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Ingeniería en Biotecnología
Resumen
El presente artículo tiene como objetivo presentar un análisis detallado sobre
los resultados obtenidos a partir de métodos enzimáticos colorimétricos por
medio de extracción de sangre obtenidos de estudiantes de la Universidad de
las Fuerzas Armadas.
Las Vías metabólicas analizadas fueron aprendidas en la asignatura de
Bioquímica II de la carrera de Ingeniería en Biotecnología y puestas en práctica
en el siguiente artículo.
El informe detalla la evaluación y posibles enfermedades metabólicas, así
como la interpretación clínica de los rangos normales y anormales de las
prácticas elaboradas.
El artículo empieza desde el procedimiento adecuado para una buena
extracción sanguínea, siguiendo con el análisis bioquímico de determinadas
sustancias químicas recolectadas en las muestras tomadas de glucosa,
colesterol, HDL, triglicéridos, urea y ácido úrico. Especificando los datos
obtenidos de los pacientes sujetos a la experimentación, así como las posibles
enfermedades de acuerdo a cada resultado obtenido.
3 4
(UFA, 2016) (HUMAN, 2005)
Posteriormente se rotuló los tubos de
Procedimiento ensayo como: blanco, estándar y muestra.
La dosificación de reactivos y suero
Se realizó la punción venosa y se extrajo 5 sanguíneo, fue la misma que en el
ml de sangre. Se dejó reposar 5 minutos y procedimiento de análisis de glucosa.
se centrifugó por 5 minutos a 5000 r.p.m.
Se incubó a 37 °C por 5 minutos.
Posteriormente se rotuló los tubos de
ensayo como: blanco, estándar y muestra. Se calibró el espectrofotómetro con el blanco
de reactivos. Se determinó las absorbancias
Se incubó a 37 °C por 5 minutos.
de cada muestra y se realizó los cálculos de
Se calibró el espectrofotómetro con agua y la concentración de colesterol.
con el blanco de reactivos. Se determinó las
absorbancias de cada muestra y se realizó ∆𝐴𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝐶 = 200 ∗ [ ]
los cálculos de la concentración de glucosa ∆𝐴𝑆𝑇𝐷 𝑑𝑙
sanguínea.
∆𝐴𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝐶 = 100 ∗ [ ]
∆𝐴𝑆𝑇𝐷 𝑑𝐿
d) HDL6
Método
Tabla 1 Dosis de reactivos y suero sanguíneo
Los quilomicrones, VLDL (Lipoproteínas
de muy baja densidad) y LDL (lipoproteínas
c) Colesterol5 de baja densidad) se precipitan por adición
de ácido fosfotungstico y cloruro de
El colesterol es determinado por la magnesio. Después de centrifugar, el
hidrólisis enzimática y la oxidación. El sobrenadante contiene HDL (lipoproteínas
indicador es la quinoneimina, formado por el de alta densidad), la cual permite determinar
peróxido de hidrógeno y 4-amino-antipirina el colesterol.
en presencia de fenol y Peroxidasa.
CHE
Procedimiento
Esteres de colesterol + H2O
Colesterol + ácidos grasos
Se realizó la punción venosa y se extrajo
Colesterol + O2 CHO
colestene-3-ona + H2O2 5 ml de sangre. Se dejó reposar 5 minutos y
se centrifugó por 5 minutos a 5000 r.p.m.
POD
2H2O2 + 4-aminoantipirina+fenol Posteriormente se rotuló los tubos de
Quinoneimina + 4H2O
ensayo como: blanco, estándar y muestra.
5 6
(HUMAN, CHOLESTEROL liquicolor, 2005) (Unam, 2014)
∆𝐴𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔 ∆𝐴𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝐶 = 150 × [ ] 𝐶 = 200 × [ ]
∆𝐴𝑆𝑇𝐷 𝑑𝐿 ∆𝐴𝑆𝑇𝐷 𝑑𝐿
f) Urea 8
e) Triglicéridos7
Método
Método
La urea es hidrolizada por la ureasa
Los triglicéridos son determinados convirtiéndose en amoniaco y anhídrido
después de la hidrolisis enzimática con carbónico. El amoniaco generado reacciona
lipasas. El indicador es Quinoneimina en medio alcalino con el hipoclorito y el
formada a partir de peróxido de hidrogeno, salicilato sódico en presencia de nitro
4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo prusiato, agente precursor de un cromofero
influencia catalítica de per oxidasa. verde cuya intensidad es proporcional a la
Lipasas
concentración de urea en la muestra.
Triglicéridos
Glicerol+ ácidos grasos Ureasa
Urea+ H2O 2NH3 + 2CO2
GK
Glicerol + ATP Nitro prusiato
NH3+ + Salicilato+ NaClO
Glicerol-3-fosfato + ADP OH-
Indo fenol + NaCl
CHO
Glicerol-3-fosfato + O2
Fosfato dihidroxiacetona+ H2O2 Procedimiento
POD
2H2O2 + 4-aminoantipirina Se realizó la punción venosa y se extrajo
Quinoneimina + HCl+H2O+ 4-clorofenol 5 ml de sangre. Se dejó reposar 5 minutos y
se centrifugó por 5 minutos a 5000 r.p.m.
Posteriormente se rotuló los tubos de
Procedimiento ensayo como: blanco, estándar y muestra.
7 8
(Cenete, 2013) (UNAM, 2010)
Tabla 5 Dosis de reactivos y suero sanguíneo Tabla 6 Dosis de reactivos y suero sanguíneo
g) Ácido Úrico9
3. Fundamento teórico
Método
a) Extracción de sangre
Determinación del ácido úrico por reacción
con la uricasa. El peróxido de hidrogeno La punción venosa sirve para obtener una
formado reacciona por la acción catalítica de mayor cantidad de sangre para las pruebas
la per oxidasa con ácido 3,5-dicloro- hematológicas. Existen venas que permiten
2hydroxibenzensulfonico (DCHBS) y 4- que la extracción sea más fácil ya que
aminofenazona (PAP) para producir un resulta fácil acceder a ellas. (Vena cubital,
complejo rojo-violeta de quinoneimina como vena cefálica, vena basílica) 10 . Existen
indicador. consecuencias notables si la técnica de
extracción sanguínea no es la apropiada,
Uricasa
Ácido úrico+ O2 +2 H2O como la hemolisis y la aparición de
Allantoina + CO2+ H2O2 hematomas.
Peroxidasa
2 H2O2 + DCHBS+ PAP La hemólisis ocurre cuando la técnica
Quinoneimina + HCl+4H2O aplicada no es la apropiada, así como las
condiciones de transporte o la preparación
de muestras, la hemolisis es la principal
Procedimiento
causa de rechazo pre analítico de muestras
de suero 11 . La detección de hemólisis es
Se realizó la punción venosa y se extrajo
visual, pero se están realizando estudios
5 ml de sangre. Se dejó reposar 5 minutos y
para que hemolisis se rechace por métodos
se centrifugó por 5 minutos a 5000 r.p.m.
cuantitativos y no solo por cualitativos.
Posteriormente se rotuló los tubos de
ensayo como: blanco, estándar y muestra. Cuando la técnica de extracción
sanguínea no es la apropiada, se producen
Se incubó a 37 °C por 5 minutos.
acumulaciones de sangre causadas por
Se calibró el espectrofotómetro con agua y hemorragia interna o también llamados
con el blanco de reactivos. Se determinó las hematomas12.
absorbancias de cada muestra y se realizó
los cálculos de la concentración de ácido
b) Glucosa
úrico en sangre.
La glucosa sanguínea es un combustible
∆𝐴𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝐶 = 8× [ ] esencial para diversos tejidos,
∆𝐴𝑆𝑇𝐷 𝑑𝐿
especialmente para las células nerviosas 13.
Por otro lado, la glucosa sanguínea
desempeña un importante papel en el
10
(Blogspot, 2017)
11
(Gómez, 2017)
12
(Enfermera.io, 2013)
9 13
(Hernandez R., 2011) (Viru, 2003)
control metabólico. Las respuestas están De baja densidad (LDL): se encargan de
dirigidas a mantener un nivel constante de transportar nuevo colesterol desde el hígado
glucosa en el plasma sanguíneo14. Todos los a todas las células de nuestro organismo.
carbohidratos y otros alimentos que De alta densidad (HDL): recogen el
ingerimos en la dieta se metabolizan en colesterol no utilizado y lo devuelve al
glucosa por medio de glicólisis. Cuando hígado para su almacenamiento o excreción
nuestro organismo se encuentra en un al exterior a través de la bilis.
estado de ayuno, se activa otra ruta
metabólica para convertir por medio de otros Según esta interacción podemos hablar de
elementos carbonados glucosa15. dos tipos de colesterol:
Existen enfermedades metabólicas por Colesterol malo: el colesterol al unirse a la
una excesiva concentración de glucosa en partícula LDL se deposita en la pared de las
sangre como la Diabetes mellitus, que es arterias y forma las placas de ateroma.
una enfermedad crónica caracterizada por Colesterol bueno: el colesterol al unirse a la
trastornos en el metabolismo de grasas, partícula HDL transporta el exceso de
glúcidos y proteínas. Como consecuencia y colesterol de nuevo al hígado para que sea
síntoma principal de esta enfermedad, existe destruido.
una gran acumulación de glucosa en sangre.
Si sus niveles en sangre se elevan producen
hipercolesterolemia.
c) Colesterol
e) Triglicéridos18
El colesterol es un lípido necesario para el
cuerpo para formar hormonas, vitamina D y Los triglicéridos son la forma de grasa más
común en nuestro cuerpo, y sirven para
ácidos biliares, solo se encuentran en
proporcionar energía al organismo. Cuando
alimentos de origen animal. El colesterol
la cantidad de triglicéridos es elevada, éstos
tiene tres funciones principales: 1) Ayuda a son almacenados en los tejidos adiposos
construir la pared celular externa, fabrica (tejidos grasosos) en caso de ser necesarios
ácidos biliares que ayudan a digerir los en un futuro. Los triglicéridos están
alimentos en los intestinos, producción de presentes en varios alimentos comunes de
vitamina D, producción de estrógenos en nuestra dieta, pero la mayor parte suele ser
mujeres y testosterona en hombres. producida por nuestro hígado. Cuando
comemos carbohidratos en exceso (dulces,
El colesterol fluye por el cuerpo, de una pastas, panes, etc.), el hígado toma esos
manera no tan sencilla. El cuerpo azúcares restantes y los transforma en
empaqueta el colesterol y otros lípidos en triglicéridos, para que puedan ser
partículas llamadas lipoproteínas16. almacenados en los tejidos adiposos,
sirviendo así como reserva energética.
d) HDL17 Los triglicéridos viajan por la corriente
La sangre conduce el colesterol desde el sanguínea acoplados a una proteína llamada
intestino o el hígado hasta los órganos que VLDL, una lipoproteína semejante al HDL y
lo necesitan y lo hace uniéndose a partículas LDL que transporta el colesterol por medio
llamadas lipoproteínas. Existen dos tipos de de la sangre.
lipoproteínas:
Los triglicéridos altos generan
hipertrigliceridemia, la cual representa un
mayor riesgo de desarrollar enfermedades
cardiovasculares, particularmente
14
(Viru, 2003) enfermedades coronarias.
15
(Stryer, 2008)
16
(Mason W. Freeman, 2008)
17 18
(Fundacion del corazon , 2011) (Saude M., 2015)
f) Urea 4. Resultados
La urea es el principal producto de
degradación del metabolismo de las a) Extracción de sangre
proteínas. Durante la digestión las proteínas
Paciente I: La extracción de sangre en el
son separadas en aminoácidos 19 , estos paciente I presentó dificultad, ya que las
contiene nitrógeno que se libera como ión venas no eran muy notorias. Se realizó la
amonio, y el resto de la molécula se utiliza extracción de la vena cefálica del brazo
para generar energía en las células y tejidos. izquierdo. El paciente no presentó dolor
El amonio se une a pequeñas moléculas significativo el momento de la extracción
para producir urea, la cual aparece en la sanguínea, pero al cabo de unas horas se
sangre y es eliminada por la orina. Si el riñón mostró un hematoma en la zona de punción
no funciona bien la urea se acumula en la posiblemente por una extravasación.
sangre y se eleva su concentración.
Paciente II: La extracción de sangre en el
Si la función de filtrado de los riñones paciente II resultó ser más sencilla, la
disminuye, aumenta la concentración de punción venosa se la hizo en la vena
urea en la sangre, y el valor de laboratorio cefálica ya que esta era muy evidente. El
de la urea es mayor. Sin embargo, la torniquete fijó aún más la vena, por lo tanto,
concentración solo aumenta cuando la la extracción se realizó sin ningún problema.
capacidad de filtrado de los riñones es una
Determinación de suero y plasma
cuarta parte más baja de lo normal.
Una elevada concentración de urea en Las muestras tomadas fueron
sangre origina uremia y una disminución centrifugadas para una posible observación
puede causar fallo hepático. de las fases sanguíneas, sin embargo, la
muestra tomada del paciente II presentó
hemolisis posterior a la centrifugación, por lo
g) Ácido úrico20 tanto, se pone a consideración las
condiciones de transporte, preparación de
muestras, incluso el efecto interferente de
El ácido úrico es un químico que se crea
componentes del hematíe 21 . La
cuando el cuerpo descompone sustancias
centrifugación de la muestra del paciente I
llamadas purinas. Las purinas se encuentran
resultó ser exitosa, distinguiéndose muy bien
en algunos alimentos y bebidas. Estos
las fases sanguíneas.
incluyen el hígado, las anchoas, la caballa,
las judías (frijoles) y arvejas (chícharos) b) Glucosa
secas y la cerveza.
La mayor parte del ácido úrico se disuelve Los datos obtenidos resultan de pacientes
en la sangre y viaja a los riñones. Desde ahí de 21 años de edad en estado de ayuno.
sale a través de la orina. Si su cuerpo 𝑷𝒂𝒄𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆 𝑬𝒅𝒂𝒅 𝑨𝒚𝒖𝒏𝒐 𝑺𝒆𝒙𝒐
produce demasiado ácido úrico o no lo
elimina en cantidades suficientes, usted se 𝟏 21 𝑁𝑜 𝐹
puede enfermar. Los niveles altos de ácido
𝟐 21 𝑁𝑜 𝐹
úrico en la sangre se denominan
hiperuricemia.
d) HDL f) Urea
Las muestras recogidas provenientes de los La muestra en este caso solo fue de un
distintos pacientes cumplen las paciente que cumple con las características
características descritas en la Tabla 9. descritas en la Tabla 13.
𝑷𝒂𝒄𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆 𝑬𝒅𝒂𝒅 𝑨𝒚𝒖𝒏𝒐 𝑺𝒆𝒙𝒐 𝑷𝒂𝒄𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆 𝑬𝒅𝒂𝒅 𝑨𝒚𝒖𝒏𝒐 𝑺𝒆𝒙𝒐
𝟏 21 𝑁𝑜 𝐹 𝟏 22 𝑁𝑜 𝐹
22 25
(Gómez, 2017) (HUMAN, Glucose liquicolor, 2005)
23 26
(CCM, 2017) (Mandal, 2017)
24 27
(Blogspot, 2017) (Stryer, 2008)
que la HDL y lo ideal es que las dos se con el desarrollo de ateroesclerosis, que
encuentren equilibradas. El paciente deberá produce estrechamientos en las arterias
tomar medidas para empezar a reducir su coronarias impidiendo que la sangre fluya30,
colesterol, como una dieta rica en fibra y llegando a causar angina de pecho o un
realizar ejercicio regular, preferiblemente ataque cardiaco.
ejercicio aeróbico Estudios han demostrado
que la ingesta de frutos secos estimula la f) Urea
producción de HDL, es recomendable
El resultado obtenido se encuentra dentro
consumir 25 gramos de frutos secos
del rango normal, lo que se explicaría que
naturales diarios28.
hay un óptimo funcionamiento de los riñones
Por otro lado, el Paciente I tiene los , teniendo en cuenta que el cuerpo
niveles de colesterol equilibrados con 140,54 produce en promedio 25 a 30 gramos de
ya que, para empezar a sospechar sobre urea al día y aún más en personas que
este rango, debe estar sobre los 200 mg/dl. mantienen una dieta rica en proteinas, pero
Sin embargo, una dieta balanceada y también toda esta urea debe eliminarse por
ejercicio le ayudara que se mantenga orina; de lo contrario se acumulará en
estable los niveles de colesterol. líquidos corporales generando daños en el
riñon.
d) HDL El aumento de la concentración de urea
Para la determinación de HDL-colesterol principalmente es porque la carga de urea
en sangre se contó con dos pacientes que penetra en túbulos proximales es igual
descritas en la tabla 10. al producto de la concentración plasmática
Tanto la 𝑃1 como la 𝑃2 presentan datos de de urea por la intensidad de filtración
indicadores de riesgo, ya que los valores de glomerular generando insuficiencia renal.
las muestras obtenidas están por debajo de
𝑚𝑔
45 [ 𝑑𝐿 ]. Estos datos nos dan a conocer que
g) Ácido úrico
hay un desorden en el organismo causado Los resultados obtenidos se muestran en
principalmente por la falta de actividad física, equilibrio con respectos al rango de ácido
los cuales pueden causar una disminución úrico normal 2,4-5,7 [mg/dl] en mujeres 31 .
en los niveles de colesterol bueno Por lo tanto, quiere decir que el ácido úrico
Además si existiría un desorden, la mejor se disuelve en sangre y viaja normalmente a
forma de mejorar el funcionamiento es una los riñones para excretarse en forma de
unión de HDL a la cadena β de la ATP sintasa la orina.
cual promovería la generación de ADP, que a su
vez estimula el proceso endocítico de HDL, lo Por otro lado, si los niveles sobrepasaran
que podría ser relevante en el control de la el rango estandarizado, por un exceso de
colesterolemia. producción de ácido úrico o deficiencia en la
eliminación del mismo, ocasionaría una
e) Triglicéridos enfermedad llamada hiperuricemia 32 , el
precursor de la enfermedad de la “gota”.
Existen varios factores para la
La 𝑃1 presento un valor de 245.98 mg/dL
sobreproducción de ácido úrico, como la
teniendo en cuenta que no se encontraba en deficiencia enzimática de hipoxantina-
ayuno mientras que la 𝑃2 presento un valor guanina fosforribosil transferasa lo que
de 213,904 mg/dL con un estado de ayudo, provoca una producción excesiva de urato y
los cuales son valores elevados en purina. Como también la administración de
comparación al rango normal 29 , asociados
30
(U.S.Departement of Health and Human Services, 2016)
28 31
(Pérez, 2017) (HUMAN, 2005)
29 32
(GeoSalud, 2015) (MedlinePlus, 2017)
fármacos dietéticos o toxinas como el etanol,
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