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PRINCIPALES MECANISMOS DE REPARACI�N DE DA�OS EN LA MOL�CULA DE ADNYaliana Tafurt

Cardona1Maria Aparecida Marin Morales21 MSc. Estudiante de doctorado del programa


de Biolog�a Celular y Molecular. Laboratorio de Mutag�nesis Ambiental. Instituto de
Biociencias. Universidad Estadual Paulista �J�lio de Mesquita Filho� - campus de
Rio Claro/SP.2 Ph.D. Profesor Asociado. Laboratorio de Mutag�nesis
Ambiental. Instituto de Biociencias. Universidad Estadual Paulista �J�lio de
Mesquita Filho�- campus de Rio Claro/SP. Dedicaci�n exclusiva en investigaci�n y
docencia. Correo electr�nico: mamm@rc.unesp.brISSN 1657-9550del genoma. En este
art�culo se presentan los principales mecanismos de reparaci�n del ADN, su
relaci�n y activaci�n de acuerdo al tipo de da�o. Palabras clave: reparaci�n
directa, reparaci�n indirecta, quiebres en doble cadena, reparaci�n inducida.MAIN
REPAIR MECHANISMS FOR DAMAGES IN THE DNA MOLECULEABSTRACTCells have complex
mechanisms that monitor DNA integrity that activate repair mechanisms when there
are de?ciencies or errors during replication. A potential result of the damage is a
permanent alteration in DNA structure that can generate mutations, carcinogenic
transformation and cell death. These are attributed to different endogenous agents
such as oxygen free radicals (OFR) from respiration, which are considered the
center of carcinogenesis and aging process due to genomic damage; exogenous agents,
such as ultraviolet light, induce pyrimidine dimers and ionizing radiation that
produce a variety of damage on the bases, many by indirect effect.Genotoxins
present in food, tobacco and Como citar este art�culo: Tafurt Y, Marin MA.
Principales mecanismos de reparaci�n de da�os en la mol�cula de ADN. Revista
Biosalud 2014; 13(2): 95-110.
96Yaliana Tafurt Cardona, Maria Aparecida Marin MoralesBiosalud, Volumen 13 No. 2,
julio - diciembre, 2014. p�gs. 95 - 110 ISSN 1657-9550INTRODUCCI�NLos da�os en el
ADN pueden generar cambios en la expresi�n de genes, crecimiento celular e
incluso tumores (1, 2). Estos da�os pueden ser atribuidos a diversos procesos
metab�licos end�genos, que producen radicales libres de ox�geno (RLO) y nitr�geno
(RLN) altamente reactivos, que alteran bases y atacan directamente el ADN (3).
Adem�s de estos agentes generados end�genamente encontramos los agentes
genot�xicos ex�genos, tales como la luz ultravioleta y otros tipos de radiaci�n
(X, ?, rayos c�smicos), aminas arom�ticas, hidrocarburo de arilo, cloruro de vinilo
y ciertos metales que generan, directamente o indirectamente, da�os en la
mol�cula de ADN (4, 5). Se ha estimado que cada c�lula puede experimentar hasta
105 lesiones espont�neas en un d�a, lo cual indica que la mol�cula de ADN es
constantemente agredida y alterada por distintos factores (6).Las c�lulas cuentan
con mecanismos complejos que vigilan la integridad del ADN activando v�as de
reparaci�n, b�sicamente cuando ocurren errores durante la replicaci�n celular. De
esta forma, la respuesta celular por da�os en el ADN y su reparaci�n es mediada
por v�as de se�alizaci�n, que requiere m�ltiples prote�nas sensoras,
transductoras y efectoras, en una red de interacci�n de diferentes v�as de reparo
(7, 8). Los procesos de reparaci�n del ADN reconocen, remueven y reparan errores en
la mol�cula, constituyendo los principales mecanismos celulares que garantizan la
estabilidad gen�tica y, consecuentemente, la propia supervivencia de la c�lula
(9). A continuaci�n se presenta una revisi�n de los principales mecanismos de
reparaci�n de la mol�cula de ADN en los seres vivos y su activaci�n frente a
agentes genot�xicos, que pueden tornarse mutag�nicos si no son reparados
correctamente. MECANISMO POR REVERSI�N DE LA LESI�N: REPARACI�N DIRECTALa
reparaci�n directa es realizada por la acci�n de una �nica enzima capaz de reparar
la lesi�n, sin necesidad de substituir la base da�ada. As�, la estructura original
de la mol�cula del ADN revierte la lesi�n. Existen tres mecanismos en la reparaci�n
directa: fotorreactivaci�n, alquiltransferencia y desmetilaci�n oxidativa (10). a)
Fotorreactivaci�nLa radiaci�n UV (longitud de onda entre 250 y 320 nm), puede
ocasionar alteraciones qu�micas en las bases del ADN. Los fotoproductos de estas
reacciones originan los d�meros de pirimidinas ciclobutano (CPD), pirimidina
(6,4) y pirimidonina (6,4 PP) que causan efectos delet�reos como la inhibici�n de
la replicaci�n y de la transcripci�n, el aumento en la aparici�n de mutaciones, la
detenci�n del ciclo celular y la muerte celular (11). Los efectos mutag�nicos
generados por la radicaci�n UV son invertidos por un proceso llamado
fotorreactivaci�n (Figura 1), catalizado por una fotoliasa, que posee dos
chemotherapeutic agents are also found with high potential in altering the DNA
molecule structure and interfering with its expression. Thus, around 105
spontaneous lesions are induced per day in our genes, where the repair
mechanisms can detect damages and disturbances during cell growth and division.
This is possible thanks to the speci?c recognition, correction or elimination of
damage functions, ensuring the integrity of the genome. In this article the
main mechanisms of DNA repair, as well as their relationship and activation
according to the type of damage, are presented.Key words: direct repair, indirect
repair, double-strand breaks repair, induced repair.
97Principales mecanismos de reparaci�n de da�os en la mol�cula de ADNcrom�foros que
captan un fot�n, cuya energ�a es utilizada para revertir el d�mero, es decir
quiebra el enlace covalente entre las pirimidinas reparando el da�o en el ADN (12).
Las fotoliasas han sido encontradas en bacterias, hongos, plantas y vertebrados,
excepto en mam�feros placentarios (13). El genoma humano tiene dos genes CRY
(genes que codi?can para la prote�na cryptochroma) hom�logos a las fotoliasas, los
cuales codi?can fotorreceptores de luz en la regulaci�n del ritmo circadiano,
pero no en la fotorreactivaci�n de da�os al DNA (14).Figura 1. Mecanismo de
reparaci�n directa del ADN por fotorreactivaci�n, catalizado por fotoliasas, el
cual revierte la lesi�n del ADN inducido por luz UV.b) AlquiltransferenciaEste
mecanismo es reconocido por la remoci�n de aductos alquilo en las bases del ADN.
Generalmente estos grupos son incorporados al ADN como agentes qu�micos
alquilantes (compuestos electrof�licos altamente reactivos con a?nidad por centros
nucleof�licos en macromol�culas org�nicas) (15) como el metil-metano-sulfonato
(MMS) o enzim�ticos (metilasas) (10). Una de las alteraciones m�s conocidas en el
ADN es la metilaci�n de restos de guanina para formar O6-metilguanina para lo cual
la c�lula utiliza enzimas �suicidas� llamadas alquitransferasas, que desplazan el
grupo metilo desde la guanina al centro activo de la ciste�na, llevando a la
inactivaci�n irreversible de la prote�na O6-metilguanina-ADN metiltransferasa
(MGMT) (16, 17) (Figura 2).
98Yaliana Tafurt Cardona, Maria Aparecida Marin MoralesBiosalud, Volumen 13 No. 2,
julio - diciembre, 2014. p�gs. 95 - 110 ISSN 1657-9550 Figura 2.
Alquitransferencia: Remueve los aductos alquilo en las bases del ADN como la
metilaci�n de restos de guanina para formar O6-metilguanina, usando enzimas
�suicidas� llamadas alquitransferasas, que desplazan el grupo metilo desde la
guanina al centro activo de la ciste�na.c) Desmetilaci�n oxidativaEste tipo de
reparaci�n remueve da�os por metilaciones en el ADN que pueden ser
citot�xicas y con frecuencia presentan acci�n mutag�nica, causada por compuestos
nocivos que se producen de forma end�gena como estr�s oxidativo, in?amaci�n,
peroxidaci�n de l�pidos, infecciones y otros procesos metab�licos naturales como la
alteraci�n de la microbiota intestinal (18, 19). Todos los organismos tienen
m�ltiples estrategias de reparaci�n para contrarrestar da�os al ADN, como por
ejemplo las alquilaciones (20), esta respuesta ha sido ampliamente estudiada
en E. coli, espec�ficamente la prote�na AlkB, la cual se encarga de desmetilar
oxidativamente las bases lesionadas, reverti�ndolas para adenina y citosina
respectivamente, liberando el grupo metilo en formaldeh�do (21). Esta forma de
reparaci�n ha sido conservada desde las bacterias hasta el hombre, en el que
han sido identi?cados hom�logos de AlkB, como ABH1, ABH2 y ABH3 (22, 23).MECANISMO
POR SISTEMAS DE REPARACI�N INDIRECTALos sistemas de reparaci�n indirecta son
aquellos que intervienen sobre el ADN, durante la replicaci�n (fase S del ciclo
celular), transcripci�n o sobre hebras de ADN fragmentadas. La ADN polimerasa y
algunos de los componentes moleculares del mecanismo de replicaci�n, llevan a
cabo la supervisi�n de la copia reci�n sintetizada (24). Puesto que el ADN se
replica de una forma semi-conservativa, cada hebra de esta mol�cula genera una
nueva, lo cual permite que los errores introducidos durante la replicaci�n puedan
ser corregidos por los mecanismos de reparaci�n por escisi�n de la lesi�n (25). Por
lo tanto, si los nucle�tidos en una hebra presentan un da�o, pueden ser eliminados
utilizando como molde a la cadena complementaria para la s�ntesis de la reparaci�n.
Existen tres mecanismos en la reparaci�n indirecta: reparaci�n por escisi�n de
bases o BER (Base Excision Repair), reparaci�n por escisi�n de nucle�tidos o NER
(Nucleotide
99Principales mecanismos de reparaci�n de da�os en la mol�cula de ADNExcision
Repair) y reparaci�n por apareamiento err�neo (Mitsmach Repair). El principio de
los tres mecanismos de reparaci�n implica: corte, empalme de la regi�n da�ada e
inserci�n de nuevas bases, seguido por la ligaci�n de la cadena (26).a)
Reparaci�n por escisi�n de bases - BER (Base Excision Repair)Es una v�a de
reparaci�n del ADN que corrige da�os oxidativos, derivados de la alquilaci�n
celular y despurinizaciones espont�neas. Es utilizada por la c�lula para la
protecci�n contra da�os y p�rdidas de bases generando sitios apur�nicos o
apirimid�nicos, m�s conocidos como sitios AP (27), los cuales pueden ser
mutag�nicos y citot�xicos si no son reparados correctamente, torn�ndose una amenaza
para la viabilidad celular e integridad gen�mica puesto que pueden bloquear la
replicaci�n o la transcripci�n (28). A lo largo de la evoluci�n la c�lula ha
seleccionado mecanismos para preservar y reducir el da�o en el ADN, tal es el caso
de la reparaci�n BER, donde la base alterada es retirada del ADN por enzimas
llamadas glicosilasas, que reconocen y remueven la escisi�n de bases con da�os
espec�? cos (29). En c�lulas de mam�feros existen 11 diferentes tipos de
glicosilasas que presentan caracter�sticas y modos de acci�n diferentes (30), las
cuales rompen el enlace glicos�dico que une la base con el az�car, originando un
sitio AP. Despu�s de ser retirada la base por la acci�n de la glicosilasa espec�?
ca, el sitio AP es reconocido por una AP-endonucleasa de la clase II, una enzima
capaz de eliminar el resto del nucle�tido ya sea por eliminaci�n �eta o por
hidr�lisis produciendo un corte (31); posteriormente, una exonucleasa degrada el
corte y deja un espacio en la cadena que es reparado por la ADN polimerasa
y ? nalmente sellado por la ligasa, que restaura la integridad de la mol�cula (32,
33) (Figura 3). Figura 3. Reparaci�n por escisi�n de bases - BER (Base Excision
Repair): Remueve las bases da�adas o modi? cadas mediante la glicosilasa y origina
un sitio AP (apur�nico/apirimid�nico), el cual es reconocido por la AP-
endonucleasa. Finalmente, una exonucleasa degrada el sitio AP en la cadena que es
sintetizado por la ADN polimerasa y sellado por la ligasa.
100Yaliana Tafurt Cardona, Maria Aparecida Marin MoralesBiosalud, Volumen 13 No. 2,
julio - diciembre, 2014. p�gs. 95 - 110 ISSN 1657-9550En cada c�lula humana se
generan diariamente aproximadamente 10.000 sitios AP que son reparados por una
m�quina proteica, el reparosoma, formado por cuatro prote�nas que act�an as�: la
UDG (Uracil-DNA glicosilasa, que elimina el uracilo), APE1 (AP-endonucleasa humana,
que corta la cadena az�car-fosfato y funciona como un factor de reducci�n-
oxidaci�n (redox) y mantiene los factores de transcripci�n en un estado activo
reducido (32), la polimerasa � (que introduce el nucle�tido que faltaba) y la
ligasa (que sella el corte) (34, 35).b) Reparaci�n por escisi�n de nucle�tidos
- NER (Nucleotide Excision Repair)Es un mecanismo vers�til que ha sido
ampliamente estudiado en los seres humanos. Repara da�os en el ADN causados por la
radiaci�n UV, agentes mutag�nicos, quimioterapia, entre otros (36). En este
mecanismo de reparaci�n participan diferentes prote�nas, 4 en procariotas (UvrA,
UvrB, UvrC y UvrD) (37) y m�s de 30 en mam�feros (36). El complejo de polip�ptidos
(UvrABC) act�a como endunucleasa, localizando la lesi�n y removiendo los
nucle�tidos con da�o (2). El proceso inicia con la prote�na UvrA que es la primera
en unirse y reconocer el da�o en el ADN el cual no es especi?co, debido a que
identi?ca una distorsi�n en la mol�cula de ADN y no la secuencia err�nea de
nucle�tidos, lo que permite corregir una amplia variedad de da�os (37). Por lo
tanto, la lesi�n es reconocida por un complejo de heterod�meros compuesto por dos
mol�culas UvrB con un d�mero de UvrA2 (complejo UvrA2+UvrB2) que causa la
desnaturalizaci�n local de la lesi�n. Posteriormente, UvrB se adhiere al sitio
de la lesi�n y se disocia de UvrA2 (38). UvrC se une a la cadena con da�o,
promoviendo dos escisiones en la misma (37). Finalmente, UvrD (helicasa II)
remueve el segmento de oligonucle�tidos lesionados y la ADN polimerasa I
sintetiza los correctos que son unidos por la ligasa (39) (Figura 4).El mecanismo
NER en eucariotas presenta las siguientes etapas: realiza un reconocimiento del
da�o en el ADN, donde act�an al menos 4 complejos diferentes (XPC, DDB, XPA y RPA)
que cumplen con esta funci�n. Posteriormente, reclutan complejos de reparaci�n a
trav�s de la acci�n de las helicasas (XPB y XPD), induciendo una incisi�n en la
hebra con da�o por acci�n de las nucleasas (XPG y ERCC1-XPF), en un fragmento de 24
a 32 nucle�tidos (40). Posteriormente, la s�ntesis y ligaci�n son realizadas por
la ADN polimerasa I y la ligasa (39). En eucariotas existen dos alternativas de
reparaci�n NER, global genome repair (GGR) y transcription coupled repair (TCR).
Estas v�as son iniciadas de manera diferente conforme al da�o del ADN. El GGR es un
proceso aleatorio que se produce lentamente, activado en regiones que no
transcriben, mientras el TCR es un proceso que est� estrechamente relacionado