Diseño y Preparación de Medios de Cultivo

Anyela Estefania Ciro Sanchez,201610849,

anyelacisa@unisabana.edu.co
Liseth Dayanne Saavedra Cortés,201511949,
lisethsaco@unisabana.edu.co
Universidad de la Sabana, Facultad de ingeniería, Laboratorio
de Biotecnología,
Profesor: Carolina Díaz Cárdenas
15 de octubre de 2018 Chía, Cundinamarca

Introducción
Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio se
denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien casi cualquier medio de
cultivo; otras requieren medios especiales y otras no pueden crecer en ninguno de los medios
inertes existentes hasta ahora. Los microbios que se introducen en un medio de cultivo para
que comiencen a crecer se denominan inoculo. Los microbios que crecen y se multiplican en
un medio de cultivo se denominan cultivo. Se dispone de una amplia variedad de medios de
cultivo para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio. Casi todos esos medios,
disponibles en el comercio, están construidos por componentes mezclados con anterioridad
y solo precisan el agregado de agua y luego de esterilización. De manera continua se elaboran
y revisan medios de cultivo para ser utilizados en el aislamiento y la identificación de
bacterias que son de inertes para los investigadores en, los campos de la alimentación, el agua
y la microbiología clínica. (Tortora,2007)
Para satisfacer el medio de cultivo se debe tener en cuenta criterios como contener los
nutrientes adecuados para el microorganismo especifico que se desea desarrollar. También
debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y una concentración
conveniente de oxígeno, tal vez ausente por completo. El medio que se vaya a sembrar debe
ser estéril, es decir, en un principio no debe contener microorganismos viables, de modo que
el cultivo contenga solo los microbios que se agreguen al medio. Por último, el medio de
cultivos sembrado debe incubarse a la temperatura correcta. (Tortora,2007)
Para favorecer el crecimiento microbiano un medio debe proporcionar una fuente de energía,
así como fuentes de carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y cualquier otro factor de crecimiento
que el organismo no pueda sintetizar. Un medio químicamente definido es uno del que se
conoce la composición química exacta. En el caso de un organismo químicamente
heterótrofo, el medio químicamente definido debe contener factores de crecimiento
orgánicos que actúen como fuente de carbono y energía. (Tortora,2007)
Objetivos

Objetivo General
• Determinar el efecto que hay sobre los macro y micronutrientes sobre el crecimiento
de
microorganismos filamentosos y no filamentosos.

Objetivos Específicos
 • Aprender a preparar medios de cultivos.
• Preparar los medios de cultivos químicamente definidos.
• Estimar cualitativamente el crecimiento de los microorganismos en los diferentes
medios de cultivo utilizados
Diagrama de flujo
• Reactivación de cepas a partir del banco de células primario

• Preparación de suspensiones celulares en solución salina al 0,85% (p/v)

• Preparación de medios de cultivo

• Preparación de purezas
 • Siembra por la técnica de aislamiento

Resultados

1. Prueba de pureza por medio de tinción de Gram

Microorganismos Streptomyces Staphylococcus Saccharomyces
aureus cerevisiae
Determinacion Microscopia Observada
Coloracion de Gram Gram positivas Gram positivas
Gram de la positivas
suspension
Coloracion de Violeta Violeta Violeta
Gram a partir de
una Colonia
Tabla 1. Determinacion de la pureza y analisis microscopico

2. Cambios de color en los medios evaluados

Características
de los medios
antes de la
siembra por
agotamiento
Características
de los medios
después de la
siembra por
agotamiento
Tabla2 . cambios de color en los medios evaluados

3. Características macroscópicas de los microorganismos recuperados en cada medio

Medio de Cultivo Características Macroscópicas

Agar Baird Parker Colonias negras con bordes blancos
Agar ISP2 Colonias blancas brillantes
Agar YPG o Saboreau Colonias blancas
Tabla 3. Caracteristicas macroscopicas de los microorganismos recuperados en cada
medio

4, Evaluación bioquímica por componentes en los medios evaluados

Medio de cultivo Componentes Utilidad de cada Verificación de

componente la utilización
para el de cada
microorganismo componente
Agar Baird Triptona, Extracto de Medio selectivo y Obtención de
Parker carne, Extracto de diferencial para el colonias color
levadura, Piruvato aislamiento de y negras de tamaño
sódico, Glicina, recuento de mediano
Cloruro de litio, estafilococos
Agaragar

Agar ISP2 Extracto de levadura, Caracterización de Obtención de

Extracto de malta, especies de colonias blancas
Dextrosa, Agar Streptomyces sp brillante

Agar YPG o Polipeptona carne y Utilizado en Obtención de

Saboreau caseina, procedimientos colonias blancas
DextrosaGlucosa cualitativos para brillantes
Agar- agar cultivo de
X dermatofitos
Incrementa la
selectividad del
medio para hongos
mediante la adición
de cloranfenicol.

Tabla 4. Evaluacion bioquimica por componentes en medios evaluados

Discusion

Las bacterias se tiñen por medio del cristal violeta, dicho colorante puede atravesar cualquier
tipo de pared bacteriana por lo que tiñe tanto bacterias Gram positivas como Gram negativas.
Debido a esto, es necesario aplicar lugol, que funciona como complejante, es un compuesto
formado principalmente por yodo que en este caso lo que hace es fijar el colorante aún más
a la muestra. El yodo de lugol y el cristal violeta forman un complejo insoluble en agua,
capaz de penetrar en la pared celular de las bacterias. (Peña, 2018)

Teniendo en cuenta los resultados que se muestran para la Imagen Nº1 tiene una coloración
violeta debido a que la Streptomyces corresponde a una bacteria Gram positiva esto se debe
a que sus paredes celulares están conformados por una capa gruesa de peptidoglicano,
fosfolipidops y cadenas de ácidos grasos que favorece a coloración, (Dehnad,Parsa Yeganeh,
Bakhshi, y Mokhtarzadeh, 2010).

Estos microrganismos muestran una producción de esporas en sus colonias, estas esporas son
de 1 µm o menos de diámetro Las esporas se forman por la fragmentación de los filamentos
y se transmiten en forma recta, ondulada o helicoidal. (Chater, 1993). Las colonias son de
crecimiento lento y se puede percibir un olor de suelo debido a la producción de un metabolito
volátil (Jüttner & Watson, 2007) En primer lugar las colonias son de superficie relativamente
lisa, pero posteriormente desarrollan una trama de micelio aéreo que puede aparecer granular,
pulverulenta o aterciopelada (Ambarwati, Sembiring, & Soegihardjo, 2012).

Imagen Nº1. Coloración de Gram experimental de Streptomyces sp

Según la coloración violeta de la Imagen Nº2 la Staphylococcus es una bacteria Gram

positiva debido a su capa gruesa de peptidoglicano. Esta bacteria es no formadora de esporas
y carece de filamentos, están presentes en la piel, cabello y zonas húmedas como las fosas
nasales y la garganta. Se puede observar que tiene la tendencia a agruparse en racimos
irregulares parecidos a un racimo de uvas. Es la especie más virulenta ya que tiene una
variedad de factores que contribuyen la producción de infecciones y enfermedades. Entre los
principales factores son la producción de varias enzimas y hemolisinas que contribuyen a la
invasión y destrucción de los tejidos y la producción de varias toxinas que pueden causar una
erupción hasta la falla de un órgano, causando fiebre escarlata y shock tóxico (Sabalete, s.f)
 Imagen Nº2. Coloración de Gram experimental de Staphylococcus aureus

La Saccharomyces se identifica como una levadura u hongo unicelular con gran utilidad
industrial para la producción de pan y cerveza debido a la alta capacidad fermentativa, en la
Imagen Nº3 se logra evidenciar su naturaleza Gram positiva debido a la coloración violeta
que presenta después de realizar la tinción. Esta levadura forma ascoesporas que es la
acumulación de 4 esporas Su morfología es elípticas u ovoides Este hongo durante la
deficiencia de oxigeno convierte la glucosa en diferentes intermediarios como etanol, CO2 y
glicerol ,este proceso es conocido como la fermentación alcohólica. Por medio de las rutas
metabólicas.

Imagen Nº3 . Coloración de Gram teórica de Saccharomyces cerevisiae (Cepariounicach,

2016)

Todos los agares representan una variación en sus cultivos, podemos encontrar que el Baird
Parker: Es un medio de cultivo muy selectivo ya que inhibe a casi todos los
microorganismos acompañantes de Staphilococcus. Esto se debe a que contiene piruvato,
glicerina y altas concentraciones de manitol que soportan el crecimiento de Staphilococcus,
Ademas contiene LiCl que inhibe el crecimiento de las bacterias Gram negativas, el telurito
inhibe el de las Gram positivas acompañantes y la anaerobiosis del cultivo produciendo una
capa de parafina que inhibe el crecimiento de Micrococcus. Se puede identificar que el
crecimiento de Staphilococcus se reconoce por una coloración negra debido por la reducción
de telurito a teluro metálico (Anónimo, s.f) Esta bacteria forma colonias características que
son negras o grises, brillantes, convexas, de 1,5-2,5 mm, a menudo con reborde opalescente-
blanco, rodeadas de un halo claro de 2- 5 mm de diámetro Otros estafilococos, Micrococcus
y Bacillus forman colonias sin alguna de las características descritas. Como ya se ha
mencionado, las colonias que se obtienen son de color negro y se obtuvieron colonias
convenzas realizando una comparación con el obtenido en el laboratorio, se puede observar
en la Imagen Nº4, que el microorganismo creció favorablemente obteniendo los resultados
deseados.

Imagen Nº4 . Cultivo de Staphylococcus aureus en agar

Baird Parker ISP2: Este medio se utiliza específicamente para el crecimiento de la

Streptomyces sp, está compuesto por extracto de levadura, extracto de malta y sus colonos
se obtienes blancas y brillantes como puede observarse en la Imagen Nº5. Se pudo obtener
resultados satisfactores ya que se observa colonias blancas y brillantes con la producción de
esporas mencionado anteriormente caracterizado por esta levadura

Imagen Nº 5. Cultivo de Streptomyces sp..

Cultivo de Streptomyces sp en agar IPS2 Saboreau: Este se utiliza para el cultivo de hongos
patógenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad se
recomienda sólo para el aislamiento primario de dermatofitos, con el agregado de
cicloheximida y cloranfenicol. El pH final es mucho menor que el de la mayoría de los
medios y tiende a eliminar el crecimiento bacteriano.
En la Imagen Nº6 se observa que para los resultados del respectivo agar se evidenció que el
cultivo presentó un buen comportamiento de crecimiento ya que las características que se
obtuvieron fueron las esperadas.

Imagen 6 . Cultivo de Saccharomyces cerevisiae en agar Saboreau

Conclusiones
• Se puedo concluir que es los microorganismos se encuentran en aislamiento de estos
mismos mediante el uso de tecnicas de esterilizacion, desinfeccion, aislamiento de
medios de cultivo y simbra, para que asi puedan ser estudiados y manipulados de una
manera mas correcta

• El desarrollo y crecimiento de los organismos varía de acuerdo al medio de cultivo

en el que se encuentre, debido a que cada uno requiere de una serie de nutrientes
específicos , para el caso de la Staphylococcus es de gran viabilidad utilizar el Agar
Baird Parker.

• Los tres microorganismos trabajados en el laboratorio Staphylococcus, Streptomyces,

y Saccharomyces se caracterizan por ser bacterias Gram positivas de acuerdo a los
resultados obtenidos para cada tinción

• El medio de cultivo Baird Parker ISP2 es altamente selectivo, favorece en gran

medida el crecimiento de Steptomyces sp
Bibliografía
Sabalete, T. Staphylococcus aureus. Tomado el 16/11/18 de
http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont /Staphylococcus_aureus.html
Sabalete, T. Streptomyces sp. Tomado el 16/11/18 de
http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont /Streptomyces.html
Cepariounicach. 2016. Saccharomyces cerevisiae. Tomado el 16/11/18 de
https://cepariounicach.wordpress.com/2016/ 10/06/saccharomyces-cerevisiae/
Medios de cultivo. 2013. Microkit: Medios de cultivo. Tomado el 16/10/18 de
http://www.medioscultivo.com/baird-parker- agar-2/
ISP Medium1.ISP Medium 2. ISP Medium 4. Tomado el 16/10/18 de
http://www.bd.com/europe/regulatory/assets /ifu/difco_bbl/277210.pdf
BD. 2006. BD Baird Parker Agar. Tomado el 16/10/18 de
https://www.bd.com/europe/regulatory/Asse ts/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-255084.pdf
Deteccion de bacterias de significado especial en alimentos: Staphylococcus. s.f. Tomado el
11/10/18 de http://www.ugr.es/~pomif/pom-ali/ma-i/ma- i-3-deteccion_staphilococcus.htm
Medios de cultivo. 2013. Microkit: Medios de cultivo. Tomado el 16/10/18 de
http://www.medioscultivo.com/baird-parker- agar-base-pharmacopea/
Microbiología clínica medios de cultivo. 2013. Tomado el 16/10/18
dehttp://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recurs os/12/medios-de-cultivo.pdf