DIAGNOSTICO Y SEGUIMIENTO

BACTERIOLÓGICO DE LA
TUBERCULOSIS
BIOQ. DIGIROLAMO RITA SOLEDAD
2018
DEFINICIÓN DE LA TUBERCULOSIS
CADENA EPIDEMIOLÓGICA
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICOS
MUESTRAS PULMONARES Y EXTRAPULMONARES
BIOSEGURIDAD
SIVILA
 DEFINICIÓN DE LA TUBERCULOSIS
• LA TB ES UNA ENFERMEDAD INFECCIOSA QUE SUELE AFECTAR A LOS
PULMONES Y ES CAUSADA POR UNA BACTERIA (MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS). SE TRANSMITE DE UNA PERSONA A OTRA A TRAVÉS DE
GOTÍCULAS GENERADAS EN EL APARATO RESPIRATORIO DE PACIENTES
CON ENFERMEDAD PULMONAR ACTIVA.
 AGENTE CAUSAL
TAXONÓMICAMENTE
REINO: BACTERIA
FILO: ACTINOBACTERIA
CLASE: ACTINOBACTERIA
ORDEN: ACTINOMYCETALES
SUBORDEN: CORYNEBACTERNEAE
FAMILIA: MYCOBACTERIACEAE
GENERO: MYCOBACTERIUM
ESPECIE: TUBERCULOSIS
HTTP://WWW.BACTERIO.CICT.FR
 COMPLEJO MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
EL CMT :
• M. TUBERCULOSIS: EL MAS IMPORTANTE DESDE EL PUNTO DE VISTA SANITARIO
• M. BOVIS: ES MENOS FRECUENTE DEBIDO AL CONTROL DE LOS ANIMALES
• M. AFRICANUM: ÁFRICA ORIENTAL, CENTRAL Y OCCIDENTAL.
• M. CANETTI: LINFADENITIS EN UN NIÑO EN SOMALÍ
• M. MICROTI: ROEDORES
• M. PINNIPEDI: ENFERMEDAD EN FOCAS Y LEONES
• M. CAPRAE: RELACIONADO CON M.BOVIS
 M.TUBERCULOSIS

• ES UN BACILO LIGERAMENTE CURVO O RECTO, INTRACELULAR OBLIGADO ,

AEROBIO,INMÓVIL,CON DIMENSIONES DE 1-4X0,3X0,6UM.
• NO POSEE ACTIVIDAD CATALASA LUEGO DEL CALENTAMIENTO A 68ºC,PERO SI CAPACIDAD DE
ACUMULAR NIACINA Y REDUCIR LOS NITRATOS A NITRITOS.
• NO PRESENTA ESPORAS
EN CUANTO A SUS REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES Y AMBIENTALES:
HETERÓTROFO
MESOFILO
NEUTRÓFILO
 PARED CELULAR

ES MUY RICA EN LÍPIDOS LO CUAL DETERMINA SU HIDROFOBICIDAD

EL ESQUELETO DE LA PC ESTA UNIDA COVALENTEMENTE POR:
PEPTIDOGLICANO,ARABINOGALACTANO Y ÁCIDOS MICÓLICOS.
LA MP CONSISTE EN UNA BICAPA FOSFOLIPIDICA QUE CONTIENE
DIFOSFATIDILGLICEROL, FOSFATILDILETANOLAMINA,FOSFATIDILINOSITOL Y
FOSFADILMANOSIDOS.
EL GENOMA DE M.TUBERCULOSIS H37RV CONSISTE:
4,4X106 PARES DE BASES
G+C DEL 65%
4.000 GENES
GENOMA DE LA MT
 HUESPED SUSCEPTIBLE
• EN EL PRIMER ENCUENTRO CON EL M. TUBERCULOSIS, ÉSTE PUEDE SER DESTRUIDO
POR LAS DEFENSAS NATURALES INNATAS QUE TODOS POSEEN, NO DÁNDOLE LA
POSIBILIDAD DE MULTIPLICARSE. SIN EMBARGO, SE DISCUTE LA IMPORTANCIA DE LOS
MECANISMOS DEFENSIVOS INNATOS DEBIDO A LAS ALTAS CIFRAS DE INDIVIDUOS
REACTORES A LA TUBERCULINA ENCONTRADOS EN VARIAS POBLACIONES.
• SI SE PRODUCE LA PRIMERA INFECCIÓN, EN LA GRAN MAYORÍA DE LOS CASOS EL
BACILO QUEDA ENCAPSULADO EN PEQUEÑOS FOCOS QUIESCENTES QUE NO
PROGRESAN NI DETERMINAN ENFERMEDAD; SÓLO SE SABE QUE EL SUJETO HA SIDO
INFECTADO, ES DECIR, QUE TIENE BACILOS VIVOS EN ESTADO LATENTE, EN ALGUNA
PARTE DE SU ORGANISMO, PORQUE REACCIONA A LA TUBERCULINA. EL
ORGANISMO RESIDE DENTRO DEL HOSPEDERO EN UN ESTADO CLÍNICAMENTE
INACTIVO O LATENTE, CONTENIDO POR EL SISTEMA INMUNE.
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICOS Y SEGUIMIENTO
• BACILOSCOPIA
• CULTIVO
• SEROLOGÍA
• PRUEBA DE SENSIBILIDAD
• ADA
• MÉTODOS MOLECULARES
 BACILOSCOPIA

• LA BK O EXAMEN DIRECTO ES LA HERRAMIENTA FUNDAMENTAL DE DIAGNOSTICO Y PROGRAMA DE

CONTROL DE TUBERCULOSIS.
• DE ELECCIÓN POR SER SENCILLA, RÁPIDA Y DE BAJO COSTO.
• ES EL MÉTODO MAS RÁPIDO PARA DETERMINAR SI UN PACIENTE TIENE TB.
• IDENTIFICA A LAS PERSONAS QUE TIENEN MAYOR PROBABILIDAD DE TRANSMITIR LA ENFERMEDAD.
• PUEDE CONFIRMAR ENTRE EL 65% Y EL 80% DE LOS CASOS PULMONARES.
• SE REQUIEREN 5.000 A 10.000 BACILOS POR ML DE ESPUTO PARA PRODUCIR UNA BK POSITIVA.
• LA SENSIBILIDAD DE LA BACILOSCOPIA ES RELATIVAMENTE BAJA,
• ES DECIR QUE UN RESULTADO NEGATIVO NO DESCARTA LA ENFERMEDAD,
• PUEDE SER UN FALSO NEGATIVO.
• EL RENDIMIENTO DE LA BK ES MAYOR EN LAS MUESTRAS MATINALES.
• LOS FALSOS NEGATIVOS PUEDEN DEBERSE:
FORMAS NO CAVITADAS DE LA ENFERMEDAD.
MALA CALIDAD DE LA MUESTRA.
TIEMPO QUE DEDICA EL OBSERVADOR AL ESTUDIAR LA BK.
 BACILOSCOPIA
• ESPUTO: EXPECTORACIÓN DE SANGRE QUE PROVIENE DEL ÁRBOL
RESPIRATORIO
• PUEDE PRESENTARSE CON MEZCLA DE SECRECIONES.
• EL NUMERO OPTIMO DE MUESTRAS REVELA QUE :
• 1º POSITIVA 83% AL 87% DE LOS CASOS
• 2º POSITIVA 10%-12% DE LOS CASOS
• 3º POSITIVA 3%-5% DE LOS CASOS

MANUAL PARA EL DIAGNOSTICO BACTERIOLÓGICO DE TUBERCULOSIS. MINISTERIO DE SALUD DE LA NACIÓN

 COLORACIÓN DE ZHIEL-NIELSSEN

• SE REALIZA UN EXTENDIDO DE LA MUESTRA SOBRE UN PORTAOBJETOS NUEVO

• SE CUBRE CON SOLUCIÓN DE FUCSINA, SE FLAMEA SUAVEMENTE CON HISOPO
EMBEBIDO EN ALCOHOL HASTA DESPRENDIMIENTO DE VAPORES BLANCOS.
• LAVAR CON AGUA
• DECOLORAR CON ALCOHOL-ACIDO
• LAVAR CON AGUA
• CUBRIR CON AZUL DE METILENO.
 MUESTRAS PARA BK
PULMONARES:
• ESPUTO
• HISOPADOS
• CONTENIDO GÁSTRICO
• ORINA
• SANGRE MENSTRUAL
EXTRAPULMONARES:
• BIOPSIA DE INTESTINO
• ESTÉRILES TOMADAS ASÉPTICAMENTE:
LÍQUIDOS TOMADOS POR PUNCIÓN, PLEURAL, CEFALORRAQUÍDEO, MEDULA ÓSEA, PERICÁRDICO,
SINOVIAL, ARTICULAR, PUS, SANGRE.
• BIOPSIA DE TEJIDOS, PLEURAL, GANGLIONAR, GENITAL, ÓSEO, ETC.
 INFORME
Recuento del examen microscópico Informe

No se encuentran BAAR en 100 campo No se observan bacilos acido-alcohol

observados resistente
Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 Numero exacto de bacilos en 100
campos observados campos
Se observan entre 10 y 99 BAAR en Positivo (+)
100 campos observados
Se observan de 1 a 10 BAAR en 50 Positivo (++)
campos observados
Se observan mas de 10 BAAR por Positivo (+++)
campo, en 20 campos observados

Instituto nacional de enfermedades respiratorias – Dr. Emilio

conti. Anlis –Dr. Carlos g. malbran. 2015
• LA BACILOSCOPIA ES LA TÉCNICA DE ELECCIÓN
PARA EL DIAGNOSTICO Y EL CONTROL DEL
TRATAMIENTO DE LA TBC PULMONAR DEL ADULTO.
 CULTIVO
• INCREMENTA LA POSIBILIDAD DE DETECTAR EL BACILO DE LA TUBERCULOSIS EN LAS MUESTRAS
DE LOS CASOS CARACTERIZADOS POR TENER ESCASO NUMERO DE BACILOS ( PAUBACILARES ).
• ES IDEAL PARA DETECTAR CASOS PULMONARES DE MENOR INFECCIOSIDAD ( TBC INFANTIL,
PRIMARIA, TBC EXTRAPULMONAR Y FORMAS PULMONARES NO BACILIFERAS )
• EN CONDICIONES NORMALES APORTA ALREDEDOR DEL 20 AL 30% DEL DIAGNOSTICO EN AL
TBC PULMONAR.
• TIENE ALTA ESPECIFICIDAD, AL AISLAR EL BACILO VIVO PERMITE EFECTUAR TÉCNICAS PARA
IDENTIFICAR LA ESPECIE.
• CONSTITUYE UN MÉTODO DIAGNOSTICO YA QUE PERMITE DETECTAR UN MÍNIMO DE 10 A
100 BACILOS A DIFERENCIA DE LA BK QUE REQUIERE POR LO MENOS 10.000 BAAR/ML.
• PERMITE REALIZAR LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD (PS) A LAS DROGAS
ANTITUBERCULOSAS E IDENTIFICAR LOS CASOS QUE PRESENTAN RESISTENCIA.
• ES UNA HERRAMIENTA IMPORTANTE EN EL DIAGNOSTICO DIFERENCIAL EN OTRAS
PATOLOGÍAS PULMONARES CRÓNICAS.
• MEDIANTE EL CULTIVO ES POSIBLE HACER QUE LOS BACILOS PRESENTES EN LAS
MUESTRAS DE LOS PACIENTES, SE MULTIPLIQUEN IN VITRO.
 MÉTODOS DE CULTIVO
• EN MEDIO SOLIDO:
MÉTODO DE PETROFF
MÉTODO DE BORDA-BOSSANA DE TEXIDOR
MÉTODO DE OJADA KURDO

• MEDIO LIQUIDO:
BACTEC MGIT 960 SYSTEM
 TÉCNICA DE PETROFF
• MEZCLAR PARTES IGUALES DE MUESTRA CON NAOH 4% AGITAR FUERTEMENTE E
INCUBAR EN ESTUFA A 37ºC DURANTE 20 A 30 MIN.
• CENTRIFUGAR 15 A 30 MIN
• DESECHAR EL SOBRENADANTE.
• NEUTRALIZAR CON SOLUCIÓN DE H2SO4
• AGREGAR 5 ML DE AGUA DEST. PARA EL LAVADO
• CENTRIFUGAR 15 A 20 MIN
• DESECHAR EL SOBRENADANTE
• RESUSPENDER EN 3 ML DE AGUA DEST.
• SEMBRAR 2 TUBOS DE LOWESTEIN JENSEN Y 1 DE STONEBRIK
• INCLINAR. DEJAR ABSORBER LA SIEMBRA 72 HS.
• INCUBAR EN ESTUFA A 37 ºC DURANTE 60 DIAS.
 INFORME DEL CULTIVO

• (C) CULTIVO CONTAMINADO

• (-) CULTIVO NEGATIVO
• ( Nº DE COLONIAS ) PRESENCIA DE MENOS DE 20 COL.
• (+) ENTRE 20 Y 100 COL.
• ( ++ ) MAS DE 100 COL SEPARADAS
• ( +++ ) COLONIAS CONFLUENTES.
 CULTIVO

• SINTOMÁTICO RESPIRATORIO CON BK REITERADAMENTE NEGATIVA, QUE PERSISTEN CON SUS SÍNTOMAS Y
TIENEN IMÁGENES RADIOLÓGICAS SOSPECHOSAS.
• ENFERMOS CON SOSPECHA DE TBC EXTRAPULMONAR , YA QUE EN GENERAL SON LESIONES PAUCIBACILAR.
• NIÑOS CON SOSPECHA CLÍNICA Y EPIDEMIOLÓGICA DE TBC E IMÁGENES RADIOLÓGICAS COMPATIBLES.
• INMUNOSUPRIMIDOS, ESPECIALMENTE INFECTADOS CON EL VHI, CON SOSPECHA DE TBC, YA QUE PUEDEN
TENER FORMAS ATÍPICAS CON ESCASO EN EL NÚMEROS DE BACILOS.
• PACIENTES CON ANTECEDENTES DE TRATAMIENTO ( FRACASOS, O ABANDONOS PARCIALES Y RECAÍDAS ) Y
PACIENTES QUE CONTINÚAN CON BK POSITIVA AL 2º MES DE TRATAMIENTO PARA DESCARTAR UNA
MICOBACTERIOSIS
• CONTACTO DE TB-MR CONFIRMADO
• PLANTEO DE OTROS DIAGNÓSTICOS DIFERENCIALES
 SEROLOGÍA

BD MGIT™ TBC IDENTIFICACIÓN TEST PARA LA IDENTIFICACIÓN DEL

COMPLEJO MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS (CMT) A PARTIR DE
CULTIVOS LÍQUIDOS.
SE DETECTA EN CONCRETO LA MPT64, UNA PROTEÍNA
MICOBACTERIANA SEGREGADA POR LAS CÉLULAS DEL COMPLEJO CMT
DURANTE EL CULTIVO.
INMUNOENSAYO CROMATOGRAFICO.
 ADENOSINA-DESAMINASA
ADA :

• EN LIQUIDO PLEURAL REFLEJA PRINCIPALMENTE LOS LINFOCITOS T ACTIVADOS QUE

PRODUCEN LA ENZIMA.
• LA TÉCNICA SENCILLA Y ECONÓMICA
• LA MISMA MUESTRA UTILIZADA PARA DETECTAR LA ENZIMA PUEDE SER CULTIVADA
• UN VALOR ELEVADO DE ADA EN LIQUIDO PLEURAL CON PREDOMINIO DE LINFOCITOS PUEDE
CONTRIBUIR AL DIAGNOSTICO DE TB
• DADO QUE LA PRUEBA NO DETECTA NINGÚN COMPONENTE ESPECIFICO NI DEL BACILO NI
DE LA RESPUESTA INMUNE EN TB, NO PUEDE SER UTILIZADA SINO COMO COMPLEMENTO DE
LOS RESULTADOS DE OTROS EXÁMENES CLÍNICOS Y BACTERIOLÓGICOS
• VALOR DE CORTE: 60U/L
MÉTODOS MOLECULARES
• OMS VALIDO UN MÉTODO MOLECULAR PARA DETECCIÓN RÁPIDA DE MR LIPAS
HIBRIDACIÓN EN TIRAS CON SONDAS (LINE PROBE ASSAYS - LIPAS) QUE
OFRECEN DOS EMPRESAS COMERCIALES INNOGENETICS (INNOLIPA –
TECNOLAB)) Y HAIN LIFESCENCES (GENOTYPE MTBDR PLUS – BIOMERIEX
VALIDADO POR LA ANMAT ) AMBOS MÉTODOS TIENEN LA MISMA
METODOLOGÍA.
 METAS DE LA OMS
• OMS 2011: FOMENTAR Y PROFUNDIZAR EL USO DE PRUEBAS RÁPIDAS DE DETECCIÓN DE RESISTENCIA A
TUBERCULOSTÁTICOS, SIENDO LOS MÉTODOS MOLECULARES UNA DE LAS TÉCNICAS DE ELECCIÓN…

• LA ESTRATEGIA FIN A LA TUBERCULOSIS DE LA OMS: REDUCIR PARA 2030 LA INCIDENCIA DE TB EN UN 80% Y

LAS MUERTES EN UN 90%, ASÍ COMO PARA ELIMINAR LOS COSTOS CATASTRÓFICOS A QUE HACEN FRENTE LOS
HOGARES AFECTADOS POR LA TUBERCULOSIS.

• ACTUALMENTE, TAN SOLO SE DETECTA EL 7% DE LA CARGA MUNDIAL ESTIMADA DE PACIENTES DE

TUBERCULOSIS POLIFARMACORRESISTENTE FALTA DE CAPACIDAD DE LABORATORIO Y LA LENTA
TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA A LOS LUGARES CON POCOS RECURSOS.

• EN AÑOS RECIENTES, UN LIMITADO PERO CRECIENTE NUMERO DE PRUEBAS MAS RÁPIDAS Y SENSIBLES BASADOS
EN MÉTODOS MOLECULARES, INCLUYENDO XPERT® MTB/RIF (CEPHEID, USA) Y LINE PROBE ASSAYS (LPAS), SE
VOLVIERON DISPONIBLES PARA REEMPLAZAR O COMPLEMENTAR LOS MÉTODOS CONVENCIONALES EXISTENTES
EN EL DIAGNOSTICO DE TB Y RESISTENCIA A FÁRMACOS PARA SU TRATAMIENTO.
BIOSEGURIDAD
CABINA DE SEGURIDAD BIOLÓGICA
VIGILANCIA BASADA EN EL LABORATORIO
MARCO NORMATIVO NACIONAL
SOLICITUD DE ESTUDIOS BACTERIOLÓGICOS
FIN DE LA PRESENTACIÓN

MUCHAS GRACIAS !
• BIBLIOGRAFÍA
TUBERCULOSIS. VICTORINO FARGA. JOSÉ ANTONIO CAMINERO. ED. MEDITERRÁNEO. 2012.
TRATADO DE MICROBIOLOGÍA . BERNARD D. DAVIS. ED MASSON 1996
DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO. BAILEY Y SCOTT. ED PANAMERICANA. 2009
MANUAL BACTERIOLÓGICO DE TUBERCULOSIS. NORMAS Y GUÍA TÉCNICA. PARTE II CULTIVO. MINISTERIO DE
SALUD NACIÓN.
SERVICIO DE MICOBACTERIAS
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS ANLIS “DR. CARLOS
G. MALBRÁN” LABORATORIO SUPRANACIONAL OPS/OMS