TITULO: Diluciones y medios de cultivo

OBEJTIVO GENERAL:

Verificar la calidad del producto mediante análisis microbiológicos de acuerdo con

las normas de calidad establecidas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

 Realizar los análisis de calidad según protocolos establecidos.

 Realizar la toma de muestras para análisis de control de calidad según los
protocolos o procedimientos establecidos.

INTRODUCCION:

Los microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza,

por lo que siempre están presentes en diversos productos, especialmente en
aquellos que favorecen de algún modo su desarrollo. Los alimentos por su
producción primaria, generalmente tienen una importante microbiota “normal”,
según la región y condiciones en que se producen; además, su composición
tiende a conservar dicha flora y, por supuesto, le proporciona nutrientes de
manera que, si las condiciones lo permiten, los microorganismos pueden
multiplicarse en los alimentos. Como consecuencia de este desarrollo microbiano,
los alimentos pueden deteriorarse y perder sus atributos.

Dado el tamaño de las poblaciones microbianas que pueden estar presentes en un

alimento, que van desde algunos miles hasta varios millones de células por gramo,
su determinación cuantitativa requiere la preparación de diluciones conocidas de
la muestra. En esta práctica de laboratorio se establece la forma general de
preparar dichas diluciones. Lo más conveniente es preparar una dilución primaria
y, a partir de ella, todas las necesarias para poder contar los microorganismos
presentes. Posteriormente se utiliza el agar que es un elemento solidificante muy
empleado para la preparación de medios de cultivo, y finalmente nos llevara a
encontrar el número de microorganismos por unidad de volumen, hasta asegurar
que después de la incubación se obtenga un resultado cuantificable. Este
resultado puede ser la cuenta de colonias en placas o la observación de
resultados proporcionales al tamaño de la población, en el caso de tubos o
matraces.
MATERIALES Y METODOLOGIA:

MATERIALES

 Asas estériles
 Cajas Petri estériles
 Agar nutritivo
 Pipetas graduadas estériles
 Mecheros
 Agua peptonada al 0.1 %
 Incubadora a 35 º C +/- 2 º C
 Contador de colonias.
 Balanza analítica.
 Homogenizador o stomacher
 Bolsas para stomacher
 Frascos bromatológicos y tubos tapa rosca.

METODOLOGIA:

Para la realización del análisis se hace necesario preparar previamente los

homogenizados y diluciones y luego aplicar la técnica de siembra seleccionada.

 Al tener el agua peptonada preparada, se agregan 90 ml de la misma a un

frasco de vidrio ( 10-1), 9 ml a un tubo de ensayo (10-2) y 9 ml a otro tubo
de ensayo (10-3).

 Se lleva la bolsa con la muestra del alimento (10 g o ml) y el diluyente (90
ml de agua peptonada al 0,1%) al stomacher o se realiza la
homogenización manualmente.
 Se Deja reposar 10, 15 o 30 minutos para permitir la liberación de los
microorganismos a la solución diluyente. (Dilución 1:10 (10 -1).
 De la dilución 1:10 (10-1) tomar con pipeta estéril 1 ml y depositarla en tubo
que contiene 9 ml de diluyente para obtener la dilución 1:100 (10-2).
 De la dilución 1:100 (10-2) tomar con pipeta estéril 1 ml y depositarla en
tubo que contiene 9 ml de diluyente para obtener la dilución 1:1000 (10 -3).
Siembra en profundidad
Se toma con una pipeta estéril alícuotas de 1 ml de cada una de las diluciones y
depositarlo en la base de una de las cajas de petri estéril previamente marcadas.
Inmediatamente verter en cada caja de 12 a 15 ml de agar fundido a 45ºC y
mezclar el inóculo con el agar imprimiendo movimientos de vaivén a la placa sobre
el mesón: 5 veces en sentido horizontal, 5 veces en sentido vertical, 5 veces en el
sentido de las manecillas del reloj, 5 veces en el sentido contrario a las manecillas
del reloj y 5 veces haciendo un ángulo recto.

Siembra en superficie
 Tomar con pipeta estéril alícuotas de 0.1 ml de cada una de las diluciones y
depositarlo en la superficie de una de las cajas de petri plaqueadas con el
medio de cultivo y previamente marcadas.
 Inmediatamente extender el inóculo con asa de Dryglaski sobre toda la
superficie.
 Incubar a la temperatura requerida.

Siembra por agotamiento

 Tomar un asa redonda previamente esterilizada.
 Tomar muestra de una dilución o de otra unidad formadora de colonias que
se encuentre en otra caja de Petri.
 Rayar el medio de cultivo sin romper la superficie, de forma horizontal.
 Incubar a la temperatura requerida.
RESULTADOS:

Agotamiento Profundidad

Superficie
TÉCNICA DE DIFERENCIAS OBSERVACIONES
SIEMBRA 10-1 10-2 10-3
No se logra Se No se logra Aunque se logró cuantificar las
ver con encuentran ver con colonias, el vaivén que se le
claridad, así 7.200 claridad, así realiza a la caja Petri, no es tan
que no se unidades que no se efectivo, dado a que las asas
Profundidad
cuantificó. formadoras cuantificó. separan las unidades
de Colonia formadoras de colonia, lo cual
es más sencillo a la hora de
contar.
No se logra No se logra
ver con ver con
Se
claridad, así claridad, así
que no se encuentran que no se
Superficie cuantificó. 6.300 cuantificó.
unidades
formadoras
de Colonia

No se logra No se logra Se Este método de siembra es

ver con ver con encuentran muy efectivo, dado a que por
claridad, así claridad, así 70.000 las diferentes formas que se
Agotamiento que no se que no se unidades realizan con el asa se logra
cuantificó. cuantificó. formadoras identificar con mayor claridad
de Colonia las colonias.
DISCUSION DE RESULTADOS:

A pesar de que se formaron colonias y se logró cuantificar, cabe resaltar que una
homogenización deficiente no permite la liberación de los microorganismos del
alimento o estos organismos no se alcanzan a mezclar uniformemente en la
suspensión final. La buena homogenización del alimento incidirá en la
confiabilidad de los resultados, de tal forma que si se trata de un alimento sólido o
semisólido difícil de homogenizar, se pueden ir tomando pequeñas porciones del
alimento a diferentes niveles para someterlos posteriormente a equipos eléctricos
de trituración y mezcla, provistos de cuchillas cortantes que giran a gran velocidad
(licuadoras) o paletas trituradoras (stomacher) que homogenizan a la vez el
alimento.

A partir de lo anterior se puede decir que no existió una homogenización total del
producto, ya que no se mezcló uniformente el producto a analizar, y en
consecuencia de esto los resultados no serán cien por ciento confiables.

CONCLUSIONES:

-Se logró obtener un cultivo bastante amplio en el método de siembra por

agotamiento con los resultados de las diluciones de 10^3 de nuestras muestras de
agar Nutritivo, se cuantifico 70.000 UFC.
-Las diluciones restantes obtuvieron menos UFC, por superficie fue 6.300 UFC y
en profundidad de 7.200 UFC.
-Se realizó correctamente la siembra de las diluciones por medio de asas
esterilizadas.
-Los objetivos fueron cumplidos correctamente.
BIBLIOGRAFIA:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasic-Diluciones_6526.pdf

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

Guía de aprendizaje laboratorio de diluciones y medios de cultivo

 INFORME DE LABORATORIO

DILUCIONES Y MEDIOS DE CULTIVO

PRESENTADO A:

DOC. SANDRA BETANCOURT

PRESENTADO POR:

KATHERYN VILLAFAÑE

JHONY FABRICIO CORTES ANGEL

ANDRES FELIPE ESPINOSA

MIGUEL ANGEL PULGARIN

ANDRES HUMBERTO QUIÑONEZ

MICROBIOLOGIA

SENA-CAB