FACULTAD de: MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOLOGIA

CURSO: BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

PROFESOR: ROGER IZIGA GOICOCHEA

INFORME DE PRÁCTICAS

PRACTICA N°: 8, 9 y 10

INTEGRANTES:

 JACK MORALES MORI

 MARCO CARHUAVILCA PAREDES
 ARIANA CUYA RAMIREZ

HORARIO de PRÁCTICAS:

DIA : Martes

HORA: 12:10 - 2:00 pm

FECHA de REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 03/10/2018

FECHA de ENTREGA del INFORME: 15/06/2018

LIMA – PERU
 ÍNDICE

PRESENTACION………………………………………………………………………..

INTRODUCCIÓN……………………………………………………………3

MARCO TEÓRICO…………………………………………………………

OBJETIVOS……………………………………………………………………4

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL………………………………………………..6

RESULTADOS……………………………………………………………………………….9

DISCUSIÓN DE RESULTADOS………………………………………………………..7

CONCLUSIONES……………………………………………………………………………12

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………………….14

2
 Este informe abarcará los siguientes temas: Extracción de ADN, Fundamentos de la

reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y Fundamentos de la Electroforesis, de los

cuales se dará una explicación detallada en separado de cada uno de los temas

mencionados, se presentarán los resultados obtenidos en el laboratorio y asimismo

se hará una comparación de los resultados obtenidos los cuáles se encontrarán en la

discusión de resultados de cada tema.

3
 EXTRACCIÓN DEL ADN

INTRODUCCIÓN:

La biología molecular es una de las herramientas más útiles de las que se vale la ciencia y la
medicina moderna, La extracción de ADN es un tipo de metodología que mediante la
manipulación del material genético ha permitido, entre otras cosas, el desarrollo de la clonación
de secuencias de ADN para el estudio de mutaciones que estén involucradas en las diferentes
patologías humanas, mapeo y secuenciación de genes con fines terapéuticos. Con este
conocimiento se logra el desarrollo de la terapia génica, el análisis de diversidad molecular de
especies, análisis forenses y de paternidad.

El ADN:

El constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que

deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que
forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee
una parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.

Está formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez están formados -D
desoxirribosa y un ion fosfato. La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a
los poli nucleótidos.

La calidad del ADN constituye un elemento crucial para esta técnica, la cual necesita un método
de extracción de ADN lo más estandarizado posible con el que se obtenga un ADN puro, no
degradado, libre de ARN y de inhibidores de la reacción en cadena de la polimerasa: porque
cambios en la pureza afectan los perfiles de amplificación y esto se manifiesta en la presencia de
bandas falsas y en la poca reproducibilidad del ensayo.

Cuantificación del ADN total: La cuantificación del ADN se realizará

mediante espectrofotometría utilizando el rango de luz UV. Debido a los
anillos presentes en las bases nitrogenadas del ADN.

http://www.danagen.es/wp-content/uploads/2013/08/DANAGENE-SPIN-BL

4
 Objetivos:
• Extraer ADN a partir de muestras biológicas.
• Conocer las diferentes técnicas de aislamiento del ADN.
• Analizar cada proceso de la técnica de aislamiento del ADN.

MATERIALES:

Kit de extracción de ADN

5
Micropipetas de 20-100, 100-1000
micro litros.

Puntas de 10-100 micro litros y de

100-1000 micro litros

6
Microcentrifuga 16000 rpm

Vortex

7
Qubit Kit (Cuantificación de ADN)

Tubos de PCR (250 micro litros)

8
PROCEDIMIENTO:

▪ EXTRACCIÓN DE ADN DE SANGRE

1. En un tubo de spendorff, se adiciona 20 μl de la muestra de sangre.

2. Se transfiere 20 μl de sangre en un tubo que contiene 20 μl de proteinasa K

9
3. A la muestra, se le añade 20 μl de RNasa.

4. Luego, se somete a vórtex por 15 segundos y se incuba a temperatura ambiente por 2

minutos.

5. Se añade 200 μl de Buffer lisis y se homogeniza con el vórtex por 15 segundos.

6. Se coloca la muestra anterior, en la incubadora, a 55 °C durante 10 minutos.

10
 7. Se añade 100 μl de etanol 96-100% y para la mezcla en el vórtex por 5 segundos.

8. Se incuba la lisis por 5 minutos a temperatura ambiente.

▪ PARA EL PROCESO DE PURIFICACIÓN:

1. Se coloca la solución Genomic Lysis/B Buffer (200 μl) en tubo spin colum.

11
2. Se centrifuga la columna a 1000 g por un minuto.

3. Luego, se suprime el collection tub y se coloca a un nuevo Pure Link Collection tube.
4. Se adiciona 500 μl del Wash Buffer 1 y se centrifuga a 10 000 g por un minuto, y se
suprime el collection tube.
5. Se coloca un nuevo Pure Link Collection, adicionando 500 μl del Wash Buffer 2.
6. Se centrifuga a velocidad máxima por 3 minutos

12
 7. Se descarta el Collection Tube y se coloca un tubo de eppendorf de microcentrifuga nuevo
(cortar la tapa).
8. Se añade 25-200 μl de la solución Genomic Elution Buffer (el volumen dependerá de cuán
concentrado se desea la muestra).
9. Se deja actuar durante 1 minuto a temperatura ambiente.
10. Se centrifuga a máxima velocidad por un minuto.

11. Se cuantifica el ADN extraído.

12. Se guarda el ADN extraído a – 20°C.

 EXTRACCIÓN DEL ADN MEDIANTE

RESINA CHELEX - 100

1. Colectar una muestra de tejido, sangre

o raspado bucal en un tubo ependorf
de 1,5 ml conteniendo 500 μl de buffer
TE, dejar reposar por 2 min.

13
2. Resuspender las células con toque de vortex por 3 min.
3. Al pellet celular obtenido se le adiciona 500 μl de una solución de resina Chelex- 100 al
10%. Se agite en un vortex por 3 min.

4. Dejar incubando a 55ºC en agitación continua durante 30 min.

5. A continuación, la mezcla se introduce durante 10 min a 100ºC para intensificar la desnaturalización
de las proteínas.
6. Agitar en el vórtex por 30 seg y se centrifuga a 10000 rpm durante 5 min

14
 7. Extraer el sobrenadante donde se encuentra el ADN (fase acuosa) y trasladarlo a otro tubo ependorf,
en la parte inferior se encontrará la resina Chelex-100, las proteínas desnaturalizadas y otros
elementos.
8. El tubo ependorf conteniendo el sobrenadante se guardará en un congelador a -20ºC.

RESULTADOS:

DISCUSIÓN Y ANALISIS:

Al realizar la extracción de ácidos nucleicos, la pureza y calidad del ADN obtenido

constituyen variables importantes a tener en cuenta, principalmente en la detección
de PCR.

Para determinar la calidad y cantidad del ADN extraído, las muestras fueron
evaluadas en un espectrofotómetro a 260 y 280 nm para determinar la
concentración de ADN y de proteínas, respectivamente; además, la relación a
260/280 fue calculada. Los análisis espectrofotométricos también permitieron
evaluar la cantidad de ADN en cada muestra.

Según Alejos L., Aragón M. y Cornejo A y estamos de acuerdo con él, cuando
menciona que: ”la aplicación de técnicas moleculares inicia con la extracción de
ADN y la obtención exitosa de datos confiables y reproducibles depende, en gran
medida, de la extracción de ADN íntegro y puro”, ya que nosotros en la práctica
también nos aseguramos de tener el ADN puro ya que los resultados podrían variar.
Al momento de pre etapas de tratamiento, en el cual agregamos la proteína
quinasa K, ahí vamos a obtener la degradación de histonas que se encuentran ahí.
Y al añadir el buffer lisis vamos a obtener la lisis de la célula dejando a la ARN
desnuda.

En la purificación obtenemos la precipitación del ADN, debido al alcohol.

15
Para la cuantificación del ADN se dio el análisis de la absorción UV, ya que los
nucleótidos poseen máximos de absorción alrededor de 260 nm (por ejemplo,
dATP: 259 nm; dCTP: 272 nm; dTTP: 247 nm). Este método nos proporcionó una
estimación simple y precisa de la concentración de una muestra, pero sólo si ésta
se encuentra pura, sin contaminación significativa de proteínas o solventes
orgánicos que absorben a longitudes de onda cercanas.

CONCLUSIÓN:

La electroforesis en gel es una técnica sencilla empleada de forma rutinaria en

laboratorio para separar moléculas biológicas especialmente ADN, ARN y
proteínas. La electroforesis también es una técnica habitual en el laboratorio clínico.
La tinción del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia, permite observar el
resultado de ésta migración. En nuestro caso se utilizó un método de tinción NO
TOXICO. El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos
con el patrón de bandas que se obtuvo de marcadores comerciales de peso
molecular conocido.

FUNDAMENTOS DE LA REACCIÓN EN CADENA DE

POLIMERASA (PCR)
INTRODUCCIÓN:

La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas siglas en ingles es PCR(Polymerase Chain

Reaction) es una técnica muy usada en el campo de la biología molecular la cual fue desarrollada
por Kary Mullis en 1986.El objetivo de esta técnica es obtener un gran número de copias de un
fragmento de ADN particular mediante una amplificación in vitro. Es una técnica de amplificación
selectiva, la cual se basa en la capacidad de la enzima ADN polimerasa en fabricar una cadena
de ADN complementaria a una ya existente.

Cada ciclo de PCR tiene 3 etapas:

 La primera (Desnaturalización) donde el ADN molde es incubada a altas temperaturas

para ser desnaturalizarlo y de esta manera permitir el fácil acceso de los cebadores al ADN
molde. En esta etapa, las cadenas de ADN son calentadas y separadas a una
temperatura de 95 °C durante 20-30 segundos; el tiempo depende de la
secuencia del templado, es decir, si la cantidad de G-C es alta, será necesario
más tiempo para romper sus uniones debido a que el apareamiento de estas
bases está formado por tres enlaces, uno más que las bases de A-T. Además,
16
 depende de la velocidad en la que el termociclador aumenta la temperatura,
esto varía de acuerdo al modelo del equipo. Al final de esta etapa tendremos
las cadenas separadas que servirán como templado para el siguiente paso.
 La segunda etapa o de alineamiento, donde los cebadores hibridan con su secuencias
complementarias de ADN molde. En esta etapa, los primers se alinean al extremo
3’ del templado previamente separado e hibridan con su secuencia
complementaria. Para que se forme el complejo templado-primers, es
importante que la temperatura de hibridación o temperatura melting (Tm) sea
la óptima; ésta generalmente va de entre 50-60 °C. Si el diseño de los primers
es el correcto y la temperatura es la adecuada, la estabilidad y especificidad
del complejo será eficiente.
 Por último, a etapa de elongación en la cual el ADN polimerasa sintetiza de los fragmentos
de ADN a partir de los cebadores que ya se han alineado. En esta etapa, la Taq
polimerasa actúa sobre el complejo templado-primers y empieza su función
catalítica a una velocidad muy rápida; agrega dNTP’s complementarios para
crear las cadenas completas de ADN. La extensión de las cadenas es en
dirección de la síntesis del ADN, es decir, de 5’ a 3’. La temperatura óptima
para la reacción es de 72 °C, ya que a esa temperatura la enzima es
funcional. Al final del ciclo, se habrán formado los amplicones con un tamaño
dictado por el número total de pares de bases (pb) que deberá ser conocido
por el investigador.
En PCR, el ácido desoxirribonucleico (ADN) es el analito. Por tanto, una buena muestra implica
siempre un correcto proceso de obtención de esta molécula a partir de material biológico. La
extracción de ADN consta de una etapa de lisis, que consiste en romper las estructuras que
confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido y otra de purificación, que implica la retirada
de la solución final de la mayoría de elementos que pueden interferir en la PCR. De los tres pasos
críticos que componen el análisis de patógenos por PCR, la extracción de ADN es quizás el más
desconocido y sobre el que más control podemos ejercer.

Es por eso que el PCR es una herramienta que se ha desarrollado para ofrecer una alternativa
para el estudio del ADN. Debido al impacto dentro de la comunidad científica porque ofrece las
siguientes cualidades:

 Sensibilidad: Hace referencia a la mínima cantidad de ADN que es necesario para que se
produzca la amplificación.
 Especificidad: solo se obtiene un solo producto amplificado.
 Eficiencia: amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de
ciclos.
 Fidelidad: se refiere a los errores que comete el ADN polimerasa durante la amplificación.

 Objetivos: :
• Conocer los fundamentos en lo que se basa la técnica de PCR.

17
 • Conocer la importancia del uso de la técnica de PCR para el diagnóstico de enfermedades
en los seres humanos.
• Explicar cómo se genera un fragmento específico de ADN genómico humano utilizando la
técnica de PCR.
•

•
•
•
•
•
•
• MATERIALES:
•

Micropipetas de 20-100, 100-

1000 micro litros.

18
Puntas de 10-100 micro litros y
de 100-1000 micro litros

Microcentrifuga 16000 rpm

19
Termociclador

Agua estéril

20
Tubos ependorf de 1,5 mL

Muestras de ADN

21
 Mix de Pcr (taq polimerasa,
dNTPs, primer, Mg, agua)

Primers Alfa tubulina y Beta

tubulina

PROCEDIMIENTO:

22
1. En un tubo de PCR, se coloca 25 μl de solución de reacción final (mix PCR).

2. Se centrifuga para la mezcla de los componentes.

3. Se coloca los ependorf con la solución de mix de PCR en el termociclador, el cual está
programado en las siguientes condiciones:

23
 4. Se finaliza el proceso de amplificación con el retiro de los ependorf del termociclador y el
almacén de las muestras a 4°C, si la amplificación se utilizó en un lapso de corto tiempo. Si
no fue el caso se mantiene a -20 C°.

RESULTADOS:

Algunos de los amplificadores avanzaron más que los otros, esto dependiendo de los pares de
bases que contenían, es decir, a mayor número de pares de bases que contendiera la muestra,
era mayor su avance por la cámara de electroforesis, esto debido a los pesos moleculares de
cada muestra y como ya sabemos las muestras de mayor peso molecular tendían a avanzar más
hacia el polo positivo de la cámara de electroforesis y las de menor tamaño se retendrán en el
polo negativo.

DISCUSIÓN Y ANALISIS:

Según Pulido N.(8), en su especialización de biotecnología, la PCR es considerada un técnica

biotecnológica cuya finalidad es la amplificación o reproducción in vitro de un número de copias
de una región, especifica de ADN y su evaluación de estos cobra gran valor e importancia según
su aplicación .Eso se pudo observar en nuestro caso ya que la PCR utilizada tuvo la finalidad de
obtener muchas copias de ADN.Y sabemos que, en la fase de desnaturalización llevada a cabo a
los 94ºC , se logró desnaturalizar la doble cadena de ADN y destruir las estructuras secundarias
de ADN, y esto permitió el acceso de los premier a la cadena molde en sus secuencias
complementarias.
24
En la segunda fase, alineación a 52ºC, obtuvimos la hibridación de la mayoría de los iniciadores,
esto quiere decir que se generó una energía necesaria para que los iniciadores busquen en la
cadena de ADN su secuencias complementarias y así, estos formaron los puentes de hidrogeno
con la cadena molde, dejando el extremo 3OH disponible y listo para la adición de los nucleótidos
consecutivos por la ADN polimerasa.

En nuestro caso utilizamos la taq polimerasa en el cual tenemos que la temperatura más usada
es de 72ºc, aquí se da la extensión, en donde se produce la temperatura óptima para la ADN
polimerasa, donde incorpora nucleótidos complementarios a partir del extremo 3’ libre de la región
en que han hibridado los premiers.

Al momento de terminar los ciclos designados para el PCR, manteniendo la temperatura de 72ºc
por 5 minutos, la cual va a hacer que la polimerasa termine la extensión de los productos a los
cuales se encuentra unida.

Y finalmente, durante la programación de los ciclos de la PCR, programamos también un ciclo

final de 4ºC de temperatura durante varias horas, lo cual nos ha permitido conservar los productos
de PCR hasta que se retiren los tubos de reacción del equipo. La especificidad de la PCR
depende, de la temperatura empleada en la fase de hibridación y de la cantidad de iones
divalentes que se incorporan a la reacción y la secuencia de los premiers. Por una parte, cuanto
mayor sea la temperatura utilizada en la fase de hibridación, más específica es la reacción. Esto
se debe a que a mayor temperatura más dificultada se ve la unión entre el cebador y la cadena
molde; en condiciones de temperaturas de hibridación elevadas el cebador sólo se unirá a la
cadena molde si son complementarios en todos sus nucleótidos. Por otra parte, en un
determinado rango, incrementos en la concentración de MgCl2 hacen disminuir la especificidad
de la reacción; los iones facilitan la unión del cebador a la cadena molde y permiten la
incorporación de los nucleótidos a la cadena creciente.

En principio, con poca cantidad de DNA molde se obtendrá producto de amplificación, ya que la
PCR es muy sensible; dado que en cada ciclo se duplica la cantidad de DNA correspondiente al
fragmento a amplificar, aunque existió poco molde inicial, se generó la cantidad suficiente para
ser visualizada.

CONCLUSIÓN:

La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es una técnica fundamental para la mayor parte
de las aplicaciones de la biología molecular. Se ha presentado la base teórica y práctica de la
PCR. Existen muchas variantes de la PCR convencional. Existe gran cantidad de información
referida tanto a la PCR convencional como a sus variantes.

El PCR es una técnica muy útil, ya que nos permite obtener un gran número de copias a partir de
ADN particular.

25
 En conclusión, la PCR es una nueva herramienta de investigación y diagnóstico de laboratorio muy
potente que abre todo un nuevo mundo de posibilidades. Su aplicación ha de ser limitada a aquellos casos
o estudios que lo permitan.

FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS
INTRODUCCIÓN:

En biología molecular, una gran cantidad de técnicas que se realizan comúnmente requieren el
uso de la electroforesis, por lo que supone una parte importante del procedimiento sistemático del
análisis (separación, purificación, preparación) de los ácidos nucleicos y las proteínas. La mayoría
de las biomoléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el
que se encuentran; como consecuencia, pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un
campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula. A diferencia de las proteínas,
que pueden tener una carga positiva o negativa, los ácidos nucleicos sólo poseen carga negativa,
debido a su esqueleto de fosfatos. Por lo tanto, en una electroforesis, los ácidos nucleicos
migrarán hacia el polo positivo; es decir, el ánodo. En el caso de las proteínas se realiza
pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga
negativa; con ello se homogenizan las proteínas de la muestra y todas migrarán hacia el polo
positivo, y sólo se separarán por tamaño.
El principio de la electroforesis consiste en la migración proporcional de las moléculas a través de
un gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o tamaño; movimiento generado por
el campo eléctrico.

https://www.mindomo.com/es/mindmap/mapa-809101055f4b4309a4c52449d602b4ee

26
 Objetivos: :
• Apreciar la técnica de electroforesis en gel.
• Comprender los conceptos que están involucrados en la separación de ácidos nucleicos en
una corrida electroforética.
• Observas la muestra de ADN aislada de la práctica anterior

MATERIALES:

Muestra de ADN obtenida de la

práctica anterior.

Micropipetas para volúmenes de

0,5 – 20 micro litros.
.

27
Marcador de peso molecular

Cámara de electroforesis y
accesorios (peines, soporte,
tabla niveladora, etc.)

Fuente de poder.

28
Gradillas para tubos de 1,5 micro
litros.

Puntas para volúmenes de 0,5 –

20 microlitros.

Guantes

29
Agarosa al 2%

Buffer Tris – borato – EDTA IX

(TBE) Ph 8-8,3

30
Buffer carga para ADN

Colorante Syber Green

31
 Transiluminador de luz UV

PROCEDIMIENTO:

1. Se prepara 50 ml de agarosa al 2% y se adiciona 20 μl de colorante y se deja

polimerizar por 10 minutos.
2. Se sumerge el contenido de los geles polimerizados en la cámara electroforética (con
los pocillos de gel bien asegurados) con el buffer TBE IX para ADN.
3. En la superficie de un pedazo de lámina extensible de parafilm, se prepara una mezcla
de 5 μl ADN con 1μl de buffer de carga repartida en alícuotas de acuerdo al número de
muestras que se colocarán en los pocillos.
4. Con el uso de puntas de 20 μl se procede a cargar cuidadosamente la muestra en los
pocillos del gel de agarosa evitando la contaminación del pocillo anterior.

32
5. Finalizada la colocación de las muestras ADN en los pocillos, se cubre el tanque con la
tapa y se conecta los cables de los electrodos en la fuente de poder.

6. Se enciende la fuente de poder y se procede a seleccionar el voltaje entre 75 a 120

voltios, para la iniciación de la electroforesis.

7. Se evidenciará dos frentes de corrida de diferente color y distancia de migración.

8. Ambos colores, azul oscuro y azul claro corresponden a los colorantes azul de
bromofenol y xilenecianol, que conforman el buffer de la muestra.

33
9. El xilenecianol en geles de agarosa al 2% migra de manera similar a un fragmento de
ADN de 160 pares de base (pb), mientras que el azul bromofenol es equivalente a un
fragmento de 45 pb

10. Luego, se procede al desmontaje del equipo con la desconexión de los electrodos de la
fuente de poder, removiendo el sistema que contiene el gel de agarosa.

34
11. Se remueve el gel de soporte con mucho cuidado, ya que se puede romper.

12. Se desplaza el gel hacia el transiluminador para el revelado.

13. Se enciende el equipo y se verifica que esté a una longitud de onda de 420
nanómetros.

14. Se deja hasta que empiecen a aparecer bandas y se registra el resultado.

35
RESULTADOS:

Electroforesis de ADN en Geles de Agarosa

Imagen Descripción
1.

Gel de agarosa al 1 % preparada.

2.

Introducción y corrida de las

muestras de ADN animal y
vegetal.

3.

Final de Corrida de las Muestras

(ADN).

36
 4.

Muestra de ADN vista desde un

espectrómetro UV-visible

DISCUSIÓN Y ANALISIS:

 La presencia de una banda fluorescente en el carril del gel correspondiente a la muestra nos
permite verificar la presencia de material genético en la muestra del grupo, además se obtuvo una
concentración de 13.019 de DNA en cuestión lo que refleja que hubo una buena extracción del
DNA.

 Aunque hubo una buena extracción del DNA, el cociente 260/280 (A260) dio como resultado
1.750. Siendo el umbral de pureza mayor >1,8, se puede decir que la muestra no era DNA puro y
por consiguiente una buena parte de la concentración mencionada anteriormente está
determinada por proteínas externas al DNA.

Según M. Somma,(13) y estoy de acuerdo con que, la electroforesis en gel de agarosa es un

método normalizado que se utiliza para separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. Se
trata de una técnica sencilla y rápida que permite diferenciar fragmentos de ADN que no pueden
separarse adecuadamente con otros procedimientos.

El desplazamiento de los ácidos nucleicos se debe a la carga eléctrica tomada por estos según el
pH presente en la solución del gel. Los geles (poliacrilamida o la agarosa) se colocan en la cubeta
de electroforesis, sumergidos en un tampón de pH alrededor de 8. De esta forma, las moléculas
de ADN sometidas a electroforesis se desplazarán al polo positivo ya que a pH superiores a 5
poseen carga negativa. (Padilla C.)(14)

La utilización de colorantes fluorescentes actúan mediante inserción entre las pares de bases que
conforman el ácido nucleico. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualización
37
 de ADN y es este un reactivo altamente toxico. Sin embrago en la actualidad existen colorantes
fluorescentes alternativos, como SYBR Safe, SYBR Gold, SYBR Green I, Vistra Green y Syto60,
desarrollados específicamente para reducir los riesgos. (Duque, 2009)(15).

En nuestra práctica de laboratorio salió errónea la electroforesis, pero según nuestras

investigaciones se debió utilizar el SYBR Green que sirve como fluorescente no toxico.

Tenemos también, que según Berth M, en 2007, la electroforesis es uno de los métodos de
cuantificación más utilizados para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un
campo eléctrico. Coincido con Berth M., ya que, utilizamos la electroforesis para cuantificar la
separación de moléculas de la muestra anterior obtenido por la extracción de ADN .

CONCLUSIÓN:

 En la práctica de laboratorio de genética se pudo efectuar correctamente la electroforesis en el de

agarosa para la visualización del DNA, ya que al observar la electroforesis bajo luz fluorescente
su puede ver una banda fluorescente en el carril lo cual es debido a la presencia de material
genética en la muestra del grupo.

 El entendimiento del fundamento teórico de la electroforesis y su adecuado procedimiento son

claves para desarrollar de manera correcta la técnica de separación molecular de ácidos
nucleicos (Electroforesis en gel de Agarosa), ya que un mal manejo de los insumos o de los
equipos pueden generar un error que afecte el resultado final.

 La electroforesis en gel de agarosa es una de las técnicas más adecuadas para la visualización
del DNA, ya que además de ser fácil su preparación, es fácil de visualizar el DNA ya que solo es
necesario colorearlo con un colorante fluorescente como el bromuro de etidio y el Sybergreen,

para posteriormente someterlo a una luz fluorescente y de esta manera visualizar el DNA.

La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes muestras

biológicas. Así por ejemplo se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a
individuo enfermo, para la identificación de ácidos nucleicos de agentes infecciosos o para la
obtención de un fragmento determinado de ADN que, una vez localizado en el gel, puede ser
extraído para análisis posteriores.

Hemos llegado a la conclusión que el gel de agarosa permitió un tiempo de análisis más corto para la
rutina de electroforesis.
38
CONCLUSIÓN FINAL:

A partir de todo lo antes expuesto podemos decir que todo este proceso es muy
eficaz para poder determinar , seleccionar un gen especifico del ADN el cual lleva la
información de cada ser vivo , el más profundo acerca de él nos abrirá las puertas a
lograr avances históricos Estos tres procesos se complementan entre si ya que al
final se obtiene la muestra del gen que queríamos identificar y ver si estaba
correctamente formado, es necesario que conozcamos estos procesos
especialmente en la ciencias de la salud ya que nos permiten descubrir nuevas
enfermedades o el mejor conocimiento de las que existen y en consecuencia un
mejor tratamiento.

REFERENCIAS

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que te pasen los resultados de extracion de adn
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