Biodegradación por hongos de la madera tratada con CCA y la eliminación de sus componentes

metálicos

Yong-Seok Choi una, Jae-Jin Kim a, Min-Ji Kim un, Yuji Imamura b, Tsuyoshi Yoshimura b,
Gyu-Hyeok Kim un​⇑

resumen

En el presente estudio, se utilizaron 5 cepas de hongos de pudrición marrón-para el

procesamiento biológico de hongos (FB) de arseniato de cobre cromado (CCA) tratados con
desechos de madera: Antrodia vaillantii SEL8501, Fomitopsis palustris TYP0507 y TYP6137 y
Crustoderma sp. KUC8065 y KUC8611. Los aislamientos mostraron capacidad notable para la
degradación de la madera tratada y eliminación de los componentes de CCA a través de la prueba
de bloque de suelo Asociación Americana de Protección de madera. Entre ellos, Crustoderma sp.
KUC8611 decayó efectivamente la madera tratada, causando una pérdida de masa de hasta 60%.
F. palustris causó grandes lixiviación de CrO3 de hasta 79% y As2O5 de hasta 87%, pero sólo
lixiviación moderada de CuO de hasta 50%. Esta alta capacidad para la eliminación de CrO3 y
As2O5 mostró una fuerte relación logarítmica con la cantidad de ácido oxálico producido en la
madera podrida. La mayoría de los metales eliminados de la madera tratada durante el proceso de
decaimiento fueron depositados en la tira de suelo y alimentador. Se requieren nuevas
investigaciones para establecer la capacidad de los hongos seleccionados para FB de madera de
tamaño natural tratada con CCA.

1. Introducción

En los últimos 60 años, el arseniato de cobre cromado (CCA) ha sido uno de los conservantes a
base de agua más eficaces. Madera tratada con CCA ha sido ampliamente utilizado en muchas
estructuras, incluyendo las cubiertas residenciales, parques infantiles públicos y materiales de
construcción (Barray et al., 2009). Sin embargo, numerosos estudios han informado de los efectos
adversos de cromo y arsénico sobre la salud humana (Kwon et al, 2004;. Hamula et al, 2006;..
Barray et al, 2009), así como en el medio ambiente del suelo y el agua (y Lebow Foster, 2005;.
Townsend et al, 2005). Como resultado, los fabricantes de protectores de la madera en los Estados
Unidos y Canadá han suspendido voluntariamente el uso de la CCA para fines no industriales
(Hamula et al., 2006), y la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (USEPA) ha
restringido el uso de madera tratada con CCA para aplicaciones residenciales (USEPA, 2004). Su
uso también ha sido completamente prohibido en Corea (Choi et al., 2009). Sin embargo, si
interrumpe el uso de la CCA no reduce la cantidad de madera tratada con CCA todavía en servicio.
Por ejemplo, a partir de 2006, más de 6 105 m3 de madera tratada con CCA se mantuvo en
servicio en Corea (Choi et al., 2008). Habida cuenta de su vida útil de 20 a 50 años, el gran volumen
de la madera tratada con CCA actualmente en servicio requerirá la eliminación en los próximos 50
años (Shiau et al., 2000). Actualmente, muchos países disponen de los residuos de madera tratada
con CCA en los vertederos. Sin embargo, este método no es adecuado debido a la lixiviados de
vertedero de componentes metálicos. Moghaddam y Mulligan (2008) demostraron el potencial de
los suelos, el agua y la contaminación del medio ambiente después de su eliminación de los
residuos de madera tratada con CCA en los vertederos. De manera similar, muchos estudios han
informado de que los metales pesados ​nocivos, como el cobre, cromo y arsénico, pueden ser
lixiviados de los vertederos de escombros de construcción y demolición (Townsend et al, 2004;.
Saxe et al, 2007;. Jambeck et al, 2008. ; Dubey et al, 2009).. Aunque vertederos equipados con un
forro puede prevenir la lixiviación de metal en el suelo, hay una escasez de espacio en los
vertederos. En consecuencia, los métodos alternativos de eliminación deben desarrollarse. La
incineración también se ha utilizado para la eliminación de residuos de la madera tratada con CCA
en muchos países, entre ellos Corea, pero este proceso produce ceniza contaminada con metales
volar. Para aliviar los problemas causados ​por la eliminación en vertederos y la incineración de
desechos de madera tratada con CCA, el procesamiento biológico de hongos (FB) con hongos de
pudrición marrón-puede ser un método eficaz para el tratamiento previo. FB se puede utilizar para
disminuir simultáneamente el volumen de los desechos y eliminar los metales a partir de residuos.
Un número de estudios han investigado FB para la remediación de los residuos de madera tratada
con CCA (Illman et al, 2000;. Clausen y Verde III, 2003; Choi et al, 2009.). FB se considera un
método eficaz y fácil de costo para reducir el volumen de residuos y eliminación de los
componentes metálicos de los residuos (Illman et al., 2000). Para mejorar la eficiencia de FB, es
importante identificar los hongos útil, ya que estos podrían desempeñar un papel clave en el FB de
los residuos de madera tratada con CCA. Los estudios sobre la FB se han proyectado para los
hongos útiles para la biodegradación. Varios marrón-rot aísla, incluyendo Antrodia vaillantii,
palustris Fomitopsis, Meruliporia incrassata y Wolfiporia cocos, se han propuesto como candidatos
a FB de residuos de madera tratada con CCA (De Groot y Woodward, 1999; Illman et al, 2000;.
Clausen y Verde III, 2003). Entre ellos, 2 aislamientos de M. incrassata TFFH-294 y Mad-563 que
muestran la biodegradación superior de los residuos de madera tratados son capaces de reducir la
masa de bloques de madera tratados por 37% y 24%, respectivamente (Illman et al., 2000).
Recientemente, Choi et al. (2009) propusieron que Crustoderma sp., Que se aisló a partir de
residuos de madera tratada con CCA, es más eficaz para el FB de los aislados se informó
anteriormente. Hasta la fecha, el destino de los metales durante el FB no se ha investigado a
fondo. Se ha informado de que algunos hongos de cobre tolerante sobreproducción de ácido
oxálico, que puede afectar el movimiento metal durante FB de la madera tratada con CCA (Clausen
y verde III, 2003). Los objetivos de este estudio fueron investigar la capacidad de varios hongos
CCA-tolerantes para degradar la madera tratada con CCA y para confirmar la eliminación de los
elementos metálicos de la madera tratada con CCA durante el proceso de FB. Este estudio intentó
dilucidar la base para la eliminación de componentes de metal mediante la medición de la
cantidad de ácido oxálico producido durante la descomposición de la madera tratada con CCA.
Finalmente, se investigó también la migración de los metales eliminados de la madera tratada
durante el proceso de descomposición.

2. Materiales y métodos

2.1. Los aislados fúngicos

Un total de 35 hongos de pudrición marrón-se obtuvieron del Instituto de Investigación para

Humanosphere Sostenible, Universidad de Kyoto, Japón. Los hongos se transfirieron a partir de
cultivos a 2% de agar de extracto de malta (MEA) placas y se dejaron crecer en la oscuridad
durante 7-14 días a 27 _C antes de la prueba de caída de bioensayo para evaluar y madera
CCA-tolerancia y la eficiencia degradación. La tolerancia de la CCA hongos se determinó utilizando
un bioensayo in vitro, se describe como un "'prueba de opción' 'por Leithoff et al. (1995). Cinco
marrón-rot aísla, Gyrodontium sacchari GYV9595 (anteriormente denominado aurantiaca
Hygrophoropsis), un desconocido Polyporales sp. LAS6497, A. vaillantii SEL8501, y 2 cepas de F.
palustris TYP0507 y TYP6137, fueron identificadas como altamente tolerante a la CCA. Se midieron
las eficiencias de estas cepas en degradar la madera tratada con CCA. Dos hongos de pudrición
marrón-, Crustoderma sp. KUC8065 y KUC8611, que fueron reportados a tener una fuerte
capacidad de degradar la madera tratada con CCA (Choi et al., 2009), también se incluyeron en
este estudio. También se examinaron las temperaturas óptimas de crecimiento de cada
aislamiento de hongos, y estos valores se utilizaron para el ensayo de descomposición de la
madera tratada con CCA.

2.2. Preparación de las muestras tratadas con CCA madera

bloques de madera de albura (19 _ 19 _ 19 mm) de Pinus radiata (pino radiata, RP), Tsuga
heterophylla (cicuta occidental, WH), y Cryptomeria japonica (cedro japonés, JC) se prepararon a
partir de aire se secó juntas de vacío y fueron impregnados con una solución de CCA-C que
contiene 18,5% de CuO, 47,5% CrO3, y 34,0% As2O5 a un objetivo de retención de 4,0 kg m_3.
Después del tratamiento, las muestras fueron envueltos en bolsas de plástico y se acondicionarán
durante 2 días a 60 _C para permitir la fijación completa de los componentes de la CCA. Los
controles no tratados también se prepararon a partir las tablas secadas al aire. Los bloques de
madera se secaron luego al aire a temperatura ambiente durante más de 7 d. Para determinar la
retención de CCA de madera tratada, muestras de aserrín fino se obtuvieron a partir de bloques
tratados con CCA y se digirieron utilizando el método del ácido peróxido nítrico para disolver los
elementos de CCA según la Asociación de Protección de Madera Americana (AWPA) A07- 04
(AWPA, 2005a) . Los elementos de CCA en solución fueron analizados mediante el acoplado
inductivamente espectrometría de emisión óptica con plasma (ICP-OES) de acuerdo con AWPA
A21-00 (AWPA, 2005b). La retención inicial de CCA y los contenidos elementales se muestran en la
Tabla 1

2.3. Prueba de caída de

la capacidad de la fúngica seleccionado aísla para degradar la madera tratada con CCA se evaluó
como el porcentaje de pérdida de masa de acuerdo con AWPA E10-01 (AWPA, 2005c). Todos los
bloques tratados y no tratados fueron esterilizar con vapor durante 30 min en autoclave a 121 _C.
Una tira de alimentación (albura RP) fue colocado en el suelo de cultivo (Seungjin Fertilizantes,
Corea) en botella de cultivo y también fue esterilizado con vapor. Como referencia, se añadieron
68 ml de agua destilada a la botella de cultivo que contiene 150 g de suelo de cultivo antes de la
esterilización. Dos enchufes de hongos, que fueron eliminados de la pre-cultivo 2% MEA medios de
comunicación, se inocularon en cada borde de la tira de alimentador y se incubaron durante un
mínimo de 3 semanas hasta que la tira de alimentación estaba completamente cubierta por el
micelio. Dos bloques de madera se colocaron entonces en la tira de alimentador. Todas las
botellas fueron incubadas durante 12 semanas a la temperatura óptima de crecimiento
determinado para cada cepa fúngica. Después de la incubación, los bloques de ensayo se retiraron
de las botellas de suelo, con cepillo de micelio, se secó a 60 _C durante al menos 48 h, y se volvió a
pesar para determinar la pérdida de masa. Se calculó el porcentaje medio de pérdida de masa para
cada uno de los 5 grupos de bloques tratados y no tratados para cada uno de los hongos de
ensayo.

2.4. Análisis de los elementos de CCA en bloques tratados en descomposición

después de la exposición de hongos de 12 semanas, se midieron los elementos CCA retenidos en

los bloques tratados con caries para evaluar la cantidad de los elementos de CCA removidos
durante el proceso de descomposición utilizando los mismos procedimientos que para la
determinación de la CCA inicial la retención de la madera tratada con CCA.

2.5. Ensayo del ácido oxálico

Cada bloque descompuesto se extrajo de acuerdo con el método propuesto por Hunt et al. (2004).
Cinco mililitros de NaOH 0,1 N se añadieron a un tubo de centrífuga de 15 ml que contenía 0,1 g de
muestra molida madera podrida, mantenida a 65 _C durante 1 h, y se centrifugaron a 21.000 g
durante 10 min. El sobrenadante se acidificó con H2SO4 0,25% y se filtró a través de un filtro de
0,45 lm. El ácido oxálico en el filtrado se determinó mediante cromatografía de líquidos de alto
rendimiento de acuerdo con el método propuesto por Kim et al. (2009).

2.6. Migración de elementos CCA

CCA Los elementos en el suelo, tiras alimentador, y hifa fúngica cubiertas con madera tratada
decaído se analizaron después de la prueba de decaimiento para confirmar el transporte de los
elementos de CCA de la madera tratada decaído durante el proceso de descomposición. El
contenido de metal del suelo después de la exposición fúngica 12-sem se determinaron utilizando
ICP-OES después de la digestión usando el Método USEPA 3050B (USEPA, 1996). Fueron digeridos
hifa y el alimentador de tiras de hongos y luego se analizaron utilizando los mismos
procedimientos que para la determinación de la retención inicial de CCA en la madera tratada con
CCA. Esto se realizó durante 2 objetivo marrón-rot aísla, F. palustris TYP0507 y Crustoderma sp.
KUC8611, y uno de madera de especies, RP, tratados con CCA.

3. Resultados y discusión

3.1. Biodegradación por hongos de la madera tratada con CCA

cinco aislamientos de hongos de color marrón-rot, A. SEL8501 vaillantii, F. palustris TYP0507 y

TYP6137 y Crustoderma sp. KUC8065 y KUC8611, degradados al menos 10% del peso seco original
de la especie de madera 3 (Tabla 2). De los 3 tipos de madera, RP tuvo las mayores pérdidas de
masa en ambos bloques tratados y no tratados. Así, el RP utilizada en este estudio se considera
que tiene la durabilidad natural más baja contra la caries. Crustoderma sp. KUC8611 y KUC8065,
que son fuertes degradadores de la madera tratada con CCA (. Choi et al 2009), hizo que los
porcentajes más altos de degradación de RP tratados; que degradan CCAtreated RP albura por
60% y 54%, respectivamente (Tabla 2) y tratada con CCA WH y JC hasta en un 23% y 16%,
respectivamente. Choi et al. (2009) reportaron que Crustoderma sp. KUC8611 y KUC8065
notablemente degradadas RP CCA-tratado y podría degradar el abeto Douglas y WH tratada con
CCA en más de un 34%. Por lo tanto, Crustoderma sp. KUC8611 y KUC8065 pueden ser valiosos
para el FB de residuos de madera tratada con CCA, especialmente los que forman parte de RP. F.
palustris TYP0507 y TYP6137 también demostraron significativamente grandes capacidades para la
descomposición de madera tratada con CCA. F. palustris TYP0507 degrada RP tratada con CCA,
WH, y JC por 53%, 28% y 30%, respectivamente. La diferencia en la degradabilidad de la madera
tratada con CCA entre las cepas de hongos observados en este estudio, utilizando Crustoderma sp.
y F. palustris, se puede explicar por las variaciones degradabilidad intra-especies, según lo
informado por Arango et al. (2009). A. SEL8501 vaillantii también causó más de un 10% de
pérdidas masivas de todas las especies de madera tratada con CCA. Para todos los experimentos
utilizando RP y algunos usando WH, la madera tratada con CCA se decayó a un grado mayor que
los controles no tratados por las 5 cepas anteriores (es decir, dos aislados de Crustoderma sp., Dos
aislados de F. palustris, y A. vaillantii). Se están realizando estudios adicionales sobre las enzimas
extracelulares a fin de investigar las posibles causas de este resultado. G. sacchari GYV9595 y un
desconocido Polyporales sp. LAS6497 creció en la madera tratada con CCA, pero sólo causó ligeras
pérdidas de masa (8% o menos) (Tabla 2). Sobre la base de esta observación, se puede concluir
que no todos los hongos CCA-tolerantes pueden pudrir la madera tratada con CCA. Por lo tanto,
con el fin de seleccionar aislados fúngicos para FB de la madera tratada con CCA, es importante
para medir sus capacidades reales para madera en descomposición CCAtreated.

3.2. Eliminación de metal CCA durante el proceso de decaimiento

Los porcentajes de los metales extraídos de las muestras de madera tratada con CCA durante el
proceso de descomposición se muestran en la figura. 1. En la mayoría de los casos, los
componentes de cromo y arsénico fueron retirados más fácilmente de la madera tratada que eran
los componentes de cobre. F. palustris TYP0507 y TYP6137 eliminan cantidades significativas de
CrO3 (hasta 79%) y As2O5 (hasta 87%) a partir de las 3 especies de madera tratada, pero sólo
cantidades moderadas de CuO (hasta 50%). A. vaillantii SEL8501 también se elimina hasta el 70%
de la CrO3 y 72% de la As2O5 pero menos de 24% de la CuO. Aunque 2 cepas de Crustoderma sp.
lixiviado cantidades razonables de CrO3 y As2O5 del RP tratada con CCA, estas cantidades eran
relativamente bajos en comparación con su gran capacidad de degradar la madera tratada con
CCA. Las diferencias en la capacidad de los aislados fúngicos para extraer CCA podría ser debido a
diferencias en la cantidad de ácido oxálico producido durante el proceso de descomposición. Por
lo tanto, se determinó la cantidad de ácido oxálico producido en los bloques cariados. Además, se
investigó la relación entre los porcentajes de metales CCA retiró y la cantidad de ácido oxálico
producido.

3.3. La producción de ácido oxálico y su relación conde eliminación de metal

el cuadro3 muestra las cantidades de ácido oxálico producido en las muestras de madera en
descomposición durante el proceso de descomposición. Como era de esperar, los aislados fúngicos
que eliminaron las mayores cantidades de CrO3 y As2O5 de madera tratada con CCA producen
cantidades relativamente grandes de ácido oxálico durante el proceso de degradación. F. palustris
produjo la mayor cantidad de ácido oxálico (35,5 mg hasta G_1), seguido por A. SEL8501 vaillantii
(hasta 17,8 mg G_1), y luego las 2 cepas de Crustoderma sp. (Hasta 11,9 mg g_1). Se realizó un
análisis de correlación utilizando SAS versión 9.1.3 (SAS Institute, EE.UU.), lo que demuestra que la
producción de ácido oxálico se correlacionó con las tasas de CrO3 y la eliminación As2O5. Sin
embargo, no hubo correlación entre la producción de ácido oxálico y la velocidad de eliminación
CuO. Un análisis de regresión demostró altas relaciones logarítmicas entre la producción de ácido
oxálico y CrO3 (R2 = 0,898 a 0,945) y As2O5 (R2 = 0,712 hasta 0,923) la eliminación. Esto indica
que la eliminación de CrO3 y As2O5 de la madera tratada con CCA durante el proceso de
descomposición se vio afectada considerablemente por la producción de hongos de ácido oxálico.
Sin embargo, la producción de ácido oxálico no parece afectar a la lixiviación de CuO de las
maderas en descomposición tratada. Clausen (2000) encontraron que el aumento de la
concentración de ácido oxálico de 0% a 1% redujo la cantidad de arsénico (1,50 a 0,53 mg G_1) y
cromo (3,58 a 1,61 mg G_1) en un CCA oblea durante un proceso de remediación de doble usando
Bacillus licheniformis CC01 y ácido oxálico. Sin embargo, la cantidad de cobre que queda en la
oblea CCA se mantuvo sin cambios por el aumento de la concentración de ácido oxálico. Choi et al.
(2009) también informó de que más de 90% de arsénico y cromo se extrajeron de serrín tratada
con CCA en medios líquidos que contienen una alta cantidad de ácido oxálico (4,0 g L_1) producida
por un desconocido Polyporales sp. LAS6497, pero sólo había moderado de la extracción de cobre
(51%). En un estudio realizado por Kartal et al. (2004), Coniophora puteana retira más cobre que
hizo Laetiporus sulphureus del serrín tratada con CCA por fermentación líquida, aunque L.
sulphureus produce más ácido oxálico que C. puteana. Estos resultados sugieren que la
eliminación de CrO3 y As2O5 de la madera tratada con CCA se ve afectada significativamente por
la producción de hongos de ácido oxálico. Puede no haber una correlación entre la producción de
ácido oxálico y la eliminación CuO, porque el compuesto insoluble en agua, cobre-oxalato, formas
cuando el cobre reacciona con altas concentraciones de ácido oxálico (Kazi y Cobre, 1998; Clausen,
2000; Kakitani et al. , 2007, 2009).

3.4. La migración de los elementos CCA

Metales retirados de las muestras de madera tratadas durante el proceso de descomposición

migrado principalmente en el suelo; los metales restantes se depositan principalmente en la tira
de alimentación (Tabla 4). En la hifa fúngica de F. palustris TYP0507, fueron adsorbidos pequeñas
cantidades de metal (menos de 0,21 mg), mientras que 2,0 mg del CuO se adsorbió sobre la hifa
fúngica de Crustoderma sp. KUC8611. La capacidad de adsorción de metal por el micelio varía
según los tipos de metal y aislado fúngico. En el presente estudio, la adsorción de metal por hifa
fúngica participó en la eliminación de los ingredientes activos de CCA de madera tratada, como se
informó anteriormente (Chou et al, 1973;.. Pohleven et al, 1999; Trivedi y Patel, 2007). Debido
aislados fúngicos que habitaban en la tira alimentador podría producir continuamente ácido
oxálico, es posible que los metales en la tira alimentador también podrían ser extraídos y
acumulado en el suelo con el tiempo. En consecuencia, una técnica para la recuperación de
metales a partir de la tierra después de FB debe ser desarrollado para prevenir la contaminación
ambiental secundaria con el metal pesado y para la reutilización de los metales.
4. Conclusiones

En este documento, 5 aislamientos de hongos de color marrón-rot, A. SEL8501 vaillantii, F.

palustris TYP0507 y TYP6137 y Crustoderma sp. KUC8065 y KUC8611, fueron evaluados como
candiates para el FB de residuos de madera tratada con CCA. Ciertas especies de hongos, tales
como Crustoderma sp. y F. palustris, decayó efectivamente la madera tratada, causando pérdidas
de masa de hasta 60 y 53%, respectivamente. Durante la descomposición de la madera tratada,
especies de hongos eliminan grandes cantidades de CrO3 y As2O5. Por otra parte, las cantidades
de CrO3 y As2O5 retirados se correlacionaron significativamente con la cantidad de ácido oxálico
producido por los hongos durante la descomposición de la madera tratada con CCA. Para utilizar
CCA-tratada residuos de madera como la materia prima para los procesos de conversión
termoquímica, reduciendo el volumen de residuos por FB podría considerarse desventajoso. Sin
embargo, los metales que permanecen en las cenizas volantes después de la incineración también
pueden causar la contaminación del medio ambiente si no se elimina antes de la incineración. Los
vertederos no son un método de eliminación ambientalmente racional, ya que las capacidades de
los rellenos sanitarios son limitados, y es difícil obtener la aprobación pública de nuevos
vertederos. Por lo tanto, FB, que elimina simultáneamente metales a partir de madera tratada y
reduce el volumen de residuos de madera tratada, podría ser un método de pre-tratamiento
valioso para resolver los problemas asociados con los métodos de eliminación actuales. Sin
embargo, es importante que un método fácil para la recuperación y la reutilización de los metales
recogidos en el suelo durante FB debe ser desarrollado. Por último, para la aplicación práctica de
FB, más estudios deben aclarar las capacidades de desintegración de los hongos seleccionados
sobre la madera tratada con CCA fullsized.