SEPARACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN LA YEMA DE HUEVO
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Químico Farmacéutico Industrial
Porras Narváez Leonardo Uriel
Introducción
Los lípidos constituyen un grupo diverso
químicamente cuya diferencia definitiva es su
insolubilidad en agua. Tienen funciones biológicas
de almacén de energía (triacil glicéridos),
estructurales (fosfolípidos) y como cofactores y
hormonas (lípidos simples) [1] El colesterol, es un
ejemplo de esteroide. Además es un componente
esencial de la membrana celular animal y precursor
de la biosíntesis de todas las hormonas esteroideas,
la vitamina D y las sales biliares [2]
Objetivos
 Analizar los lípidos según su función y estructura
química.
 Identificar lípidos de acuerdo a su estructura
química mediante cromatografía en capa fina
 Determinar la concentración de colesterol en
yema de huevo experimentalmente
 Comprender la importancia del colesterol
Resultados
Tabla 1. Rf de fosfolipidos
MOLIBDATO BISMUTO NINHIDRINA YODO
RF 0.66 0.5 0.87 0.956
Foto 1. Rf de Fosfolípidos
Grupo: 3FM2 Sección: 3
Tabla 2. Concentración de colesterol µg
ABSORBANCIA µg DE COLESTEROL
0.077 20
0.168 40
0.304 60
0.314 80
0.423 100
0.091 20.2857
Discusión de resultados:
Se corrieron 4 placas cromatografías, con 2
aplicaciones de 2 µL cada una utilizando como fase
móvil una mezcla CHCl₃-CH₃OH-CH₃COOH-H2O
(68:25:8:4) y revelaron con 4 reactivos
diferentes.
La placa revelada con molibdato tuvo un Rf de
0.66 y manchas de color azul, este reactivo
identifica fosfolípidos en general, el Rf calculado
se tomó en las manchas más intensas, sin
embargo se observa una línea desde el punto de
aplicación debido a que existe gran cantidad de
fosfolípidos con diferencia de polaridad y por lo
tanto en la velocidad de corrimiento. La placa con
bismuto tuvo un Rf de 0.5, este reactivo identifica
fosfolípidos con grupo colina (Lisofosfatidil colina
y Fosfatidil colina). El reactivo de Ninhidrina
identifica fosfolípidos con grupo amino y tuvo un Rf
de 0.87 el cual se aproxima al valor de referencia
para Fosfatidil etanolamina (Rf 0.71). Finalmente
yodo indica la presencia de doble enlaces tuvo un Rf
de 0.956, muy cercano al de referencia para
fosfolípidos neutros. La diferencia de resultados con
los Rf de referencia proporcionados en el
laboratorio, puede deberse a las condiciones de
desarrollo por lo cual sería necesario correr el
cromatograma con una muestra patrón para la
identificación.
Tabla 3. Referencia de Rf Para conocer la concentración equivalente a un
huevo (yema) se realizaron los siguientes cálculos:
FOSFOLÍPIDO RF
LISOFOSFATIDIL COLINA 0.17 𝑃𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 (20.286 µg) − 5 µ𝐿
ESFINGOMIELINA 0.26
1
FOSFATIDIL COLINA 0.33 𝑦𝑒𝑚𝑎 − 8000 µ𝐿
FOSFATIDIL SERINA 0.33 2
FOSFATIDIL 0.71 20.286 µg∗ 8000 µ𝐿
𝑦𝑒𝑚𝑎 = (2) = 64,915.2µg =
5 µ𝐿
ETANOLAMINA
LÍPIDOS NEUTROS 1.0 64.9152 𝑚𝑔
Según la información reportada un huevo de tamaño
medio contiene unos 200 miligramos de colesterol,
Para la determinación de colesterol, este se hizo
la variación en el valor obtenido puede deberse a la
reaccionar con anhídrido acético y ácido
falta de experiencia utilizando las micropipetas,
sulfúrico, es decir en condiciones anhidras y
además también a la descalibración de las mismas, al
acidas. La secuencia de reacciones que tienen
utilizar un volumen tan pequeño es probable cometer
lugar consiste en una deshidratación y oxidación
un error.
iniciales del colesterol obteniéndose 3,5-
colestadieno. Conclusiones:
Este primer producto se polimeriza a bis- Existen diversos fosfolípidos en la yema de huevo y
colestadieno. En este sistema se forma un ion las pruebas de identificación son más cualitativas
pentaenilico con un máximo de absorción a 640 que cuantitativas.
nm [3] después de 5 minutos con agitación se Los fosfolípidos analizados pueden contener grupo
observó un color verde esmeralda, se construyó amino o grupo colina, pero no ambos.
En la prueba de yodo cualquier fosfolípido puede
una curva tipo con concentraciones conocidas de
dar un resultado positivo según presente o no
una estándar de colesterol y se determinó la instauraciones.
concentración en 5 µL de extracto de lípidos Se obtuvo un 32.4576 % de la concentración
mediante extrapolación en la gráfica y utilizando esperada de colesterol
la ecuación de la recta: Pregunta extra:
𝑦 = 0.0042𝑥 + 0.0058
𝑦 − 0.0058 0.091 − 0.0058
𝑥= ≫𝑥= = 20.286
0.0042 0.0042

Grafico1. Absorbancia Vs Esfingomielina

Absorbancia a 640 nm

0.45
Concentracion de colesterol
Referencias
0.4
[1] Nelson. D.L., Cox. M.M. 2009. Lehninger:
0.35
Principios de Bioquímica. 5ª Edición. Omega.
0.3 Pp. 341, 364
0.25 [2] Mckee. T., Mckee Jr. 2003. Bioquimica. La Base
0.2 Molecular de la Vida. 3ª Edición. McGraw-Hill
0.15
Interamericana. Pp. 344, 347
[3] http://www.seqc.es/download/revista/385/1221/
0.1
68887212/1024/cms/Qu%C3%ADmica%20Cl%
0.05
C3%ADnica%201994;13%20(7)%20496-
0 503.pdf/ (Fecha de consulta 16-Octubre-2018)
0 20 40 60 80 100 120
µg de colesterol