SEPARACIÓN DE COLORANTES POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y

COLUMNA Y CUANTIFICACIÓN POR ELECTROFOTOMETRÍA.

Jessica Paola Zambrano Silva 1, Yeidy Viviana Basallo Quintero 2

RESUMEN : Los métodos cromatograficos son métodos de separación que involucran la

transferencia reversible de un compuesto que esta adsorbido en una fase estacionaria (adsorbente)
a una fase móvil (solvente) que fluye a través de la fase estacionaria y la espectrometría es la técnica
espectroscópica para trazar la concentración o la cantidad de especies determinadas. En estos
casos, el instrumento que realiza tales medidas es un espectrómetro

Objetivo : Separar adecuadamente los componentes de una mezcla de compuestos poco polares
por medio de cromatografía en capa fina en columna y en cuantificación por espectrofotometría

Materiales y métodos

Introducción

Los métodos cromatograficos son métodos de separación que involucran la transferencia

reversible de un compuesto que esta adsorbido en una fase estacionaria (adsorbente) a una fase
móvil disolvente que fluye atraves de la fase estacionaria. La separación surge de las interacciones
de los componentes de una muestra disolverte y adsorbente .El adsorbente está presente en un
gran exceso con una gran superficie y con sitios polares capaces de unir reversiblemente pequeñas
concentraciones de sustancias por un proceso esencialmente electroestático. Uno de los procesos
por los cuales se realizan este tipo de procesos es por la llamada capa fina la cual consiste en una
capa de vidrio de material delgado
Materiales y métodos

Se empleó una columna cromatografíca en donde se le adiciono una suspensión entre la fase
estacionaria (silicagel) y la fase móvil (acetato de etilo: etano7:3) sin dejar secar la columna, se dejó
hasta que la mezcla llego al borde de la fase estacionaria, siguiente a esto se le agrego 1mL de la
mezcla (n- nitroalinina, Rojo Congo) dejándola caer por las paredes, se mantuvo en hidratación
constantemente con la fase móvil buscando obtener una buena elución. La sustancia fue recogida
en un vaso de precipitado, se le midieron los componentes de pureza y absorbancia en el
espectrofotómetro.

Para la cuantificación del colorante se midió el patrón de m- nitroalinina de 200 ppm , con esta
medida se realizaron diluciones seriadas agregando 5 mL de 200ppm con una pipeta aforada
vertiéndolas en en un tubo de ensayo ,siguiente a eso se le agrego 5 mL del solvente (acetato de
etilo 7:3 )obteniendo diluciones de concentraciones a 100ppm, 50ppmy 25 ppm .Se midió la
absorbancia de la fracción obtenida en la columna cromatografía

Resultados .

I) Separacion por CC
Volumen fracción obtenida _______
Color de la fracciónamarilla

Concentración

Absorbancia

II)

Concentracion Absorbancia
0.00mg/L
(ppm)
25 mg /L
(ppm)
50 mg/L
(ppm)
100 mg/L (ppm)
200 mg / L
(ppm)
Fracción

Volumen de la Fraccion
Concentración de la fracción :_______

Concentración de la muestra en 1 mL _________

Conclusión

 En la cromatografía en columna se pudo evidenciar que este se basa en la diferencia de

velocidades con que se desplazan los componentes de las mezclas de compuestos

Concentracion Absorbancia
25 0.163
50 0.291
100 0.492
200 0.926