Alternativas para buscar microorganismos

1) Implica que el producto o proceso sea llevado a cabo por un microorganismo que ya haya
sido descubierto y que está almacenado en algún lugar; es decir es la selección de algo
preexistente.

2) Buscar en el medio ambiente un nuevo microorganismo.

¿Dónde voy a buscarlo?

a. Elegir el lugar de búsqueda según la característica del microorganismo buscado.

b. Elegir el protocolo de ‘’caza’’. Diseño del medio de cultivo para poner restricciones con el
fin de que se encuentre el organismo buscado y se elimine el resto.

Medio de cultivo

Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las

condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de
cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias. Un medio de cultivo es una fuente de carbono y energía, fuente de nitrógeno, fuente de
sales, contiene a su vez también, agua y agar. El medio de cultivo se calienta con el fin de que el
agar se disuelva, se lleva a una autoclave y se llega a un fondo semisólido que posee todos los
nutrientes descriptos. Para cultivar una muestra, se toma 1g de suelo y se disuelve en 200 ml de
agua, se agita el Erlenmeyer y se saca 1 ml; que luego se mezcla con 99 ml de agua; haciendo una
dilución 1:100 que puede repetirse n veces. Luego, se toma entre 0,1 a 0,2 con una lanza y se lo
desparrama en una capsula de Petri; la cual se la incuba en una estufa a 30ºC al revés, para que las
gotas de agua formadas debido a la respiración celular, no caigan sobre las colonias.

Técnicas de revelado

Se repite lo anterior en un medio de cultivo general, como puede ser la glucosa. Con una especie
de sello con terciopelo que se encuentra esterilizado (del mismo diámetro que la cápsula de Petri),
se lo apoya en la cápsula. Cada ‘’pelito’’ de terciopelo, pincha una colonia y la transfiere al mismo
lugar de una nueva caja de Petri, generando una copia. La caja original, la coloco debajo de una luz
ultravioleta, y con utilizo un microorganismo auxotrofo (solo es capaz de proliferar en un medio de
cultivo si a este se ha añadido alguna sustancia específica, que el tipo silvestre,
llamado protótrofo, no requiere, porque es capaz de sintetizarla.). Una vez detectado el
microorganismo, se lo guarda en el cepario.

Métodos de preservación

Agar bajo vaselina a 4ºC: en un tubo de ensayo, siembro el microorganismo en cuestión sobre
agar; luego se lo cubre con vaselina estéril (para evitar que se seque el agar, actúa como aislante y
evita el paso de oxigeno), por último se lo cierra con una tapa a rosca y se lo lleva a heladera a 4ºC
(se puede conservar así por un par de años).
Congelación: este tipo de técnica es típico para bacterias, levaduras y esporas de hongos
filamentosos. Se centrifuga para eliminar el líquido y así obtener la biomasa del organismo. Luego
se lleva a una solución crioprotectora (glicerol al 15%v/v), su función es la de disminuir el tamaño
de los cristales de agua una vez que se congela la misma. Afecta la velocidad de cristalización (se
debe tratar de congelar lo más rápido posible), en tubos pequeños llamados viales, dentro de una
solución de alcohol+hielo seco, agua+hielo+sal o acetona+hielo seco. Para realizar un
descongelado rápido, se lo sumerge en un baño caliente; generalmente entre un 80 y 90% de
microorganismo sobreviven. Tienen como ventaja el hecho de que es un muy buen método ya que
los microorganismos aguantan varios años, como desventaja es que hay que tener un freezer que
no se rompa, se debe evitar el corte de corriente y también es incómodo para el transporte.

Liofilización: se debe cultivar el microorganismo en un medio líquido, se centrifuga para eliminar

el mismo líquido y se suspende en la solución crioprotectora; se le suele agregar una mezcla de
proteínas como puede ser el suero equino. Se lo coloca en tubos que me permitan conectarlo a
vacío en un equipo llamada liofilizador, el cual produce frio para mantener congelada las muestras
y a la vez hacer vacío produciendo la sublimación del hielo. Es el mejor método para conservar
microorganismos, permitiendo su transporte, su desventaja es que hay que tener un liofilizador.