Informe de laboratorio No.

Efecto de sustancias biocidas

Ayala Diego, Cuero Jordy, Rojas Luis
Estudiantes de la asignatura IAI330-2 Microbiología General, Carrera de
Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos, Universidad de las Américas,
Quito-Ecuador
Fecha: 20 de enero 2018
Resúmen Abstract
En el presente trabajo se menciona la In the present work it is mentioned the
importancia con la que los antibióticos han importance with which antibiotics have
cargado desde su descubrimiento por el loaded since its discovery by the scientist
científico Avicena (980-1037). Se describe Avicenna (980-1037). The effect that
el efecto que Penicilina, Novobiocina Penicillin, Novobiocin Cocalphenicol and
Cocalfenicol y Oxacilina tuvieron sobre Oxacillin had on cultures of Escherichia
cultivos de Escherichia coli y Bacillus coli and Bacillus subtilis in nutrient agar
subtilis en medios de cultivo Agar culture media is described. The effect of
nutriente. Se describe también el efecto submitting a clip coated in Escherichia coli
que tuvo someter un clip bañado en to solutions of sodium hypochlorite at 5%
Escherichia coli a soluciones de hipoclorito and 0.5% was also described and then
de sodio al 5% y al 0.5% para después incubated for 1 day. It concludes
incubarlos por 1 dia. Se concluye reaffirming the importance of antibiotics
reafirmando la importancia de los and mentioning important biosecurity
antibióticos y mencionando factores factors that must be taken into account
importantes de bioseguridad que se deben
tomar en cuenta.
 1. Introducción

Los microorganismos son seres no perceptibles a simple vista, pero su presencia o

ausencia influye fuertemente en el estilo de vida de todo ser viviente. Un filósofo
persa llamado Avicena (980-1037) es considerado como el príncipe de la medicina
moderna por sus escritos ‘El libro de la curación’ y ‘El canon de la medicina’ que
hablan sobre síntomas de enfermedades y su tratamiento quirúrgico, terapéutico y
farmacológico (Escuela de medicina estética AVICENA, 2005). La clasificación
moderna de los antibióticos se puede basar en su espectro o el mecanismo de
acción de los mismos que los divide en varios grupos de antibióticos como los B-
lactanticos, tetraciclinas, sulfonamidas, glucopéptidos, aminoglucósidos (Prat, 2006).
La medicina moderna se ve fuertemente afectada por la resistencia antimicrobiana,
ésta amenaza global provocada por uno inadecuado de antibióticos está en la mira
de todo el planeta y la preocupación crece a diario (OMS, 2017).
La Salmonella spp. es 1 de las 4 causantes de diarreas a nivel mundial y se han
encontrado varias cepas resistentes a los antibióticos lo cual hace a éste
microorganismo altamente peligroso (OMS, 2017). Según la OMS (2017) 1 de cada
10 personas la contraen diariamente y éstas presenta síntomas a partir de las 8-20
primeras horas de contraerla. La Escherichia coli es una enterobacteria
generalmente inocua, pero si ingresa al tracto alimenticio previo ésta causará diarrea
por la toxina Shiga producida. Es un microorganismo termosensible por lo que su
presencia es controlada cocinando bien los alimentos

2. Objetivos

Objetivo General
Evaluar el efecto inhibidor de crecimiento de microorganismos de varias sustancias.
Objetivos Específicos
● Determinar el efecto inhibidor del hipoclorito de sodio al 5% y al 0,5% sobre
Escherichia coli
● Determinar el efecto inhibidor de la oxacilina sobre Escherichia coli y Bacillus
subtilis
● Determinar el efecto inhibidor de la penicilina sobre Escherichia coli y Bacillus
subtilis.
● Determinar el efecto inhibidor del clorafenicol sobre Escherichia coli y Bacillus
subtilis.
● Determinar el efecto inhibidor de la novobiocina sobre Escherichia coli y
Bacillus subtilis.

3. Materiales y métodos
Materiales
 Material Cantidad
Suero fisiológico 2

Pinzas 1

Pipeta automática 1

Clips 3

Espectrofotometro 1

Incubadora (35-37°C) 1

Asa de Digralsky 1

Reactivos Cantidad
Hipoclorito de sodio (5%) 1 tubo

Hipoclorito de sodio (0.5%) 1 tubo

Caldo de tripteina de soya 3 tubos

Escherichia coli 1 tubo

Bacillus subtilis 1 tubo

Novobiocina (NV30) 2 pastillas

Chloranphenicol (C30) 2 pastillas

Oxacilina (Ox1) 2 pastillas

Penicilina (P10) 2 pastillas

Agar Muller Hinton 2

Métodos
Para evaluar el efecto biocida de algunas sustancias se realizó el siguiente
procedimiento:
Se extendió un clip y se lo sumergió con las pinzas por unos segundos en un cultivo
de Escherichia coli, a continuación se lo sumergió directamente a un tubo de ensayo
con caldo nutritivo el cual fue cerrado y utilizado como testigo, luego con ayuda de
las pinzas se sumergieron dos clips en el cultivo de E. coli. Luego se sumergieron
los clips por separado en soluciones de hipoclorito de sodio con concentraciones de
5% y 0.5%, rápidamente se sumergieron los clips en suero fisiológico (solución
salina) por pocos segundos, se los dejó sumergidos en caldos de cultivo por
separado y finalmente se los introdujo en la incubadora con una temperatura de
37°C.
Pasadas 24 horas se tomaron muestras de 100 µL de cada tubo, testigo, cloro en
concentración del 5% y 0.5%, se las colocó en cámaras del espectrofotómetro y se
tomó la medida de su absortividad en cada muestra.

Del cultivo de E. coli y Bacillus subtilis se tomó 100 µL que fueron sembrados con el
asa de Digralsky en agar Muller Hinton por separado, se esperó a que se seque la
muestra tomada, se colocaron 4 discos con sustancias inhibidoras de crecimiento
bacteriano, Novobiocina, Chloranphenicol, Oxacilina y Penicilina alejados unos de
los otros y de las paredes de la caja petri,se presionó los discos contra el agar con el
objetivo de que estos no se despeguen, se sellaron las cajas y se las introdujeron en
las incubadoras durante un tiempo de 24 horas, transcurrido este se apreciaron los
resultados del poder inhibidor de las sustancias.

4. Resultados

Tabla 1: Resultados de absortividad obtenidos de las distintas muestras

Muestra Absortividad (A)

M1 0.001A

M2 1.150A

M3 0.837A

M4 0.023A

M1: Tripteina de soya testigo sin ningun microorganismo inoculado anteriormente.

M2: Escherichia coli inoculada en caldo sin previa desinfección
M3: Escherichia coli inoculada en caldo de cultivo con previa aplicación de
desinfectante al 0.5%
M4: Escherichia coli inoculada en caldo de cultivo con previa aplicación de
desinfectante al 5%

Tabla 2: Resultados obtenidos de la incubación de Escherichia coli y Salmonella

spp. en agar Mueller Hinton con los distintas capsulas de antibióticos (Penisilina P10,
Novobiocina NV30, Chlorophenicol C30 y Oxacilina Ox1). Se aprecia que
Escherichia coli es resistente a Oxacilina y a Penicilina y sensible ante la presencia
de Cloranfenicol y Novobiocina mientras que Bacillus subtilis es sensible a los 4
antibióticos usados.

Antibiótico Microorganismo Sensible (mm) Intermedio (mm) Resistente (mm)

Medida del halo de inhibición de Oxacilina x>13mm 11mm-12mm x<10mm

Oxacilina Bacillus subtilis 20.7 - -

 Escherichia coli - - 5
Medida del halo de inhibición de Penicilina x>15mm - x<14mm

Penicilina Bacillus subtilis 25.3 - -

Escherichia coli - - 6

Medida del halo de inhibición de Cloranfenicol x>17mm 13mm-16mm x<12mm

Cloranfenicol Bacillus subtilis 26.5 - -

Escherichia coli 25 - -
Medida del halo de inhibición de Novobiocina x>16mm 13mm-15mm x<12mm

Novobiocina Bacillus subtilis 32 - -

Escherichia coli 16 - -
Tabla adaptada de Normas CLSI-NCCLS, 2005.

Halo de
inhibición grande
de Novobiocina
Halo de
inhibición medio
de Chlorphenicol
Halo de
inhibición medio
de Penicilina
Halo de
inhibición
medio de
oxiciclina

Figura 1: Caja petri con Bacillus subtilis sometido a Penisilina P10, Novobiocina
NV30, Chlorophenicol C30 y Oxacilina Ox1. Se aprecia la suceptividad de éste
microorganismo a todos los antibióticos empelados
 Halo de inhibición
pequeño de
Penicilina
Halo de
inhibición
grande de
Chlorophenico
H
l alo de
inhibición medio
de Novobiocina

Figura 1: Caja petri con Escherichia coli sometido a Penisilina P10, Novobiocina
NV30, Chlorophenicol C30 y Oxacilina Ox1. El microorganismo es resistente a
Oxacilina y a Penicilina y sensible ante la presencia de Cloranfenicol y Novobiocina

5. Discusión

La absorbancia es una magnitud empleada para relacionar la concentración de un

soluto y su capacidad para absorber la radiación (Brunatti & Martín, 2010). Ésta es
cuantificable usando un espectrofotómetro de absorción (Universidad Miguel
Hernández de Elche, s.f.)

Los antibióticos son sustancias que pertenecen a un grupo importante con distinto
comportamiento farmacodinámico y farmacocinético. Son altamente específicos
sobre alguna función o estructura del microorganismo, poseen una alta capacidad
biológica en bajas concentraciones y su toxicidad es muy selectiva frente a los
patógenos que van a ser obligados a morir por acción del antibiótico. La función más
importante de estos es disminuir el número de patógenos desarrollados en el
organismo, dándole así eficacia al sistema inmunológico para que pueda eliminarlos.
(Seija & Vignolli, 2008).

El modo de acción de los antibióticos en el organismo de un ser vivo actúa de

manera agresiva sobre el patógeno que está causando problemas y por tanto es
capaz de inhibir el crecimiento de estos hasta llegar a la eliminación de los mismos.
Se dividen en inhibidores de formación de la pared bacterias, de la duplicación del
ADN, de vías metabólicas, etc. (Seija & Vignolli, 2008).
Los antibióticos de amplio espectro han sido uno de los más degenerativos para el
desarrollo de bacterias Gram+ puesto que son bacteriostáticos. Además inhiben la
síntesis proteica bacteriana donde actúa sobre la subunidad 30S o 50S del ribosoma
bacteriano. (Pérez, 2012)

Los bactericidas son sustancias heterogéneas que constituyen a un grupo de

antibióticos donde atacan a las bacterias para provocar su muerte o inhibir su
proliferación. Dichas sustancias son secretadas por los organismos como un modo
de defensa o sintetizadas en laboratorio .Otro tipo de sustancias pueden ser los
bacteriostáticos que inhiben la proliferación de estas sin matarlas. Los compuestos
bactericidas pueden clasificarse por su modo de acción que los divide en:

Antibióticos que afectan síntesis de proteínas. Éstos se desenvuelven afectando

el funcionamiento normal de los ribosomas, afectan la síntesis de ARN, afectan la
elongación ,translocación o iniciación de la cadena peptídica. Pueden ser
Aminoglucósidos, tetraciclinas, espectrinomicina que afectan desde el extremo 30s y
lincosamidas, cocalcifenicol, ácido fusídico, macrólidos que afectan desde extremo
50s. (Vives et al. 2004)
Antibióticos que afectan la síntesis de material genético: Se emplean
Rifamicina, actinomicina D, ácido nalidíxico, ciprofloxacina, norfloxacina que
detienen enzimas provocando muerte celular.
Antibióticos que afectan síntesis de pared celular: Son sustancias que interfieren
en la biosíntesis de la pared de peptidoglucano, que afectan a la bacteria incluso en
diferentes etapas de desarrollo como penicilinas, cefalosporinas, vancomicina,
bacitracina, oxacilina, nafcilina. (López, 2015).
Antibióticos que afectan la membrana plasmática: Se usan imidazoles,
polimixinas nistatina, anfotericina B y polienos que desempeñan una modificación de
permeabilidad haciendo que escape todo en su interior. (Basualdo, 1996)
Antibióticos antifílmicos: Son medicamentos empleados para enfermedades como
tuberculosis, lepra brucelosis. Algunos bloquean la síntesis de ácidos nucléicos,
pertenecen a éste grupo el etambutol, pirazinamida, isoniazida, estreptomicina,
rifampicina. (UNAM, 2005)
Antibioticos que afectan metabolitos en citoplasma e impiden su uso: Se
emplean sulfamidas y trimetromrima. Según Basualdo (1996) las sulfamidas
paralizan la sintesis de acido folico.

Los antimicrobianos también se pueden dividir en:

B-lactámicos: Comparten un anillo central y participan importantemente en la

inhibición de síntesis de pared celular. El anillo B-Lactam determina si es que el
agente presente es penicilina, carbapenem o cefem.
Macrólidos: Se relacionan principalmente con inhibir la síntesis de proteínas en el
ribosoma. Además pueden atacar tanto a bacterias Gram+ como a Gram-
Glucopéptidos: Su modo de acción es parecido al b-lactámico sin embargo la
diferencia radica en la inhibición de formación de la pared celular en sitios distintos a
los de dicho antibiótico. Por otro lado están enfocados principalmente en las Gram+.
Aminoglicosidos: Se usan para curar infecciones por acción de bacterias aeróbicas
Gram- puesto que se centran en la inhibición de proteínas bacterianas a nivel
ribosomal, donde estos poseen un tipo de droga que posee distinta estabilidad a las
enzimas que modifican los aminoglicósidos.
Quinolonas: Participan en la inhibición de actividad de ADN girasa de varias
bacterias Gram+ y Gram-
Sulfonamidas: Este antimicrobiano posee algunos componentes quimioterapéuticos
con un espectro igual de actividad que resulta de la inhibición del metabolismo del
folato. (ISP, 2014).

La resistencia microbiana puede estar dada por algunos factores, esta puede ser
intrínseca por procesos evolutivos naturales, como lo es la expulsión de productos
antimicrobianos, elementos residuales y tóxicos; o transferencia de material
genético. La importancia de los antibióticos y su desarrollo muchas veces determina
las expectativas de vida de una población ya que las enfermedades pueden
convertirse en pandemias si no son controladas a tiempo con el medicamento
adecuado. La carrera contra la resistencia microbiana es una batalla interminable en
la que científicos de la ONU (2001) han desarrollado planes de contingencia que
relacionan pacientes, quienes prescriben medicamentos, hospitales, gobiernos
nacionales, sistemas de salud, organismos de desarrollo de vacunas.

6. Conclusiones
Se puede utilizar al hipoclorito en concentraciones variables como controlador del
crecimiento bacteriano, esta aplicación depende al enfoque de campo y el tipo de
microorganismo.
Sustancias como Novobiocina, Chloranphenicol, Oxacilina, Penicilina, presentaron
efectividad al momento de controlar a Bacillus subtilis, a diferencia de Escherichia
coli la cual presentó susceptibilidad únicamente a los compuestos Novobiocina y
Cocalciferol.
El desarrollo de antimicrobianos es un problema que todas las civilizaciones
padecen por la resistencia de los microorganismos, es por eso que organizaciones
internacionales tienen la obligación de desarrollarlos asegurando efectividad.

7. Referencias

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cepas de Salmonella aisladas de ponedoras comerciales en colombia.
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Nacional de Colombia. Recuerado de:
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