NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 4772

2008-04-30

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIÓN Y RECUENTO DE Escherichia coli y
DE BACTERIAS COLIFORMES. PARTE 1: MÉTODO
DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA

E: WATER QUALITY. DETECTION AND ENUMERATION OF

Escherichia coli and COLIFORM BACTERIA. PART 1:
METHOD BY MEMBRANE FILTRATION.

CORRESPONDENCIA: esta norma adopción modificada

(MOD), respecto al documento de
referencia, la norma ISO 9308-1:2001

DESCRIPTORES: agua; método horizontal; método de

análisis; microbiología; análisis
microbiológico; recuento; recuento en
placa; E coli.

I.C.S.: 07.100.20; 07.100

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción Primera actualización

Editada 2008-05-13
 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 4772 (Primera actualización) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2008-04-30.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.

ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A. LABFARVE LABORATORIO DE

ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. FARMACOLOGÍA VEGETAL
ANNAR DIAGNÓSTICA IMPORT LTDA. LABORATORIO EMICAL LTDA.
ARCHIVO DE BOGOTÁ LABORATORIOS GRAM LTDA.
ASBIOQUIM LTDA. LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
ASEBIOL LABORATORIO LTDA. LABORATORIO SFC LTDA.
ASINAL LTDA. LESNIAK E.U.
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE CIENCIA MERCADEO DE ALIMENTOS DE
Y TECNOLOGÍA COSMÉTICA –ACCYTEC- COLOMBIA S.A.
AVESCO KOKORICO S.A. MERCK S.A.
BIANÁLISIS MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS LTDA.
BIOCONTROL LTDA. NULAB LTDA.
BIOQUILAB LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA. LTDA.
CARULLA VIVERO S.A. QUIK LTDA.
CONGELAGRO S.A. QUALA S.A.
DUPONT QUALICON DE COLOMBIA SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE
ENZIPÁN DE COLOMBIA LTDA. BOGOTÁ
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENÚ S.A. SERVICIOS DE LABORATORIO CLÍNICO
INSTITUTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD LTDA.
NACIONAL DE COLOMBIA SUIZO S.A.
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN
KOYOMAD S.A. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
LABCONTROL E.U. VILASECA LTDA.
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las
siguientes empresas:

3M COLOMBIA S.A. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. INVIMA - INSTITUTO NACIONAL DE
ALGARRA S.A. VIGILANCIA MÉDICA
AQUALAB LA CONSTANCIA COLOMBIA
BAVARIA S.A. LABORATORIO DE GENÉTICA Y
BIOMERIEUX COLOMBIA BIOLOGÍA MOLECULAR
BLANCA USECHE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS
CASA LUKER S.A. LABORATOTORIO MICROBIOLÓGICO DE
CENICAÑA BARRANQUILLA
CENTROAGUAS S.A. E.S.P. LARKIN
CERCAL LTDA. LEVAPÁN S.A.
CERVECERÍA LEONA LLOREDA GRASAS S.A.
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES MEDIIMPLANTES LTDA.
S.A. MICROLABY LTDA.
COOPERATIVA DE GANADEROS DE MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL.
CARTAGENA LTDA. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.
CREPES Y WAFLES S.A. PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ JUGOS DE FRUTA
FABRICA DE ESPECIAS Y QUIOS LTDA.
CONDIMENTOS EL REY S.A. REPRESENTACIONES
FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. BIOTECNOLÓGICAS LTDA.
FRIGORÍFICO SUIZO S.A. RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE
FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. ALIMENTOS S.A.
FRUGAL S.A. SCHERING COLOMBIANA S.A.
HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE TECNIMICRO LABORATORIO DE
VILLAVICENCIO ANÁLISIS
INGENIO PICHICHI S.A. UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL
INGENIO RIOPAILA UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
INSTITUTO COLOMBIANO VIKINGOS
AGROPECUARIO -ICA- VILASECA LTDA.

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

CONTENIDO

Página

0. INTRODUCCIÓN ..........................................................................................................1

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ........................................................................1

2. REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................2

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4. FUNDAMENTO ............................................................................................................3

4.1 DESCRIPCIÓN GENERAL DEL MÉTODO .................................................................3

4.2 FILTRACIÓN E INCUBACIÓN .....................................................................................3

4.3 EVALUACIÓN Y CONFIRMACIÓN, ENSAYO ESTÁNDAR .......................................3

4.4 EVALUACIÓN Y CONFIRMACIÓN, ENSAYO RÁPIDO .............................................3

5. EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO ...........................................................................3

6. MEDIO DE CULTIVO Y DILUYENTE ...........................................................................4

7. MUESTREO..................................................................................................................5

8. PROCEDIMIENTO........................................................................................................5

8.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA .............................................................................5

8.2 FILTRACIÓN ................................................................................................................5

8.3 INCUBACIÓN Y DIFERENCIACIÓN, ENSAYO ESTÁNDAR .....................................5

8.4 INCUBACIÓN Y DIFERENCIACIÓN, ENSAYO RÁPIDO ...........................................6

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

Página

9. EXPRESIÓN DE RESULTADOS .................................................................................6

10. INFORME DE ENSAYO ...............................................................................................7

11. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD .........................................................................7

DOCUMENTO DE REFERENCIA ..........................................................................................20

ANEXOS

ANEXO A (Informativo)
INFORMACIÓN MICROBIOLÓGICA COMPLEMENTARIA SOBRE LAS
BACTERIAS COLIFORMES ....................................................................................................8

ANEXO B (Normativo)
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS ...................................................................................9

ANEXO C (Informativo)
VOLÚMENES DE MUESTRAS ORIENTATIVOS ......................................................................13

ANEXO D (Informativo)
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO ALTERNATIVAS SEGÚN EL STANDARD
METHOD 9222 PARA EL RECUENTO TOTAL DE COLIFORMES POR EL
MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA ........................................................................14

BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................................20
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIÓN Y RECUENTO DE Escherichia coli y DE BACTERIAS
COLIFORMES. PARTE 1: MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA

0. INTRODUCCIÓN

La presencia y el nivel de contaminación fecal constituye un factor importante en la evaluación

de la calidad de una masa de agua y del riesgo de infección que representa para la salud
humana. El análisis de muestras de agua para detectar la presencia de Escherichia coli, que
normalmente habita en el tracto intestinal de hombres y otros animales de sangre caliente,
proporciona una indicación de este tipo de contaminación. Los resultados del análisis de
bacterias coliformes pueden resultar más difíciles de interpretar dado que algunas bacterias
coliformes viven en el suelo y en las aguas dulces superficiales y, por tanto, no tienen siempre
un origen intestinal. La presencia de bacterias coliformes, aunque no pruebe de forma
concluyente una contaminación de origen fecal, si puede indicar fallos en el tratamiento o en la
distribución del agua. La identificación de las cepas aisladas puede permitir en ocasiones
obtener información acerca de su origen.

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

La presente norma especifica un método de referencia (ensayo estándar) para la detección y

recuento de Escherichia coli y bacterias coliformes en agua destinada al consumo humano. El
método estándar se basa en la filtración por membrana, el posterior cultivo en un medio de
agar de diferenciación y el cálculo del número de los organismos objeto de ensayo en la
muestra.

El método estándar es poco selectivo y permite la detección de bacterias dañadas. Debido a

esta baja selectividad, el crecimiento de la flora bacteriana general puede afectar a la fiabilidad
del recuento de E. coli y bacterias coliformes, por ejemplo, en algunas aguas potables, tales
como las aguas de pozos poco profundos, que no han sido desinfectadas y que dan lugar a
importantes crecimientos de flora interferente. Esta norma es, por tanto, especialmente
adecuada para agua desinfectada y otras aguas potables con bajas densidades bacterianas.

La presente norma incluye un método rápido (ensayo rápido) para la detección, en menos de
24 h, de E. coli en aguas destinadas al consumo humano, y que puede resultar muy útil en
aquellos casos en los que se requiere una rápida información. El ensayo rápido se basa en la
filtración por membrana, el posterior cultivo, en condiciones selectivas, y el cálculo del número
de E. coli en la muestra.

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

Los ensayos estándar y rápidos descritos en la presente norma, son aplicables a otros tipos de
aguas, siempre que la materia en suspensión o la flora de fondo no interfieran en la filtración, el
cultivo y el recuento.

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo
referenciado. (incluida cualquier corrección).

NTC 4491-1, Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal. Preparación de
las muestras de ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para examen microbiológico.
Parte 1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y las diluciones
decimales. (ISO 6887-1).

NTC 5395, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de análisis.

NTC-ISO 5667-1, Calidad del agua. Muestreo. Parte 1: Directrices para el diseño de programas
de muestreo.

NTC-ISO 5667-2, Calidad del agua. Muestreo. Parte 2:Técnicas generales de muestreo.

NTC-ISO 5667-3, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Directrices para la preservación y
manejo de las muestras.

ISO 3696, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de ensayo.

ISO 7704, Water quality. Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses.

ISO 8199, Water quality. General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture.

ISO 19458, Water quality. Sampling for microbiological analysis.

ISO/IEC Guía 2. Normalización y actividades relacionadas. Vocabulario general.

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propósitos de esta norma se aplican los siguientes términos y definiciones dados en la
Guía ISO/IEC 2 así como las siguientes:

3.1 Bacterias lactosa-positivas. (Ensayo estándar) bacterias capaces de formar colonias en

condiciones aerobias a (36 ± 3) °C en un medio de cultivo de lactosa selectivo y diferencial, con
producción de ácido en (21± 3) h.

3.2 Bacterias coliformes. (Ensayo estándar) bacterias lactosa-positivas según la definición

indicada en el numeral 3.1 y que son oxidas a-negativas.

3.3 Escherichia coli. (Ensayo estándar) bacterias coliformes según la definición indicada en el
numeral 3.2 y que, además, producen indol a partir de triptófano en (21 ± 3) h a (44,0 ± 0,5) °C.

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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

3.4 Escherichia coli. (Ensayo rápido) bacterias resistentes a la bilis y que, además, producen
indol a partir de triptófano en (21 ± 3) h a (44,0 ± 0,5) °C.

3
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

BIBLIOGRAFÍA

[1] BARRELL, R.A.E. (1992). A Comparison Between Tryptone Bile Agar and Membrane
Lauryl Sulphate Broth for the Enumeration of Presumptive Escherichia coli in Water.
Water Res. 26:677-681.

[2] HA VELAAR, A.H. y DURlNG, M. (1988). Evaluation of the Anderson Baird-Parker Direct
Plating Method for Enumerating Escherichia coli in Water. J Appl. Bacterial. 64: 89-98.

[3] SCHETS, F.M. y HAVELAAR, A.H. (1991). Comparison of lndole Production and β-
Glucuronidase Activity for the Detection of Escherichia coli in a Membrane Filtration
Method. Lett.Appl.Micrabiol. 13: 272-274.

[4] SCHETS, F.M., MEDEMA, G.J. y HAVELAAR, A.H. (1993). Comparison of Colilert with
Dutch Standard Enumeration for Escherichia coli and Total Coliforms in Water. Lett.
Appl. .Microbiol. 17:17-19.

[5] Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, 18 th ed, APHA,
AWWA, WPCF, 2005.

4
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4772 (Primera actualización) RESUMEN

IMPORTANTE

Este resumen no contiene toda la información necesaria para la aplicación del documento normativo original al que se
refiere la portada. ICONTEC lo creo para orientar a su cliente sobre el alcance de cada uno de sus documentos y facilitar
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DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Water Quality. Detection and Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Part 1:
Method by Membrane Filtration. Geneve, 2001 (ISO 9308-1:2001).