UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD

FASE II

Diseño y construcción

Estudiante

Lady Johanna Cubillos Vaca

Jhon Henry Barrios Velasquez

Sonia Mayerli Velásquez Gomez

Lina Marcela Pardo Luque

Docente

Marcela Andrea Zambrano

Curso

Cromatografía

Grupo

401542_4

Bogotá

Octubre de 2018
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PASO 4. Solución de preguntas

Estudiante Lady Johanna Cubillos Vaca
a. Con el valor de desplazamiento registrado para la mancha reportada en la
Figura 1 y la distancia de la solución estándar, calcule el valor de Rx.

5.7 cm
3.4 cm 2.4 cm

0.4 cm

Para calcular el valor de retención se usa la siguiente fórmula:

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎

𝑅𝑥 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛

5.7 − 0.4 = 5.3

2.4
𝑅𝑥 = 3.4

𝑅𝑥 = 0.70
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b. Con el valor de desplazamiento registrado para cada mancha reportada en

la Figura 2 y en relación con el frente de disolvente, calcule el valor de Rf.

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜

𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

0.4 cm

3.7 cm

2.9 cm
h= 5.7 cm

2.3 cm

0 cm 0.6 cm

Se calcula la distancia recorrida por el disolvente:

= Altura - distancia de la línea de siembra - distancia de la línea de siembra
= 5.7 - 0.6 - 0.4
= 4.7 cm
Con la anterior ecuación se calcula para cada muestra:

3.7
a) 4.7
= 0.78

2.9
b) 4.7
= 0.61

0
c) 4.7
=0
2.3
d) 4.7
= 0.48
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c. Justifique ¿por qué se empleó esa composición de fase móvil?

Recordemos que la composición de la fase móvil empleada fue:
8% tolueno y 92% diclorometano
Ambos compuestos son disolventes orgánicos de extracción. Las muestras
tratadas tienen una polaridad baja o media, por esta razón se utiliza el tolueno
(no polar) y el diclorometano (polar), por lo tanto estos dos compuestos son
miscibles, pero de distinta polaridad.

d. ¿Por qué la muestra “c” del problema dos, no presentó un desplazamiento

con la composición de la fase móvil?
La muestra “c” es clorobenzaldehído, que pertenece al grupo de los aldehídos,
los cuales, por su grupo carbonilo cuentan con gran polaridad. De acuerdo con
la fase móvil, esta era para componentes de polaridad baja o media pero el
clorobenzaldehído es de gran polaridad, por lo tanto, Entre más polar sea un
compuesto, más fuertemente se adsorbe en la fase estacionaria, por lo que su
migración a lo largo de ella es menor, siendo eluído (arrastrado) más lentamente
por la fase móvil, que los compuestos menos polares.
e. ¿Qué significa que la muestra problema presente un desplazamiento 2.3
cm en relación con las demás muestras que se encuentran en el ensayo?
 Hidroxibenzaldehido – 3.7 cm
 Vainilla - 2.9 cm
 Clorobenzaldehido – 0 cm
 Muestra problema – 2.3 cm
Este compuesto se adsorbió fuertemente en la fase estacionaria, por lo que su
migración a lo largo de ella fue menor, mientras que los compuestos menos
polares fueron arrastrados más rápidamente por la fase móvil.

Estudiante Jhon Henry Barrios Velasquez

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a. Con el valor de desplazamiento registrado para la mancha reportada en la Figura 1

y la distancia de la solución estándar, calcule el valor de Rx.

De acuerdo a la placa del Ensayo 1 se tienen los siguientes datos: La altura de la placa
(h) es de 5.7 cm, la distancia del borde a la línea de siembra es de 0.4 cm. El
desplazamiento de la solución patrón (a) fue de 3.4 cm y el desplazamiento de la
muestra (d) fue de 2.4 cm.

Por lo que aplicando la formula dada tenemos el Rx:

𝑑=𝑦 2,4 𝑐𝑚
𝑅𝑥 = − −→ 𝑅𝑥 = = 0,71
𝑎=𝑥 3,4 𝑐𝑚

El valor del Rx es: 0,71

b. Con el valor de desplazamiento registrado para cada mancha reportada en la Figura

2 y en relación al frente de disolvente, calcule el valor de RF

Se utilizará la siguiente fórmula dada en la gráfica para calcular el Rf

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Con los datos proporcionado se realiza la operación para hallar el valor de Y según
anterior figura:

Y = 5,7 cm-0,6cm -0,4 cm= 4,7 cm

Y con la fórmula de Rf tenemos para cada compuesto:

3.7𝑐𝑚 2.9 𝑐𝑚 0 𝑐𝑚 2,3 𝑐𝑚

Rf(a)=4.7 𝑐𝑚 = 0.79 Rf(b)=4.7 𝑐𝑚 = 0.62 Rf(c)=4.7 𝑐𝑚 = 0 Rf(d)=4.7 𝑐𝑚 = 0,49

c. Justifique ¿por qué se empleó esa composición de fase móvil?

Se utiliza la fase móvil compuesta por 8% de Tolueno y 92% de Diclorometano debido

a que la retención y selectividad de separación depende de gran medida de la
constante de equilibrio que tiene relación con la polaridad de los compuestos, la cual es
determinada por número y grupos funcionales. Por lo tanto, en las cuatro muestras hay
diferencias grupos funcionales muy polares, ligeramente polar y apolares por tal motivo
se eligió una fase ligeramente polar para que exista una clara diferenciación de los
tiempos de retención.

d. ¿Por qué la muestra “c” del problema dos, no presentó un desplazamiento con la
composición de la fase móvil?

El cloro benzaldehído al ser el compuesto más polar no presento afinidad suficiente con
la fase móvil por lo que no genero un desplazamiento en la placa.

e. ¿Qué significa que la muestra problema presentara un desplazamiento 2?4 cm en

relación a las demás muestras que se encuentran en el ensayo?
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Si la muestra problema estuviera 2,4 cm / 4,7= 0,510 el factor de retención aumenta y

es similar al compuesto b que es la vainilla por lo tanto se tiene problemas para
identificación de compuestos, se debe en este caso tener una fase móvil diferente para
variar las afinidades con la fase estacionaria y así tener una separación adecuada en la
placa, se recomienda que los Rf medio en 0,3-0,5.

Estudiante Sonia Mayerli Velásquez Gómez

a. Con el valor de desplazamiento registrado para la mancha reportada en la Figura 1

y la distancia de la solución estándar, calcule el valor de Rx.

 Altura de la placa (h) es de 5.7 cm,

 Línea de siembra es de 0.4 cm.
 Solución patrón (a) fue de 3.4 cm
 Muestra (d) fue de 2.4 cm (ver

Ecuación

Sustancia problema
𝑅𝑥 =
compuesto de referencia

Aplicando la ecuación anterior determinaremos Rx

2.4
𝑅𝑥 = 3.4 = 0.705
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RTA el valor de Rx es 0.705

Referencia
[1] cromatografía (2018, 10,21). Disponible en:
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html

b. Con el valor de desplazamiento registrado para cada mancha reportada en la Figura

2 y en relación al frente de disolvente, calcule el valor de RF.

Fase móvil compuesta por 8% de Tolueno y 92% de

Diclorometano,
Se sembraron cuatro muestras:
a) 4-hidroxibenzaldehído, 3.7 cm
b) Vainilla, 2.9 cm,
c) Clorobenzaldehído 0 cm
d) Muestra problema 2.3 cm

La altura de la placa (h) es de 5.7 cm,

La distancia del borde a la línea de siembra es de 0.6 cm
La distancia del borde a la línea de frente de disolvente es de 0.4 cm.
Ecuación

a= altura de la placa
ls= línea de siembra
lf= línea de frente de disolvente

ℎ = 𝑎 − 𝑙𝑠 − 𝑙𝑓

ℎ = 5 − 0.6 − 0.4 = 4.7

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distancia del compuesto sobre el origen

𝑅𝑓 =
distancia del eluyente desde el origen

X𝐴
𝑅𝑓 =
X𝐵

Para cada compuesto el valor de Rf es:

3.7
𝑅𝑓(𝑎) = = 0.79
4.7

2.9
𝑅𝑓(𝑏) = = 0.61
4.7

0
𝑅𝑓(𝑐) = =0
4.7

2.3
𝑅𝑓(𝑐) = = 0.48
4.7

c. Justifique ¿por qué se empleó esa composición de fase móvil?

Se utiliza la siguiente Fase móvil compuesta por 8% de Tolueno y 92% de

Diclorometano ya que ambas son eluyentes menos polares los cuales arrastran el
compuesto lentamente para que se pueda observar la diferencia de retención de
cada uno de los compuestos.

d. ¿Por qué la muestra “c” del problema dos, no presentó un desplazamiento con la
composición de la fase móvil?

Como lo vimos en el anterior punto la fase móvil esta echa para componentes de
baja o media polaridad a comparación del clorobenzaldehido ya que este es de alta
polaridad por lo tanto su migración a lo largo de ella es menor a comparación de las
otras muestras ya que son menos polares
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e. ¿Qué significa que la muestra problema presentara un desplazamiento 24 cm en

relación a las demás muestras que se encuentran en el ensayo?

Al ser el compuesto más polar es absorbido rápidamente por la fase estacionaria

por lo tanto su desplazamiento es menor en la fase móvil.

Estudiante Lina Marcela Pardo Luque

A. Con el valor de desplazamiento registrado para la mancha reportada en la
Figura 1 y la distancia de la solución estándar, calcule el valor de Rx.

h= 5.7 cm,
Distancia de la línea de siembra= 0.4 cm.
Solución patrón A= 3.4 cm
Muestra D = 2.4 cm

Formula

Reemplazo de formula

Rx= 2.4cm/3.4cm

Rx= 0.7058 cm
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B. Con el valor de desplazamiento registrado para cada mancha reportada en la

Figura 2 y en relación al frente de disolvente, calcule el valor de RF.

h= 5.7cm

Distancia línea de siembra= 0.6cm

Distancia línea de frente= 0.4 cm

Distancia muestra (a) 4-hidroxibenzaldehído= 3.7 cm

Distancia muestra (b) Vainilla = 2.9 cm

Distancia muestra (c) Clorobenzaldehído = 0 cm

Distancia muestra (d) muestra problema= 2.3 cm

Formula

Reemplazo de formula

h=5.7 cm – 0.6 cm – 0.4cm

h= 4.7cm

Muestra A
Rf= 3.7 / 4.7 = 0.787
Muestra B
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Rf= 2.9 / 4.7 = 0.617

Muestra C
Rf= 0 / 4.7 = 0
Muestra D
Rf= 2.3 / 4.7 = 0.489

C. Justifique ¿por qué se empleó esa composición de fase móvil?

La fase móvil utilizada para fue 8% de Tolueno y 92% de Diclorometano, estos
solventes tienen como característica su baja polaridad, esto permite una mejor
apreciación de los compuestos de cada muestra sembrada en la placa.

D. ¿Por qué la muestra “c” del problema dos, no presentó un desplazamiento con
la composición de la fase móvil?

La muestra C es Clorobenzaldehído y la polaridad de

este compuesto es alta, lo que en función de la fase
móvil ( baja polaridad), por lo tanto entre más polar sea
un compuesto más lento será su desplazamiento.

E. ¿Qué significa que la muestra problema presentara un desplazamiento 2.4 cm

en relación a las demás muestras que se encuentran en el ensayo?
Si tomamos como guía los resultados frente a las demás muestras podemos concluir
que la muestra problema está compuesta por una alta polaridad ya que su
desplazamiento fue más lento que el –hidroxibenzaldehído y la Vainilla
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PASO 6. Solución de preguntas

a. Tiempo de retención corregido (t´R)

t´Rfq= 1,74-0,34=1,4
t´RHq= 2,18-0,34=1,84

Es el tiempo real que la fase estacionara ha retrasado el avance del compuesto y se

deriva al observar el tiempo de retención de la banda que se divide en dos partes:
tiempo muerto (TM) y tiempo transcurrido a partir de este momento hasta la aparición
del máximo de la banda. La figura siguiente ayuda a entenderlo: (Línea verde es el
Tiempo de retención corregido)
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b. Medida de retención de los solutos como factor de capacidad.

𝑡𝑅 − 𝑡𝑀
𝑘´ =
𝑡𝑀

1.74− 0.34
𝑘´ = = 0.74 Factor de capacidad para Fq
0.34

2.18− 0.34
𝑘´ = = 1.8 Factor de capacidad para Hq
0.34

c. Número de platos teóricos.

𝑡𝑓𝑞 1,74
NFq=16*( 𝑤𝑞 )2= 16(0,21)2= 1088

𝑡𝐻𝑞 2 2,18
NHq= 16*( ) =16( )2 =742,562
𝑤𝑞 0,32

𝑁𝐹𝑞+𝑁𝐻𝑞 1088,448+742,562
NFq, Hq= = = 915.25
2 2
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d. Alturas de Plato

𝐿 18,2 𝑚
D=H=𝑁 = 920,505 = 0,0197m

e. Factor de selectividad

𝑡𝑅𝐻𝑞−𝑡𝑜 𝐾2 2,18−0,34 1,84

= = 1,74−0,34 = = 1,314
𝑇𝑅𝐹𝑞−𝑡𝑜 𝐾1 1,4

f. Resolución

2(𝑇𝑅𝐻𝑞−𝑇𝑅𝐹𝑞) 2∗(2,18−1,74) 0,88

Rs= = = 0,53 = 1,6603
𝑤2+𝑤1 0,32+0,21

g. Factor de Retención

𝐾´ 0,74
RFq=1+𝐾´=1+0,74=0,425

𝐾´ 1,18
RHq=1+𝐾´=1+1,18=0,541

Eficiencia

√𝑁 √1098,448
EFq= = =8,28
4 4

√𝑁 √742,562
EHq = 4 = 6,812
4

Selectividad

∝ −1 1,314 −1
S= = = 0,238
∝ 1,314

Paso 7
Con los resultados del paso seis, respondan las siguientes preguntas en forma
colaborativa:
a. ¿Qué indica el tiempo de retención en un análisis cromatográfico?
b. ¿Qué indica el número de platos?
c. ¿Qué indica la altura de plato?
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d. ¿Qué relación tiene la resolución con el factor de retención, a la selectividad y a la

eficiencia?

a) Es el tiempo es que transcurre después de la inyección de la muestra, para que

el pico del analíto alcance el detector, se denomina tiempo de retención y se le
da el símbolo de 𝑡𝑅 , el pico de la izquierda corresponde a una especie que no es
retenida por la columna. A menudo la muestra o la fase móvil contiene una
especie que no es retenida por la columna. A menudo la muestra o fase móvil
contiene una especie que no se retiene; cuando no es así, este tipo de especies
pueden añadirse para facilitar la identificación de picos. El tiempo tM para que la
especie no retenida alcance el detector, en algunas ocasiones se denomina
tiempo muerto. La velocidad de migración de la especie no retenida coincide con
la velocidad promedio del movimiento de las moléculas de la fase móvil.
En conclusión, esta medida indica el tiempo transcurrido desde la inyección de la
muestra hasta que el pico alcance su máxima área.1 Este tiempo aumenta al
aumentar la polaridad del analito.

1
Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo Cromatografía (pp. 8-27). Bogotá,
Colombia: UNAD - Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Recuperado de http://hdl.handle.net/10596/9904
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Fig. 1. Cromatograma característico de una mezcla de dos componentes. El pico

de la izquierda representa una especie que no se retiene en la columna y de
esta forma alcanza el detector casi inmediatamente después del inicio de la
elución. Por lo tanto, su tiempo de retención tM es aproximadamente igual al
tiempo que emplea una molécula de la fase móvil para pasar atreves de la
columna

b) La medida cuantitativa de la eficiencia es el número de platos teóricos n, el cual

𝑡𝑓
en términos de tiempos de retención es: N=16*( 𝑤 )2

En cada plato se establece el equilibrio de la especie entre las fases móvil y

estacionaria, así el número de platos teóricos refleja el número de veces que el
soluto se reparte entre las dos fases durante su paso a través de la columna. La
eficacia de la columna cromatografica aumenta cuanto mayor es el número de
platos

c) Se consigue mejorar la resolución de la columna aumentando el número de

platos. Esto se puede conseguir aumentando la longitud (L) de la columna, lo
cual aumentaría el tiempo necesario para la separación, por lo tanto la altura de
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plato expresa en términos simples la magnitud de ensanchamiento de la banda y

los factores que lo afectan, por lo tanto el número de platos teóricos y altura se
utilizan para evaluar la eficacia de una columna

d) La relación que tiene la retención, a la selectividad y la eficiencia es que influyen

en la separación cromatográfica.

Que se puede ver en el siguiente grafico:

Fuente:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/5.2CromatografiaDefiniciones_2621.pdf
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Burriel Martí, F., Arribas Jimeno, S., Lucena Conde, F., & Hernández
Méndez, J. (2008). Cromatografía. En: Química analítica cualitativa (18
Edición., pp. 310-334). Madrid: Paraninfo. Recuperado
de http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2081/ps/i.do?p=GVRL&sw=w&u=unad
&v=2.1&it=r&id=GALE%7CCX4056100039&asid=0753481720a1cd4eadbebd
cef16242d6

 SECyTa (S.F.) Sociedad Española de Cromatografía y técnicas afines.

Recuperado de: https://www.secyta.es/es/node/8

 Angurell I., et al, (S.F.) Universidad de Barcelona. Recuperado de:

http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/extraccio_tip.html

 Cromatografía en capa fina. (s.f.) Recuperado de:

https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-
p6.pdf

 Universidad Iberoamericana. (S.f.) Recuperado de:

http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa001.pdf

 http://ocw.uc3m.es/ciencia-e-oin/caracterizacion-de-materiales/material-de-
clase-1/Apuntes_Tecnicas_de_separacion_cromatografica.pdf

 Técnicas de separación cromatografía. 2018.10.23 se encuentra en

http://ocw.uc3m.es/ciencia-e-oin/caracterizacion-de-materiales/material-de-
clase-1/Apuntes_Tecnicas_de_separacion_cromatografica.pdf
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 Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo

Cromatografía (pp. 8-27). Bogotá, Colombia: UNAD - Universidad Nacional
Abierta y a Distancia. Recuperado de
https://repository.unad.edu.co/handle/10596/9904

 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/5.2CromatografiaDefiniciones_26
21.pdf