UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE

MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

CUAUTITLAN CAMPO 1

DEPARTAMENTO: CIENCIAS BIOLÓGICAS

SECCIÓN BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA

QUÍMICA INDUSTRIAL

ASIGNATURA: BIOQUIMICA MICROBIANA

REPORTE: PRÁCTICA NO. 7 “METABOLISMO DE

CARBOHIDRATOS”

GRUPO 1501 A,B,E

EQUIPO 10

ALUMNOS:

● AGUIRRE VEGA ALINA MARÍA

● RIVERA SANTANA MARIO
● DÁVILA RAMIREZ ERICK ALEJANDRO
● SOLIS MONTEBELLO DIANA JANNETH

PROFESORES:

 JONATHAN PABLO PAREDES JUAREZ

 MOISES MISSAEL MARTINEZ MEJIA

FECHA DE ENTREGA: 25/10/2018

INTRODUCCIÓN

Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgánica a partir
de elementos inorgánicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se encuentren, y
de ahí que en el interior de estos ocurran una serie de reacciones de síntesis y de descomposición
de sustancias orgánicas, las cuales reciben el nombre de metabolismo. A partir de estas
características metabólicas se realizan pruebas obtenidas para la identificación de
microorganismos y productos obtenidos de la relación microorganismo-medio. Otro de los
aspectos importantes de la realización de estas pruebas, es que a partir de estas ayudan a dar una
respuesta ante la posible contaminación de los alimentos por medio de microorganismos
patógenos. Las técnicas de bioquímica han proporcionado una herramienta útil para la detección
directa de los microorganismos contaminantes.

La identificación bacteriana se puede realizar por medio de una serie de análisis que necesitan de
diferentes cultivos y procedimientos para llegar a identificar las especies bacterianas que
contaminan los alimentos o las aguas. A continuación, se desarrollan diferentes técnicas para la
identificación de algunos microorganismos y productos obtenidos en la relación ya mencionada,
microorganismo-medio.

La capacidad de utilizar y transformar la energía es una de las propiedades fundamentales de los

sistemas vivientes. La energía puede hallarse en muchas formas, pero aprovechables a los
organismos vivos solo muy pocas. La energía mecánica se libera, por ejemplo, durante movimiento
celular, agitación de cilios y flagelos, y las alteraciones de la forma celular; la energía
electromagnética se encuentra en forma de radiaciones (la luz es la fuente de energía primaria
para los organismos sintéticos como las algas y las plantas), la energía térmica es producida por la
agitación molecular y, la energía química que es la contenida en los enlaces de sustancias y puede
ser liberada de los compuestos orgánicos e inorgánicos a través de ciertas reacciones.

Las reacciones químicas son acompañadas por cambios en el nivel energético. La energía
requerida para que una reacción inicie se llama energía de activación. Otros aspectos importantes
a considerar es la necesidad de la célula de poseer, además de catalizadores, una reserva de
energía, esta servirá para los procesos de síntesis celular y en la conversión de sustratos a formar
actividades. En la célula ocurre dos importantes y opuestos procesos, y la generación de energía y
utilización de ella en los procesos de síntesis celular, los cuales constituyen el metabolismo, este es
la suma de transformaciones de la materia que ocurre en el interior de las células y que da lugar a
la síntesis de material celular a partir de sustancias nutritivas.

El metabolismo puede dividirse para su mejor estudio en tres aspectos diferentes pero
íntimamente ligados; el catabolismo que es la suma de reacciones exergónicas que permiten
liberar la energía contenida en los nutrientes o sustratos y ser acumuladas en forma de ATP, u
otros compuestos, el metabolismo intermedio que es el conjunto de reacciones de los productos
de hidrólisis del catabolismo y algunos nutrientes son transformados en ácidos orgánicos, esteres
fosfóricos y otros compuestos como aminoácidos, y el anabolismo que es la parte del metabolismo
implicado en la síntesis e macromoléculas (ácidos nucleicos, proteínas, sustancias de reserva y
otros, todos reacciones endergónicas).

OBJETIVOS

 Realizar y analizar las diferentes técnicas de identificación bacteriana.

 Analizar los respectivos resultados y por medio de estos hacer una previa interpretación

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES Y REACTIVOS MATERIAL POR EQUIPO MATERIAL POR GRUPO

Medio de óxido fermentación 1 gradilla Tripies
Medio SIM 2 mecheros Fisher Tela de asbesto
Medio MIO 1 microscopio óptico Autoclaves
Medio Kigler Matraz 500 ml Balanzas granataria
Medio citrato de Simmons 2 pipetas de 10 ml Mecheros Fisher
Lugol 100 ml 20 tubos de ensaye con tapón
Peróxido de hidrogeno 30%
HCl
NaOH 1N
Rojo de metilo
Alfa naftol
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
RESULTADOS

Pruebas bioquímicas iniciales

Para Escherichia coli.

Tinción de Gram Prueba Oxidasa

Gram negativa Oxidasa negativa

Prueba de Catalasa

Catalasa positiva
Motilidad (Gota suspendida) Prueba de KIA

Positiva Acido/acido

Citratos Fermentación de carbohidratos

Negativo (no hubo cambios) Positiva en la Sacarosa, lactosa y dextrosa

MIO SIM
No hubo cambios solido color café

Indol + H2S +
Producción H2S – Cambio de color
Movilidad +/-

MR - VP

Positiva (MR)- Negativo (VP)

Bacteria 1: K-pneumoniac
Antes Despues (24hrs)

Bacteria 1: K-pneumoniac
Prueba Positiv Negativ Coloració Coloració Aerobi Anaerobi Anaerobi
bioquímica a a n inicial n final a a estricta a
facultativ
a
OIF √ verde azul √
SIM √ Amarillo Amarillo
CITRATOS √ verde verde √
MID √ Café Café
MR-VP √ Amarillo Amarillo
KIA √
FERMENTACIO √ Rojo Amarillo
N (LACTOSA)
FERMENTACIO √ Rojo Rojo
N
(SACAROSA)
FERMENTACIO √ Rojo Amarillo
N (ALMIDON)
FERMENTACIO √ Rojo Amarillo
N (DEXTROSA)
Motilidad:

movimiento browniano
m

ANÁLISIS DE RESULTADOS

E. Coli es una Gram negativa por lo que posee una membrana externa y periplasma donde se
sitúa el péptido glicano. Donde la membrana externa es una bicapa lipoprotéica.

Pared celular de bacterias Gram negativas.

Se observa bajo contenido de péptido glicano y alto contenido de lípidos en forma de

lipopolisacaridos, éstos lípidos son disueltos por el alcohol-acetona, lo que permite el escape del
complejo cristal violeta-lugol. La mezcla de alcohol-acetona es un disolvente orgánico que
decolora la pared bacteriana disolviendo el complejo cristal violeta-lugol. La safranina es un
colorante catiónico que tiñe las paredes bacterianas, ya que estas tienen compuestos cargados
negativamente, por consiguiente las bacterias Gram negativas como la E.Coli se tiñen de color
rosa.

Prueba oxidasa:
Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se
debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que es
reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie
bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo se encuentra en los
organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún
microaerófilo, pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.

E. Coli es oxidasa negativa, por lo que no posee un sistema citocromooxidasa. El que no la poseen
significa que no puede usar el oxígeno en la cadena de transferencia de electrones o aplican una
citocromo diferente para transferir electrones al oxígeno.

Prueba catalasa:

Se observó el burbujeo con la presencia de peróxido de hidrógeno, por lo que se puede inferir que
hay producción de oxígeno por lo tanto se entiende que hay presencia de la enzima catalasa. E.
coli es catalasa positiva.

Reacción de la catalasa.

Prueba de oxidación y fermentación (OF)

Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la vía fermentativa o por la vía oxidativa. Las
bacterias anaerobias los fermentan; las facultativas pueden fermentarlos o degradarlos
oxidativamente; las aerobias estrictas sólo pueden oxidarlos.

Por lo tanto E. Coli es : es una bacteria anaerobia

Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que producen ácidos a partir de
glucosa. Detecta la fermentación ácido-mixta. Se acumulan ácidos (acético, fórmico, etc.),
relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta
añadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo. Positivo para E. Coli.

Prueba de Voges– Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la producción de acetil-metilcarbinol

(acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosférico. El diacetilo es
convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de α-naftol y creatinina. La
producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico, donde se
producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar una prueba
RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las especies de la familia Enterobacteriaceae son VP
positivo y RM negativo y viceversa. Esta prueba es negativa para E. coli.

MIO

Se utiliza para la identificación de entero bacterias sobre la base de movilidad, la producción de

ornitina descarboxilasa e indol.

Descarboxilación de ornitina: mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un

aminoácido para formar una amina, por su alcalinidad.

Producción de indol: El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias
para formar metabolitos:indol, escatol e indolacético. E. Coli es un indol positivo.

En Movilidad +/- y no produce H2S.

Movilidad: Determina si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por
medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos.

Prueba citrato:

La prueba de citrato se realiza para conocer el género de las Enterobacterias.

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el
metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.

Por lo tanto E. Coli es : es una bacteria que no necesita citrato como única fuente de carbono

Motilidad (Gota suspendida)

La motilidad se puede observar por un crecimiento turbio lejos de la picadura realizada en la

inoculación de los medios OF o en un medio SIM, este método es de confianza variable ya que la
picadura se pudo haber hecho chueca o irregular lo que nos darian falso positivo. Para evitar este
factor se realiza la técnica de gota suspendida bacteriana.

En E. Coli se observó la motilidad de las bacterias, por medio de la técnica de gota suspendida.

Prueba KIA:

Es un medio de cultivo utilizado para la identificación de enterobacterias, en función de su

capacidad para:

 Fermentar glucosa
 Fermentar lactosa
 Producir gas a partir de la fermentación
 Producir hidrógeno sulfurado
Por lo tanto E.Coli es: Kligler Ácido/Acido: amarillo en el taco (fermenta glucosa) y amarillo en el
bisel (fermenta lactosa) Es un anaerobio facultativo.

Producción de ácidos de la glucosa (no de la lactosa) En la superficie del medio las enterobacterias
respiran consumiendo la glucosa: Cuando la agotan (solo tiene 0.1%) consumen los péptidos y se
alcaliniza el medio (lsuperficie rosa). En el fondo las enterobacterias fermentan la glucosa
produciendo ácidos (fondo amarillo).

Producción de SH2 (color negro): la bacteria ha realizado una respiración anaerobia utilizando el
tiosulfato como aceptor de electrones; el tiosulfato se convierte en SH2 que con el Fe3+ origina
S3Fe2 (color negro)

Fermentación de Carbohidratos:

Determinar la capacidad de un organismo de fermentar un carbohidrato incorporado a un medio,

produciendo ácido y/o gas en una campana de Durham; el medio es líquido y como indicador
contiene rojo de fenol.

Es la capacidad de un organismo de fermentar un carbohidrato incorporado a un medio,

produciendo ácido y/o gas en una campana de durham; el medio es líquido y como indicador se
tiene el rojo de fenol.

El bacillus cereus en presencia de manitol, lo que provoca que no haya una producción de gas, la
prueba de fermentación de carbohidratos la consideramos resultado negativo.

e. Coli es: Positivo: El medio se ve amarillo, igual a la producción de ácidos a partir de la

fermentación, igual a la utilización de carbohidratos. Puede haber una producción de gases
(acumulación de gases en el tubo de Durham.

CONCLUSIÓN

Una identificación bacteriana se puede realizar tras el estudio de las características tintoriales,
morfológicas y bioquímicas de los microorganismos. La identificación bioquímica se fundamenta
en las características metabólicas específicas de cada microorganismo, en la detección de la
actividad de ciertas enzimas, etc. Al igual que la mayor parte de los seres vivos, las bacterias son
capaces de modificar el ambiente que las rodea, captando sustancias necesarias para su
multiplicación y liberando al medio producto de desecho, enzimas, exotoxinas, etc. Las
interacciones que cada tipo bacteriano establece con el entorno son propias y características.

BIBLIOGRAFIA

MacFaddin Jean F. (2000). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia

clínica. 3ª edición, Editorial Medica Panamericana.: Montevideo, Uruguay.

Tortora, Gerard J (2004). Introducción a la Microbiología (8va edición). Pearson Prentice Hall. Pág.
293-300.
Prats Guillen. (2005). Microbiología Clínica. 1ª edición, Editorial Medica Panamericana.: Buenos
Aires, Argentina y Madrid, España. Pág. 204-210.

Winn, Allen, Janda, Koneman, Procop, Schreckenberger y Woods. (2006). Diagnostico

microbiológico. 6ª edición. Editorial Panamericana.: Buenos Aires, Argentina. Pág. 618- 630.