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GENESYS
ANALITICA Curso de Entrenamiento para usuarios
De Sciex
Nancy Torres S.
Especialista de aplicaciones
ntorres@genesysanalitica.cl
1 © 2012 AB SCIEX
2 © 2012 AB SCIEX
3 © 2012 AB SCIEX
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GENESYS
ANALITICA Introducción de Muestras
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5 © 2012 AB SCIEX
GENESYS
ANALITICA
Ionización
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2
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Fuentes de Ionización
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focalizado el spray
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Gas nebulizer (GS1): Altos Flujos requieren altos valores para GS1
Heater gas (GS2): Altos Flujos requieren altos valores para GS2
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•Acidos:
Ácido Acético a 0,1 -1%
Ácido fórmico a 0,1%
Ácido trifluoroacético, sobre 0,1% puede producir supresión
( no utilizar en modo negativo)
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Picos
(M±nH)n+
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Probe temperatura
Corona de descarga
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ESI
APCI & APPI
Ventajas:
Ventajas:
•Aplicable a un rango amplio de análisis
•Moléculas con baja polaridad pueden ser Ionizadas
•Moléculas termolábiles y volátiles
•La detección de las masas depende de la
usualmente no da problemas
• Sensibilidad de estas
•Mínima fragmentación del Ion molecular
•Utilización de altas concentraciones de Buffer
•Moléculas con alto peso molecular
permitidas
pueden ser analizadas (múltiple cargas)
•Alta sensibilidad
Desventajas:
Desventajas:
•Analitos termoestables sobre 130ºC
•Supresión Iónica: competencia de los •Analitos deben ser volátiles
Iones para salir de la gotita
•Composición de la fase móvil afecta la
sensibilidad
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GENESYS
ANALITICA
Producción del Ion
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Ÿ Sin Supresión
Ÿ En presencia de
TEA, Progesterona
no es posible
visualizarla
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Bomba de infusión: una conc. standard de una mezcla de analito/IS (por ejemplo
50 ug/mL a 50 uL.min)
Bomba de HPLC: el flujo de fase movil especificado para el ensayo
Extraer e inyectar en el sistema así dispuesto una muestra no contaminada
(Matriz blanco)
Observe lo que pasa con la señal (línea de base)
100
100
-15 Time
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
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0
1903TSI003 Sm (Mn, 1x3) MRM of 4 Channels ES+
0.66 2.83 4.39 377.36 > 303.3
100 0.06
1.41e7
0
1903TSI003 Sm (Mn, 1x3) MRM of 4 Channels ES+
0.10 4.10 354.28 > 211.26
100
1.87 1.37e7
0
1903TSI003 Sm (Mn, 1x3) MRM of 4 Channels ES+
1.02 4.21 349.32 > 206.24
100
1.87 1.07e7
0 Time
0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00
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GENESYS
ANALITICA Transferencia del Ion
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Linear Accelerator™
Turbo V™ source and Ion trap
Curtain Gas™ interface More efficient and faster
Unmatched robustness Q TRAP® scanning
and ruggedness
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Produces increased
sensitivity over a
4000 QTRAP® in
MRM and trap modes
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Filtro de Iones
Producción Transmision Filtro de
Fragmentación Procesa Iones Detección
del Ion del Ion Iones
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Neutral Loss Scan (NL) Filtro (scan) Fragmenta Filtro (scan offset)
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ANALITICA Cuadrupolos
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+–
+–
+
+
+
+
– –
+
– –
+
+
+
+
+
+
+–
+–
Uma
2.
3.
4.
5.
6.
1. Íon
Repulsão
Voltagem
Movimento
... voltagem
entra noRF
e do
DC
atração
campo
muda
íon
permite
na
em
dos
aelétrica
polaridade
direção
direção
quadrupólos.
que entre
umdo
do
íon
causando
quadrupólo
quadrupólo
o m/z
íon e os
passe
quadrupólos
repulsão
com pelos
polaridade
equadrupolos.
atração
de oposta.
acordo
do íon com
ao aquadrupólo
polaridade.de
acordo com a polaridade.
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A= aceleración
q= carga
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* El FWHM (Full Width at Half Maximum) es la anchura a media altura que presenta un
determinado pico.
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*El FWHM (Full Width at Half Maximum) es la anchura a media altura que presenta un
determinado pico.
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DP CEP CXP
EP
LINAC™ (CE)
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Qurved LINAC®
Collision Cell
entrada
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CROSS-TALK
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GENESYS
ANALITICA Modos de Adquisición
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Fragmentación
Con Iones cargados de forma unitaria, la Energía de Colisión es
transformada en energía vibracional rompiendo los enlaces:
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Ÿ LC MS MS
– Product Ion
– Entrega información estructural a través de los fragmentos del
ion original.
– Precursor Ion
– Entrega información estructural de la fuente original ion(es) para
un ion producto específico.
– Neutral Loss
– Entrega información de una clase de compuestos específicos.
– MRM
– Usado para Cuantificar, solo los iones de interés son
monitoreados, es muy sensible.
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X
XX
Como media, se requieren 15 puntos (o al
X X menos 10) para integrar con precisión un
pico cromatográfico
X X
(Anchura del pico)/(número de puntos)=
X X
30/15 = 2 segundos
X X Se necesita 1 punto cada 2 segundos
(2000 ms)
X X
X X
30 segundos
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X
X Si “dwell time” permanece constante;
el tiempo para cada compuesto es
2000 ms: 2000 ms
X
X + 2000 ms
-----------
X 2 compuestos: 4000 ms
X
X X
X 30 segundos / 4 s
X = 7.5 puntos sólo!
X X
X XX
XXXXXXXXX X X X X X X X XX
30 segundos
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XIC of +MRM (9 pairs): Period 1, 445.1/341.0 amu from Sample 43 (100ng/ml 1ml/min) of Data... Max. 1350.0 cps.
1.09e6 Chloramphenicol
1.05e6
1.00e6
9.50e5
9.00e5
Positive ESI Negative ESI
8.50e5
8.00e5
7.50e5
7.00e5
6.50e5
6.00e5
5.50e5
5.00e5
4.50e5
4.00e5
3.50e5
Sulfamethazine
3.00e5 Sulfamethoxazol
2.50e5 Sulfathiazol
2.00e5
1.50e5
Sulfaguanidine Sulfamerazine
1.00e5
5.00e4
Streptomycine OxytetracyclineChlortetracycline
0.00
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
85 Time, min © 2012 AB SCIEX
1. 7e6
Many MRM transitions with long cycle time – insufficient number of data points
1. 5e6
1. 0e6 3.1
9.1e4
8.0e4
5. 0e5
0.58
6.0e4
cycle
0. 0 4.0e4
0. 5 1.0 1.5 2.0 2.5 3 .0 3 .5
Time, m in
4 .0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7. 0 time
2.0e4
0.0
2. 9 3.0 3.1 3. 2 3.3
cycle Time, min
time
Many MRM transitions with short dwell time – for better qualitative data
3.1
1.7e6 1.11e 5
1.5e6 1.00e 5 cycle
8.00e 4 time
1.0e6
6.00e 4
4.00e 4
5.0e5
0.58
2.00e 4
0.0 0.00
0. 5 1. 0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6. 0 6. 5 7. 0 2.9 3.0 3.1 3.2 3.3
Time, m in Tim e, min
cycle
time
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1.7e6
1.5e6
1.0e6
5.0e5
0.58
0.0
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0
Time, min
29
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XICof+MRM(150pairs): 254.2/198.1amuExpected RT:4.9ID: Irgarol 1fromSample4 (fast LCsMRM20)ofTest_fast sMRM.wiff (Turbo ... Max.1.7e6 cps. XIC of +MRM (150 pairs): 297. 1/159.2 Da I... Max. 3.1e4 cps. XIC of +MRM (150 pairs): 297.1/159.2 am... Max. 1.1e5 cps.
1.7e6
Pesticidescreeningusing150MRMtransitions 4.91
3.0e4
Imazalil + Thiabendazole
9.3 Imazalil + Thiabendazole
5.1
Intensity, cps
1.5e6 1.00e5
in Grapefruit in Grapefruit
8.00e4
2.0e4
1.0e6
6.00e4
1.0e4 4.00e4
5.0e5
2.00e4
1.7e5
Metamitron 1.48
CV=8.8% 1.6e6
Irgarol 4.91
CV=5.6% 8000
7.9 Metazachlor 1.5e4
3.9 Metazachlor
Intensity, cps
1.5e5 1.4e6
in Apricot in Apricot
Intensity, cps
2.3e5
sMRM 1.50
CV=2.4% 1.7e6
sMRM 4.91
CV=2.3% 7800 Methomyl Intensity, cps
5000
Methomyl
1.5e6
in Grapes in Grapes
Intensity, cps
2.0e5
CV=2.2% CV=2.9% 6000 4000
1.5e5 0.8
1.0e6 3000
4000
1.0e5 2000
5.0e5 2000
5.0e4 2.8 1000
0 0
0.0 0.0 2 4 6 8 10 12 14 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 1.50 1.55 1.60 1.65 1.70 1.75 4.65 4.70 4.75 4.80 4.85 4.90 4.95 5.00 5.05 5.10 5.15
Time,min Time,min Time, min Time, min
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GENESYS
ANALITICA Metodologías
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30
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3.0e 5 8.1
O
2.4e 5 OH
445à428
OH O OH O NH2
1.8e 5
Intensity, cps
1.2e 5
0.4e 5 445à410
7.3
3.4e 5
Tetracycline 445à410
2.8e 5
N
OH
2.2e 5 OH
O
1.6e 5
OH
OH O OH O NH2
0.8e 4 445à427
0.2e 4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
91
Time, min © 2012 AB SCIEX
Solvent
Calculated
Pond Water Quantifier/Qualifier
0.008µg/L Ratio = 0.39
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Nancy Torres S.
Especialista en Cromatografía
ntorres@genesysanalitica.cl
93 © 2012 AB SCIEX
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