/cns!204AC1C68E772D5!1779.en
try?sa=345086851

• Biología molecular de virus: tópicos seleccionados Escrito por José Peñaranda

Valverde, Enfermedades infecciosas Escrito por Angela Restrepo M.

• http://www.solociencia.com/biologia/microbiologia-microorganismos-
clasificacion.htm