Efecto de los metabolitos

Rev Iberoam Micol 1997; 14: 131-134 131

volátiles deTrichoderma hamatumsobre el
creci-miento de hongos fitopatógenos pro-
cedentes del sueloGustavo Mariano Dal Bello , Cecilia Inés 1

Mónaco1y Alicia Raquel Cháves21Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales.

Universidad Nacional de la Plata yComisión de Investigaciones Científicas de la Provincia
de Buenos Aires y 2Centro deInvestigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos y
Consejo Nacional deInvestigaciones Científicas y Técnicas, La Plata, Buenos Aires,
Argentina.Se estudió in vitroel efecto inhibidor del desarrollo de Alternaria citri,
Bipolariscynodontis, Bipolaris sorokiniana, Curvularia brachyspora, Curvularia
lunata,Curvularia oryzae-sativae, Drechslera tritici-repentis, Rhizoctonia
solani,Sclerotinia minor y Sclerotium rolfsii, causado por los componentes volátiles
queproduceTrichoderma hamatum. Los organismos se cultivaron en un aparato
for-mado por dos matraces conectados por sus bocas. En la atmósfera interior
delsistema se determinó por cromatografía gaseosa la variación de dióxido de car-
bono, oxígeno y etileno, no encontrándose rastros de acetaldehído ni
etanol.Debido a la actividad respiratoria de T. hamatumlos niveles de dióxido de
car-bono aumentaron progresivamente, mientras disminuía el volumen de
oxígeno.La producción de etileno fue baja y después del tercer día permaneció
constan-te. Con excepción de C. oryzae-sativae y B. cynodontis, las demás
especiesfúngicas presentaron alteraciones en su crecimiento y desarrollo. Se
sugiere lautilización de T. hamatumcomo potencial agente de control
biológico.Trichoderma hamatum, Metabolitos volátiles, Control biológico.Study
of the effect of volatile metabolites ofTrichoderma
hamatumon the growth of phytopatho-genic soilborne
fungiVolatile compounds produced by Trichoderma hamatumwere tested for
theircapacity to suppress in vitrothe growth of Alternaria citri, Bipolaris
cynodontis,Bipolaris sorokiniana, Curvularia brachyspora, Curvularia lunata,
Curvularia ory-zae-sativae, Drechslera tritici-repentis, Rhizoctonia solani,
Sclerotinia minorandSclerotium rolfsii. The organisms were cultured in an
apparatus made withtwo Erlenmeyer flasks assembled by their top parts. With the
aid of the gas chro-matographic technique the variation of carbon dioxide, oxygen
and ethylene inthe internal system was determined. Acetaldehyde and ethanol
were not found.Due to the respiratory metabolism of T. hamatumthe carbon dioxide
level pro-gressively increased while the oxygen content decreased. Ethylene
productionwas low and after three days remained constant. Excepting C. oryzae-
sativaeand B. cynodontisthe other species showed changes in the growth and
develop-ment. These results suggest the inhibitory volatiles of T. hamatumas one
possi-ble mechanism of biological control.Trichoderma hamatum, Volatile
metabolites, Biological control.Dirección para correspondencia:Dr. Gustavo Mariano Dal
BelloLaboratorio de Fitopatología, Facultad de CienciasAgrarias y Forestales, Universidad Nacional de laPlata,
Calles 60 y 118, CC31, 1900 La Plata, BuenosAires, Argentina.Fax: (+54 21) 252346E-mail:
healippi@isis.unlp.edu.ar Aceptado para publicación el 4 de marzo de 1996ResumenPalabras
claveSummaryKey wordsEl crecimiento de las especies fúngicas que habi-tan en el
suelo, sólo se produce junto a los restos orgáni-cos o en la rizosfera de plantas vivas,
donde losorganismos encuentran los estímulos necesarios para inte-rrumpir su
estado de latencia [1]. Fuera de esas zonas yaun en condiciones ambientales
apropiadas, existen meca-nismos fungistáticos que impiden el desarrollo de los hon-
gos. Varios estudios indican el origen principalmentebiótico de la fungistasis [2-5],
así como la capacidad demuchos hongos para sintetizar sustancias volátiles involu-
cradas en el complejo responsable de ese fenómeno [1,6-9]. Otras veces el efecto de
dichos metabolitos esestimulante de la germinación y el crecimiento
fúngicos[6,10,11], habiéndose mencionado además como causan-tes de diversas
enfermedades en los vegetales [8,12,13].Distintos autores identificaron entre esos
compo-nentes gaseosos al dióxido de carbono, etanol, acetaldehí-do, acetona,
propanol, isobutanol e isopentanol[10,14-20], los cuales en diferentes
concentraciones inter-vienen en la regulación del mecanismo fungistático.
LasOriginal
especies de Trichoderma, ampliamente difundidas en lacomunidad microbiana de
los suelos y con marcadas pro-piedades antagonistas [6,18,21], poseen
representantescaracterizados por su alta producción de sustancias gaseo-sas. Según
Dennis y Webster [7] lo que permite diferen-ciar a estas últimas, es un pronunciado
aroma a coco quese desprende del cultivo. Dentro del grupo anterior seencuentra
Trichoderma hamatum(Bon.) Bain. aggr.[22,23], cuyos metabolitos volátiles y su
acción sobre elcomportamiento cultural de diez especies de hongos fito-patógenos,
habitantes permanentes o temporarios delsuelo, fueron estudiados en este
trabajo.MATERIALES Y MÉTODOSCepas fúngicasEntre los hongos fitopatógenos
utilizados en elensayo, se incluyeron siete especies de la familiaDematiaceae y tres
especies que forman esclerocios, paradeterminar cualquier influencia de los
metabolitos voláti-les de T. hamatumsobre la biosíntesis de melaninas. Lasespecies
fúngicas seleccionadas fueron: Alternaria citriEll.& Pierce, Bipolaris
cynodontis(Marig.) Shoem.,Bipolaris sorokiniana(Sacc. ex Sorok.)
Shoem,Curvularia BrachysporaBoed., Curvularia lunata(Wakk.) Boed., Curvularia
oryzae-sativaeSivan,Drechslera tritici-repentis (Died.) Shoem.,
RhizoctoniasolaniKühn, Sclerotinia minorJagger y Sclerotium rolfsiiSacc. La
primera fue aislada de manchas necróticas foliá-ceas de Citrus limon y los tres
últimos del suelo junto conT. hamatum; los restantes se obtuvieron de semillas
deTriticumspp, siguiendo las técnicas fitopatológicas derutina.Potencial fungistático
de los metabolitos voláti-les de T. hamatumTodos los microorganismos se
cultivaron en cajasde Petri con 10 ml de agar de papa glucosado (PDA) al2% por
caja, permaneciendo en estufa a 25°C hasta quelas colonias cubrieron el 50% del
medio. Para medir elefecto biológico de las sustancias volátiles de T. hamatumsobre
la evolución normal de los demás hongos, seempleó un aparato diseñado con ese
propósito [24]. ElRev Iberoam Micol 1997; 14: 131-134132mismo constaba de dos matraces
Erlenmeyer de 250 ml,dos tapones horadados capaces de encajar en las bocas
deambos recipientes y un tubo de vidrio de 10-15 cm de lon-gitud e igual diámetro
que el de los orificios hechos en lostapones (figura 1). Los matraces se esterilizaron
por sepa-rado con 20 ml de PDA en cada uno de ellos, implantán-doles en el centro
del medio solidificado un disco de 5mm de diámetro de T. hamatum o alguno de los
patóge-nos, extraído con el sacabocados del cultivo correspon-diente. El implante de
T. hamatum se realizó 48 h antesque el de las otras especies, con el fin de asegurar
que unaadecuada concentración de metabolitos volátiles produci-dos en ese lapso,
incidieran sobre el micelio superior.Seguidamente los frascos fueron conectados
entre sísellándose la zona de unión con Parafilm (American CanCompany, USA)
para impedir la fuga de los gases. Loscontroles se prepararon siguiendo la misma
técnica, perosin colocar a T. hamatum en el Erlenmeyer inferior. Cadauno de los
tratamientos incluyó tres repeticiones, incubán-dose los cultivos en estufa a 25°C
durante 10 días desde elarmado del aparato. A los 3, 5 y 7 días se midieron
losdiámetros de las colonias de los fitopatógenos, expresán-dose los resultados en
porcentajes de inhibición o estimu-lación. Asimismo se registró toda variación
micelial en elcolor, aspecto y/o formación de estructuras reproductivas.Análisis de
los metabolitos volátilesEn forma complementaria y en los mismos perio-dos de
tiempo, se determinaron algunos de los componen-tes de la atmósfera interna del
matraz superior donde teníalugar la acción antagonista. Para ello se recurrió a
unequipo idéntico al descrito conteniendo sólo el cultivo deT. hamatum y provisto
de muestreadores para gases. Elanálisis de los contenidos de dióxido de carbono,
oxígeno,etileno, acetaldehído y etanol se realizó por cromatografíagaseosa
empleando un cromatógrafo Shimaczu 6A(Japón). Para los dos primeros gases
fueron utilizadascolumnas de silica gel a 115°C y de tamiz molecular 5A a0°C,
conectadas en serie, hidrógeno como gas portador yun detector de conductividad
térmica. El etileno, acetalde-hído y etanol se detectaron con el mismo cromatógrafo
yuna columna de Poropack Q a 115°C. Se empleó nitróge-no como gas portador y
un detector de ionización dellama. La longitud de las columnas fue de 150 cm con
undiámetro externo de 3 mm y la temperatura del inyectoralcanzó los
135°C.RESULTADOSLos porcentajes de inhibición o estimulación delcrecimiento
fúngico debidos a la actividad biológica deT. hamatum, se representan en la figura 2.
Pudo observarse que hubo cuatro patrones de com-portamiento diferentes con
respecto a la reacción de lasespecies fitopatógenas en contacto con los
compuestosvolátiles. B. sorokiniana, B. cynodontis, C. oryzae-sati-vae, C. lunata y
C. brachyspora mostraron un incrementovariable del porcentaje de inhibición en
función del tiem-po de exposición al antagonista. B. sorokiniana y C. ory-zae-
sativaefueron los mas afectados. D. tritici-repentis yS. rolfsii no obstante haber sido
también inhibidos en sucrecimiento presentaron un nivel cada vez menor de inhi-
bición en el transcurso del ensayo. R. solani y S. minor nofueron afectados, mientras
que A. citrifue la única espe-cie cuyo desarrollo fue estimulado, especialmente
despuésde tres días de iniciado el estudio. En la tabla 1 han sidodescritos los niveles
de dióxido de carbono y oxígenohallados en la atmósfera interna del Erlenmeyer
superior.Después de tres días de incubación a 20°C, el contenidoFigura 1. Aparato
empleado para medir el efec-to de las sustancias volátiles. 1: Producción demetabolitos volátiles; 2: Salida de
gases.21
133inicial de 0,03% de dióxido de carbono aumentó a 10,3%como resultado de la
actividad respiratoria deT. hamatum. El contenido de dióxido de carbono
continuóaumentando durante el resto de la experiencia, aunquemas lentamente.Los
niveles de oxígeno disminuyeron en formaconcordante. Otro gas cuya presencia se
detectó fue el eti-leno. Los resultados obtenidos (tabla 1) indicaron que alcabo de
tres días de incubación la producción de etilenopasó por su volumen máximo para
después permanecerconstante. Cabe aclarar que no hubo rastros detectables
deacetaldehído y etanol.En relación a las características del micelio de
loscomponentes volátiles de T. hamatum, se observaron dis-tintos comportamientos
culturales con respecto a los testi-gos. Mientras que las colonias de C. oryzae-sativae
y B.cynodontisno presentaron variaciones en su aspecto ycolor, otras como C.
brachysporamostraron sólo unadecoloración del micelio expuesto a los metabolitos
obien en el caso de A. citri y R. solanimantuvieron sucolor pero con un menor
crecimiento micelial. Lo mismoocurrió conS. minor y S. rolfsii, donde además no se
for-maron esclerocios ni aun a los veinte días.En las restantes especies fúngicas
inhibidas por losgases, se observaron desde colonias levemente decolora-das (C.
lunata) a blancas (B. sorokiniana y D. tritici-repentis) con un crecimiento micelial
menos denso yvoluminoso.DISCUSIÓNLa mayoría de los trabajos relacionados con
el bio-control de enfermedades de las plantas con T. hamatuminvolucran a hongos
habitantes del suelo [25]. Entre ellosse encuentranB. sorokiniana, B. cynodontis, D.
tritici-repentis, C. oryzae-sativae, C. lunata, C. brachyspora yS. rolfsii, cuyo
desarrollo micelial fue inhibido in vitropor los metabolitos volátiles que produjo el
antagonista.Al analizar las atmósferas internas del dispositivo emplea-do en este
ensayo, se determinó una alta concentración dedióxido de carbono y muy bajas de
oxígeno y etileno.Estudios sobre la influencia del dióxido de carbono en
elcrecimiento y esporulación de distintas especies, demos-traron que existe un efecto
inhibitorio a concentracionesdel gas superiores al 10% [8], nivel que fue superado
porel metabolismo deT. hamatum. Ello explicaría las altera-ciones del crecimiento
de los fitopatógenos mencionados,si bien se conoce que hay una gran variación en la
sensi-bilidad de las diferentes especies a dicho metabolito. Eneste sentido, se ha
observado que algunos hongos sontolerantes e inclusive se ven estimulados al
incubarlos enatmósferas con elevada concentración de dióxido de car-bono [26], lo
que podría haber ocurrido con R. solani, S.minor y A. citri.Con respecto al etileno,
éste posee una funciónfungistática sobre los microorganismos del suelo que
semanifiesta según las características intrínsecas de cadaecosistema [27]. El
resultado de las experiencias realizadas parecehaber estado mas influenciado por los
contenidos de dió-xido de carbono que de etileno. Por otra parte se observa-ron
modificaciones en el aspecto cultural de algunos delos hongos, como menor
crecimiento micelial o interfe-rencias en la biosíntesis de melaninas. Se ha
comprobadoque la melanización está directamente relacionada con eldesarrollo de
las colonias fúngicas y ciertos metabolitosvolátiles pueden impedir la formación de
estructurasreproductivas, esclerocios y conidios, reduciendo así laeficiencia
patogénica de las mismas. Las melaninas tam-bién están asociadas a la protección
del hongo a la luzUV, desecación, temperaturas extremas y a la resistenciaal ataque
de otros microorganismos. Esporas y miceliohialinos son rápidamente lisados en el
suelo, mientras quecélulas melanizadas pueden sobrevivir por varios años.Muchos
antagonistas que causan lisis de las paredes fún-gicas producen ß1,3-glucanasa y
ß1,6-glucanasa, habién-dose demostrado que la capacidad lítica de esas
enzimasdepende del contenido de melaninas de la especie coloni-zada [28,29]. El
efecto inhibidor de los componentesvolátiles de T. hamatum sobre el oscurecimiento
de lashifas y/o la formación de esclerocios, debería disminuir elpoder infectivo de
algunos de los patógenos estudiados ysugiere su posible aplicación como
mecanismo de biocon-trol. Aunque de acuerdo con Hutchinson [20], es conve-niente
distinguir entre los metabolitos volátiles obtenidosen condiciones controladas de
laboratorio y aquellos pro-ducidos a campo; los resultados in vitrosólo
indicancapacidades potenciales y la medida en que las mismas seexpresarán dentro
de cada ecosistema estará en funcióndel balance entre la producción y la pérdida de
los meta-bolitos, así como de la sensibilidad de los microorganis-mos
involucrados.Tabla 1. Evolución de la composición atmosférica dentro del equipo con elcultivo de
Trichoderma
hamatum.____________________________________________________________DíasCO 2(%)O2(%)C2H4(pp
m)____________________________________________________________00,0321,00,000310,3011,30,6445
21,100,
950,372728,300,80,286____________________________________________________________Ef ecto de los
metabolitos volátiles deT. hamatumsobre hongos del sueloDal Bello GM et al.Figura 2. Porcentajes de
inhibición o estimulación del crecimiento de loshongos fitopatógenos, causados por Trichoderma hamatum.1:
Bipolaris sorokiana; 2: Bipolaris cynodontis; 3: Drechslera tritici-repentis;4: Curvularia oryzae-sativae; 5:
Rhizoctonia solani; 6: Sclerotina minor;7:Alternaria tritici; 8: Curvularia lunata; 9: Curvularia brachispora;
10:Sclerotium rolfsii.

Texto tomado literalmente de

https://s3.amazonaws.com/academia.edu.documents/32143614/Trichoderma_hamatum.pdf?
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