1.1.

Planteamiento del problema

La industrialización ha sido una de las características principales de la sociedad moderna, el
constante deseo del hombre de expandirse, buscar soluciones a los problemas actuales, dar un valor
agregado a una materia prima; lo ha llevado a desarrollar la industria como hoy la conocemos.
Desafortunadamente, todos los procesos industriales llevan consigo una cantidad de desechos
considerados contaminantes, que en su mayoría son vertidos a los cuerpos de agua convirtiéndose
en una amenaza no sólo para el ecosistema marino sino también para el hombre.

Uno de éstos contaminantes son los fenoles, compuestos solubles en agua, altamente inflamables,
corrosivos y con carácter tóxico, que en altas concentraciones pueden llegar a causar
envenenamiento. Éstos son considerados sustancias extremadamente peligrosas, por lo que surge
la necesidad de que sus niveles en los cuerpos de agua sean regulados.

En orden de ahorrar tiempo y disminuir costos en los análisis de rutina, los fenoles son comúnmente
monitoreados como fenoles totales y no de manera individual. Hoy en día existen diversas técnicas
que son utilizadas para el análisis de éstos contaminantes, el método estándar 5530C propuesto por
la Asociación de Salud Pública Americana, continúa siendo el más utilizado para la cuantificación de
fenoles presentes en aguas naturales y de desechos. Sin embargo, la principal desventaja de este
método es que su aplicación requiere de gran cantidad de solvente orgánico, reactivos y muestra,
que además son de gran impacto para el ambiente si no se disponen de manera adecuada.

En los últimos años, se ha fomentado la búsqueda de métodos analíticos que sean rápidos,
altamente sensibles, económicos y que disminuyan la cantidad de solventes y muestras; por lo cual
algunos investigadores han propuesto modernas metodologías que permiten minimizar el uso de
grandes volúmenes de solvente, manipulación de la muestra y tiempo de análisis, pero sobretodo
permiten eliminar las interferencias presentes en la matriz y al mismo tiempo preconcentrar los
analitos.

Dentro de las técnicas que han sido desarrolladas y aplicadas para la determinación de diferentes
analitos en diversas matrices ambientales, se encuentra la microextracción con gota directamente
suspendida. Esta técnica ha sido poco utilizada hasta la fecha, a pesar de su potencial utilidad en la
preparación de la muestra y flexibilidad en la escogencia de los parámetros operacionales además
de que ha sido poco combinada con sistemas espectrofotométricos, lo que la convierte en una
metodología ideal para la determinación de trazas en soluciones acuosas, como son los fenoles.

Con base a lo descrito, en la presente investigación surge la necesidad de validar un método

analítico que permita la determinación de fenoles totales en muestras de agua naturales empleando
la DSDME, en conjunto con la espectrofotometría UV-visible. Debido a que no se han encontrado
reportes en la literatura de la combinación de estas técnicas para la determinación de fenoles, esta
nueva metodología al ser validada le permitirá a la comunidad científica contar con una novedosa,
rápida y sencilla herramienta analítica para determinar este tipo de analitos en los cuerpos de aguas
o cualquier matriz ambiental.

A continuación, se presentan los objetivos realizados en la presente investigación. Siendo el

Objetivo general:
Validar un método analítico para la determinación espectrofotométrica de fenoles totales en
muestras de aguas naturales empleando la microextracción con gota directamente suspendida.

Y como Objetivos específicos

1. Establecer los parámetros de calidad del método analítico.
2. Evaluar la veracidad del método analítico empleando estudios de efecto matriz y recuperación en
muestras de agua del Lago de Maracaibo del Edo. Zulia.
3. Comparar los parámetros obtenidos con los reportados en el método estándar 5530C.

1.4. Delimitación de la investigación

Esta investigación se llevó a cabo en el Laboratorio de Análisis Químico-Electroquímica del
Departamento de Química del Ciclo Básico de la Facultad de Ingeniería de la Universidad del Zulia
(LUZ). Durante un período de 8 meses, desde enero hasta agosto del presente año y se requirieron
conocimientos de Química General, Química Analítica y Estadística.
2.1. Antecedentes de la investigación
Como antecedentes del presente trabajo, se tiene la investigación realizada por Nassiri y col (2014)
la cual proporcionó conocimientos sobre la utilización de una técnica de miniaturización alternativa,
tal como lo es la DLLME, para la determinación de fenoles en aguas de mar. Además proporcionó
información sobre la determinación de los parámetros de calidad del método propuesto como lo son
el límite de detección, límite de cuantificación y repetibilidad.

También se usó como base el trabajo realizado por Sánchez (2013), el cual describió el
procedimiento para la realización de la curva de calibrado para la determinación de hierro(III) e
información necesaria para realizar el estudio del efecto matriz.

Y la investigación realizada por Lavilla y col (2012) aportó información de la utilización de otra de las
técnicas de microextracción (DLLME) en conjunto con la espectrofotometría para la determinación de
fenoles y los parámetros de calidad, además de realizar comparaciones de los mismos con los
reportados por el método 5530C.

A continuación, se presentan las definiciones nominal, conceptual y operacional, a través de las

cuales se establecen los elementos identificados, cuantificados y registrados con el fin de alcanzar
los objetivos planteados.

2.3.1. Definición nominal

Validación de un método analítico para la determinación espectrofotométrica de fenoles totales en
muestras de aguas naturales empleando la microextracción con gota directamente suspendida.

2.3.3. Definición operacional

Para alcanzar el objetivo general de la presente investigación se requirió primero establecer los
parámetros de calidad del método analítico, Al conocer dichos parámetros, se evaluó la veracidad
del método analítico empleando estudios de efecto matriz y recuperación.
Una vez validado el método, se procedió a comparar los parámetros de calidad obtenidos, así como
los volúmenes de muestra, solvente extractor, agente oxidante y agente derivatizante del método
validado con los reportados en el método estándar 5530C.
2.3.2. Definición conceptual: a continuación se definirán conceptos básicos para un mayor
entendimiento del presente trabajo.

Validación: proceso por el cual se demuestra que los procedimientos analíticos empleados para una
prueba específica son aptos para el uso indicado. Los resultados obtenidos de la validación de un
método pueden ser usados para juzgar la calidad, confiabilidad y consistencia de los resultados
analíticos.

Método analítico: método de investigación que regula todos los detalles de la ejecución y de la
medición, incluyendo una descripción de cómo la muestra a ser medida debería ser obtenida y
preparada.

Espectrofotometría: la base de la misma consiste en medir la intensidad del color (o de la radiación

absorbida en UV) a una longitud de onda específica comparándola con otras soluciones de
concentración conocida (soluciones estándar) que contengan la misma especie absorbente. Para
tener esta relación se emplea la Ley de Beer, que establece que para una misma especie
absorbente en una celda de espesor constante, la absorbancia es directamente proporcional a la
concentración.

Fenoles: compuestos orgánicos cuyas estructuras moleculares poseen un anillo aromático, con uno
o más grupos hidróxidos incluyendo derivados funcionales. Desde el punto de vista de la estructura
química, son un grupo muy diverso que comprende desde moléculas sencillas como los ácidos
fenólicos hasta polímeros complejos como los taninos y la lignina (Martínez, Periago y Ros, 2000).

Microextracción con gota directamente suspendida (DSDME): técnica de extracción miniaturizada

que se deriva de la DSME y trabaja de manera bifásica donde una microgota de solvente orgánico se
encuentra suspendida de manera inmiscible en la superficie de una muestra acuosa mientras ésta es
agitada con un agitador metálico. Bajo condiciones apropiadas de agitación, el movimiento del
vórtice produce la formación de una gota en el centro de rotación manteniendo un equilibrio
mecánico y aumentando la transferencia de masa entre la fase acuosa y la gota; siendo los analitos
extraídos en la misma. Al pasar el tiempo de agitación, la gota de solvente es retirada con una
jeringa y analizada.
El desarrollo del presente trabajo estuvo basado en la investigación realizada por Portillo (2017),
donde se optimizaron las variables experimentales que afectan la formación del derivado fenólico así
como las variables de la DSDME.

Para la formación del derivado fenólico se realizó una optimización univariante obteniendo como
resultados (explicar tabla 1) mientras que para la DSDME fue necesaria una optimización
multivariante para determinar las variables que afectan de manera significativa la extracción, esta se
realizó con un diagnostico 25 y un diseño box behnken, siendo los resultados fueron tabla 2

3.1. Tipo de investigación

Este estudio se puede clasificar como descriptivo, ya que su objetivo principal es el de definir las
características de un fenómeno, siendo éste la caracterización del método analítico para la
determinación espectrofotométrica de fenoles totales en muestras de aguas naturales, donde se
especificaron los parámetros de calidad y de igual manera se determinó la veracidad del mismo,
empleando estudios de efecto matriz y recuperación.

3.2. Diseño de la investigación

En este estudio se utilizó un diseño experimental para la determinación espectrofotométrica de
fenoles totales en muestras de aguas naturales, manipulando de forma intencional la concentración
de fenoles (variable independiente) para determinar su efecto sobre la absorbancia (variable
dependiente), controlando las principales variables intervinientes como lo fueron la velocidad de
agitación, la temperatura, el tiempo de extracción y concentración de reactivos.

3.3. Técnicas de recolección de datos

En esta investigación se utilizó como técnica de recolección de datos la observación directa para
cumplir con el primer y segundo objetivo específico, observando de esta manera el desempeño del
método para la determinación de fenoles en muestras de agua.
Para cumplir con el tercer objetivo, la comparación de los resultados obtenidos con los reportados en
el método estándar 5530C, se utilizó como técnica de recolección de datos la observación
documental ya que se requirió la revisión bibliográfica para realizar la comparación entre los
métodos, seleccionando como parámetros de comparación el límite de detección, límite de
cuantificación, volumen de muestra, el volumen de reactivos y sus concentraciones (solución
amortiguadora, 4-AAP y oxidante), volumen del solvente extractor y el tiempo de preparación de la
muestra.