UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
HISTOPATOLÓGICO

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO ABRIL 2019 – AGOSTO 2019
ASIGNATURA SEROLOGÍA SEMESTRE: SEXTO PARALELO: A
NOMBRE DEL DOCENTE PAOLA MONAR BASANTES
FECHA 8 DE ABRIL DEL 2019
NÚMERO DE PRÁCTICA 1 HORA:19:00 -21:00 DURACIÓN: 2 HORA
GRUPO 1 GRUPO 2
1. AGUILAR LUNA JANINA 1. LOMBEIDA NOGALES XAVIER
TAHIRY ERNESTO
2. AVILES HUATATOCA RUTH 2. LUPERA VIZUETE JEAN PIERRE
BLANCA
3. BARAHONA CUMBA JOSE 3. NUGUILLAN CAJAMARCA MERCY
FERNANDO FERNANDA
4. BOLAÑOS VILLA TANIA 4. PACHECO HERRERA BYRON
DAYANARA SEBASTIAN
5. CANDO MANZANO GABRIELA 5. PADILLA LOPEZ JAZMIN FERNANDA
ALEJANDRA
6. CHAMORRO AVALOS 6. PAREDES BERMEO FERNANDA LILIAN
GABRIELA ELIZABETH
NOMBRE DE LOS 7. CHIMBOLEMA MOROCHO 7. PEÑA SANCHEZ LISLEY JAZMINA
ERIKA XIMENA
ESTUDIANTES. 8. CURILLO LLANGANATE 8. PULLOTASI PILAPANTA DIANA
NANCY BEATRIZ CAROLINA
9. FARINANGO ROMERO 9. QUINCHUELA VANEGAS ERIKA
KATHERIN LIZETH JANINE
10. FLORES CLAUDIO HERNAN 10. RAMIREZ PAGUAY FERNANDO
SEBASTIAN CARLOS
11. GILER TAPIA CARLOS 11. ROJAS GUEVARA NICOLE VALERIA
ANDRES
12. GUASHPA MORETA DENIS 12. RUMANCELA GUAMAN LISSETH
OMAR MARIBEL
13. LLERENA MOYON PAMELA 13. SAQUINGA JAME ERIKA FABIOLA
YULEIDY
14. LOMBEIDA TORRES 14. TZEREMBO PULLOPAXI PAOLA
KATHERINE ZORAIDA SOLANGE
LUGAR DE LA PRÁCTICA LABORATORIO E-201
TÍTULO DE LA UNIDAD SEROLOGÍA Y REACCIONES SEROLÓGICAS
TEMA DE LA PRÁCTICA REACCIONES SEROLÓGICAS INMUNOCROMATOGRAFIA
RESULTADO DE APRENDIZAJE.
- Aplica diferentes métodos de extracción sanguínea y separación de sueros Y manejo de materiales, equipos y reactivos de
laboratorio serológico
Determinar las reacciones serológicas por medio de pruebas inmunocromatográficas.
OBJETIVO GENERAL
Objetivos específicos
 Conocer que es reacción antígeno anticuerpo por medio de las diferentes pruebas inmunocromatográficas.
 Aprender el fundamento teórico de la inmunocromatografía
FUNDAMENTO TEÓRICO:
REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO.
Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el reconocimiento de determinadas estructuras químicas en la superficie de
macromoléculas extrañas, los antígenos. Estas estructuras químicas del antígeno se denominan determinantes antigénicos y la
especificidad de la respuesta inmunitaria va dirigida especialmente a ellos.
Cuando se ponen en contacto un antígeno con el anticuerpo específico, reaccionan uniéndose mediante un enlace no covalente
entre la zona específica de la inmunoglobulina y los determinantes antigénicos de la molécula de antígeno. La combinación del
anticuerpo con el antígeno desencadena una serie de procesos capaces de neutralizar y eliminar a una sustancia extraña.
Características:
- La reacción es reversible .
- La permanencia de unión depende de:
a)- Grado de adaptación de cada molécula
b)- Fuerzas y estabilidad de los enlaces que las unen.
c)- Afinidad del anticuerpo.
d)- Avidez del anticuerpo.
e)- Especificidad del anticuerpo.

PRUEBAS SEROLÓGICAS. CONCEPTO Y UTILIDAD

Las Pruebas serológicas son Técnicas de diagnóstico de laboratorio con fundamento inmunológico basadas en la detección de
una reacción Antígeno-Anticuerpo. Son muy útiles porque nos permiten identificar Antígenos (Ag) en una muestra disponiendo
de Anticuerpos (Ac) conocidos y viceversa. En Microbiología ó Serología de Enfermedades Infecciosas las Pruebas de
determinación de Anticuerpos permiten el diagnóstico microbiológico indirecto, que se refiere a que el diagnóstico no se hace
por aislamiento e identificación del microorganismo causante de la infección, sino a través de la respuesta inmune del huésped,
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es decir, de forma indirecta. Las pruebas serológicas también permiten diagnóstico directo si lo que se determina es Antígeno
del microorganismo ej. El Ag p24 de VIH ó el HBs Ag que es el Ag de superficie del VHB (Virus de Hepatitis B) Se utilizan
con fines:
Cualitativos: demostrar si el paciente tiene o no antígenos ó anticuerpos frente a un/unos patógenos determinados.
Cuantitativos: qué concentración o tasa de ellos tiene. En la determinación de Ac esto es útil ya que para muchas infecciones
es posible correlacionar la concentración de Ac con la situación clínica, ya que una determinada tasa de Ac se asocia con el
estado de enfermedad ó permite decidir si aquella ha sido una respuesta eficiente como resultado de una vacunación ó por el
contrario es una concentración ó tasa baja y dicha vacunación no ha aportado protección. Permiten determinar Patrones de
infección como el Patrón de infección aguda ya que como norma general se considera que hay infección aguda: con la
demostración de Ac de clase IgM específica para el microorganismo. con la observación de un incremento en la concentración
de IgG específica en dos muestras separadas en el tiempo, habitualmente dos semanas, que nos indica la presencia de un estímulo
antigénico en ese momento, o lo que es lo mismo, la existencia de una infección aguda. (Se suele considerar significativa la
obtención de un aumento entre las dos muestras de al menos cuatro veces el Título de anticuerpos, cuádruple del Título inicial)
Esta interpretación se basa en la Evolución la Respuesta inmune (RI):

Cuando un individuo se pone en contacto con un antígeno por primera vez ó RESPUESTA INMUNE PRIMARIA (RI 1ª)
ocurren los siguientes fenómenos que se relacionan con el diagnóstico serológico:
1. La Respuesta se produce tras un periodo de latencia. Hay una Aparición precoz de anticuerpo específico de clase IgM que es
por tanto el 1º en aparecer (M, “al Momento”) La concentración de este anticuerpo no es muy alta y su persistencia es
generalmente corta. Por eso la detección de IgM específica a unas concentraciones determinadas y dada la brevedad de su
duración nos faculta para realizar un probable diagnóstico de la infección aguda.
2. Aparición algo más tardía de anticuerpo específico de clase IgG. La concentración de este anticuerpo va creciendo hasta
alcanzar, en 3-6 semanas, una meseta que muy lentamente desciende. Su persistencia suele ser muy prolongada, mucho mas allá
de la curación del enfermo y en ocasiones es detectable durante toda la vida.
Una nueva exposición al Ag ó RESPUESTA INMUNE SECUNDARIA 2ª induce una respuesta de Ac reforzada. La activación
de linfocitos memoria preformados da lugar a una producción de Ac mucho más rápida sin periodo de latencia, más intensa
alcanzando un título más alto, más duradera y con mayor predominio de IgG y de Ac de mayor afinidad.

La IgG se relaciona con Infecciones crónicas ó Infecciones pasadas.

PROPIEDADES DE LA PRUEBA SEROLÓGICA

Especificidad: Capacidad que presenta un antisuero para reaccionar con un antígeno específico que es el que se quiere
determinar, discriminando entre antígenos (ó haptenos) de estructura similar (ó viceversa) Los errores: Falsos + (FP) por detectar
antígenos/ac que no son los específicos que se quieren determinar Se puede definir como el porcentaje de verdaderos negativos
que serán detectados en pacientes sanos con esa prueba. Las pruebas apropiadas producen, en este colectivo, gran cantidad de
resultados negativos y muy escasos falsos positivos (FP). Existen muchas pruebas serológicas con especificidades casi del 100%.
Sensibilidad: Cantidad mínima de anticuerpo o antígeno que es capaz de detectar. Cuanto menor cantidad de Ag/Ac detecte,
mayor es la sensibilidad. Los errores: Falsos – (FN) por no detectar Ag ó Ac presentes en el ensayo. La medida de sensibilidad
se realiza probando la prueba en pacientes que sabemos que están en la situación que queremos diagnosticar. Cuantos más
resultados positivos produzca en este grupo de enfermos mas sensibilidad tendrá la prueba y menos resultados falsos negativos
(FN) obtendremos; se puede definir pues la sensibilidad como el porcentaje de verdaderos positivos (VP) que son detectados en
individuos con esa enfermedad y esa técnica. En serología es difícil tener pruebas con el 100% de sensibilidad.

INMUNOCROMATOGRAFÍA O PRUEBA RÁPIDA

La inmunocromatografía se basa en la migración de una muestra a través de una membrana de nitrocelulosa. La muestra es
añadida en la zona del conjugado, el cual está formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopos del antígeno a
detectar y un reactivo de detección. Si la muestra contiene el antígeno a problema, éste se unirá al conjugado formando un
complejo inmune y migrará a través de la membrana de nitrocelulosa. Si no, migrarán el conjugado y la muestra sin unirse.
La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico contra otro epítopo del antígeno. Al llegar la muestra a
esta zona, los complejos formados por la unión del antígeno y conjugado quedarán retenidos y la línea se coloreará (muestras
positivas). En el caso contrario las muestras son negativas
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La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de detección. Cuando el resto de muestra alcanza
esta zona, el anticuerpo se unirá al conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta línea es un control de
que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y negativas.

MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos Materiales Reactivos
Centrífuga Kit toma de venopunción Prueba
Pipeta de ul Inmunocromatográfica en
Puntas amarillas suero o plasma HCG.
Gradilla
Reloj de cuatro tiempos
PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:
PROCEDIMIENTO:
1.- Toma de muestra Sangre Total.
2.- Centrifugar.
3.- Obtener el Suero del paciente.
4.- Abrir la prueba q se va a realizar, y leer el inserto.
5.- Codificar la prueba
6.- Realizar el procedimiento del inserto.

Procedimiento de ensayo
El ensayo se desarrolla al adicionar 50 µl de suero sobre la almohadilla de la muestra.
La interpretación de los resultados se realiza por inspección visual entre 10-30 minutos después de aplicadas las
muestras. La prueba se considera negativa si solo aparecía la línea de control y positiva cuando aparecían las dos
líneas. En todos los casos el ensayo se considera válido si aparece la línea control.
En el caso de las muestras positivas, la línea de prueba puede observarse con diferentes intensidades, en dependencia
del título de anticuerpos específicos presentes en la muestra.
RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)
Adjuntar los resultados obtenidos en las diferentes pruebas.
OBSERVACIONES
Cada estudiante debe presentar un informe de la actividad realizada para la siguiente práctica.
CONCLUSIONES
En la actualidad, la mayoría de los sistemas inmunocromatográficas de flujo lateral que se utilizan para el
diagnóstico emplean como conjugados, anticuerpos especie-específicos unidos a oro coloidal, por lo que se necesita
un ensayo para cada especie a estudiar. Sin embargo, el sistema diseñado permitió la detección de anticuerpos, lo
que demuestra la versatilidad del mismo.
RECOMENDACIONES
Para realizar las diferentes pruebas serológicas debemos tener en cuenta las indicaciones del proveedor, como de la
técnica y ver cuál es la mejor para ayuda diagnóstica del paciente y si cumple o no con los requisitos para la
realización de los mismos.
BIBLIOGRAFÍA
- ARROSPIDE V, Nancy et al . Uso de pruebas rápidas inmunocromatográficas en Perú. Rev. perú. med.
exp. salud publica, Lima , v. 21, n. 2, p. 76-81, abr. 2004 .
- Ortiz E, Silva E, Izquierdo M. Normalización y evaluación del inmunoensayo ABICAP-BRU para el
diagnóstico serológico. REDVET. 2007;VIII(4).

Msc. Ximena Robalino Msc. Paola Monar Basantes Lic. Franklin Ramos.
DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO